Identification précoce de Candida dans la candidose intra-abdominale (ICCA)
L'étude ICCA (Early Identification of Candida in Intra-abdominal CAndidiasis)
La candidose intra-abdominale reste la première origine de candidose invasive chez les patients gravement malades avec une mortalité pouvant atteindre 60 %. Cette mortalité élevée est en partie liée au retard d'administration des traitements antifongiques. Selon les experts du domaine, de nouvelles méthodes de diagnostic pour détecter rapidement Candida dans les infections intra-abdominales sont obligatoires car les stratégies actuelles souffrent à la fois d'un manque de sensibilité et de spécificité.
Le calscreener (SYMCEL®) est un nouvel outil de diagnostic permettant d'identifier rapidement la présence d'agents pathogènes dans des échantillons biologiques en se basant sur la détection de l'activité micrométabolique.
Le projet ICCA testera la faisabilité, la précision et les performances diagnostiques du calscreener sur une collection biologique existante de liquide péritonéal. Cette collection provenait d'une cohorte de patients gravement malades atteints d'une infection intra-abdominale nécessitant une chirurgie abdominale. Les infections intra-abdominales consistent en une péritonite bactérienne et une candidose intra-abdominale. La présence de pathogènes (bactéries et levures) est déjà connue, le liquide péritonéal étant conservé après analyse de routine (bactériologie/mycologie).
Seule la détection/identification des levures sera investiguée dans ce projet.
Aperçu de l'étude
Statut
Intervention / Traitement
Description détaillée
Le taux de mortalité élevé des patients atteints de candidose intra-abdominale est en partie lié au retard du traitement antifongique. La méthode de référence pour la détection de Candida reste la culture de levure sur milieu mycologique qui souffre d'un temps de réponse retardé (jusqu'à 5 jours).
Par conséquent, en pratique courante, la décision de débuter un traitement antifongique repose sur des scores prédictifs tels que le score de Péritonite. Quel que soit le score, ils souffrent tous d'un manque de sensibilité et de spécificité et pourraient exposer les patients en réanimation à un retard de traitement avec un impact négatif sur la mortalité. Une fois introduit et avant la disponibilité du résultat de la culture, l'antifongique peut être arrêté sur la base de deux dosages sériques de 1,3 beta D Glucan < 80 pg/ml. Cette stratégie permet de rechange anti-fongique. Par conséquent, il existe une marge d'amélioration concernant la détection et l'identification précoces de Candida pour le bon choix d'antifongique.
Le calscreener (SYMCEL®) est un nouvel outil de diagnostic permettant d'identifier rapidement la présence d'agents pathogènes dans des échantillons biologiques en se basant sur la détection de l'activité micrométabolique. L'activité métabolique anticipe la future culture positive. A ce jour, la plupart des expériences avec le calscreenerTM concernent des bactéries. Au cours de la phase de développement, certaines expériences ont été réalisées avec Candida, principalement in vitro. Les données de faisabilité avec des échantillons cliniques tels que le liquide péritonéal font défaut. Par ailleurs, il n'existe actuellement aucune bibliothèque concernant le profil métabolique de Candida, tant chez les espèces albicans que non albicans. Au total, son utilisation en routine est actuellement impossible.
Les premiers résultats (données non publiées de notre équipe) de détection d'activité métabolique dans le liquide péritonéal avec présence connue de Candida ont montré un temps de détection < 1 heure. Nous visons à confirmer ces résultats prometteurs à l'aide d'échantillons biologiques recueillis dans une étude de cohorte en cours. Nous devons d'abord décrire les courbes d'activité métabolique des différentes espèces de Candida afin de constituer une bibliothèque.
Type d'étude
Inscription (Réel)
Contacts et emplacements
Lieux d'étude
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Vandoeuvre les Nancy, France, 54500
- Central Hospital
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
- Enfant
- Adulte
- Adulte plus âgé
Accepte les volontaires sains
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
Dans la présente étude seront utilisés les échantillons cliniques issus de la collection biologique de liquide péritonéal issue de l'étude pBDG2. La présence de Candida de chaque échantillon est connue grâce à une analyse de routine. L'étude p BDG 2 étant déjà en recrutement, seuls les 100 premiers patients du centre "NANCY" seront investigués dans l'ÉTUDE ICCA.
Les résultats obtenus avec le calscreener seront comparés à ceux obtenus par culture de levure pour confirmer la détection de Candida indépendamment et selon les espèces albicans et non albicans.
Enfin le délai de détection avec le calscreener sera comparé au délai de croissance de la culture de levure
La description
Les critères appartiennent à l'étude pBDG2 (Peritoneal 1.3-ß-D-glucan for the Diagnosis of Intra-abdominal Candidiasis in Critically Ill Patients).
Critère d'intégration:
- adulte
- Prise en charge par l'assurance maladie
- Admis en soins intensifs avec une infection intra-abdominale nécessitant une chirurgie abdominale ou un drainage percutané
Critère d'exclusion:
- Femme enceinte ou allaitante
- Patient privé de liberté après administration d'une décision de justice
- Patient sous soins psychiatriques
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
- Modèles d'observation: Cohorte
- Perspectives temporelles: Rétrospective
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
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patients adultes gravement malades avec une infection intra-abdominale
L'étude ICCA est une étude auxiliaire d'une étude de cohorte prospective non interventionnelle (l'étude pBDG2, NCT03997929). L'étude pBDG 2 a recruté des patients en soins intensifs présentant une infection intra-abdominale nécessitant une chirurgie abdominale. Au cours de la chirurgie, du liquide péritonéal a été prélevé pour identifier les agents pathogènes impliqués et guider les thérapies anti-infectieuses. Après les analyses de routine, le liquide péritonéal restant a été stocké pour créer une collection biologique. Cette collection biologique, dont la teneur en bactéries et levures est connue, sera analysée au calscreener. |
Le calscreener (SYMCEL®) est un nouvel outil de diagnostic permettant d'identifier rapidement la présence d'agents pathogènes dans des échantillons biologiques en se basant sur la détection de l'activité micrométabolique.
Toutes les cellules vivantes produisent de la chaleur par les processus chimiques et physiques de la vie ; en surveillant le flux de chaleur dans le temps (J/s, W), une quantité importante d'informations peut être obtenue concernant le système biologique.
Le cal screener permet de mesurer l'activité métabolique des pathogènes directement à partir d'un échantillon (ici, le liquide péritonéal). La production de chaleur sera comparée entre le liquide péritonéal, avec ou sans ajout de bactéries
Pour expliquer l'activité métabolique, la croissance et la transition levure-hyphes seront analysées à l'aide de la microscopie optique et de la culture conventionnelle
Pour expliquer l'activité métabolique, le niveau d'expression de 5 gènes de virulence de Candida albicans (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 et ECE1) sera abordé et comparé entre le liquide péritonéal.
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Détection (Oui/Non) de la présence de Candida dans le liquide péritonéal
Délai: Jour 1 - 3
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Détection par le calscreener : détection d'activité métabolique > 5 µW (selon recommandation SYMCEL)
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Jour 1 - 3
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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Délai (en heures) de détection
Délai: Jour 1 - 3
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Délai (en heures) entre le début de l'analyse calscreener et la première détection d'un flux de chaleur > 5 µW
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Jour 1 - 3
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Autres mesures de résultats
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Production de chaleur (Joule)
Délai: Jour 1 - 3
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Production de chaleur en fonction du liquide péritonéal et de la présence ou non de bactéries
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Jour 1 - 3
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Morphologie de Candida
Délai: Jour 1
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La souche C. albicans SC5314 sera inoculée en triple exemplaire dans un mL des différents liquides péritonéaux, ainsi que des milieux de contrôle (Sabouraud et liquide d'ascite) à une densité optique (DO) de 0,3 nm, correspondant à environ 3.10^6 colonies de C. . albicans par millilitre (C. albicans/mL) de milieu. Des puits témoins contenant uniquement le milieu sans C. albicans ont également été inclus sur la même plaque de 24 puits pour confirmer l'absence de contamination. La plaque 24 puits sera ensemencée et incubée à 37°C sous agitation à 300 RPM pendant 24 heures. La morphologie de C. albicans (levure ou pseudo-hyphes ou hyphes) a été observée au microscope optique toutes les heures pendant les huit premières heures, suivie d'observations à H16 et H24. |
Jour 1
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Croissance des candidoses
Délai: Jour 1
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La souche C. albicans SC5314 sera inoculée en triple exemplaire dans un mL des différents liquides péritonéaux, ainsi que des milieux de contrôle (Sabouraud et liquide d'ascite) à une densité optique (DO) de 0,3 nm, correspondant à environ 3.10^6 colonies de C. . albicans par millilitre (C. albicans/mL) de milieu. Des puits témoins contenant uniquement le milieu sans C. albicans ont également été inclus sur la même plaque de 24 puits pour confirmer l'absence de contamination. La plaque 24 puits sera ensemencée et incubée à 37°C sous agitation à 300 RPM pendant 24 heures. La croissance de C. albicans a été évaluée en inoculant 10 μL de chaque puits sur de la gélose au dextrose SBD, et les colonies ont été comptées après 24 heures d'incubation à 37°C. Pour faciliter le comptage, des dilutions au 1000 de chaque puits inoculé ont été préalablement préparées. |
Jour 1
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Expression du gène de la virulence de Candida
Délai: Jour 1
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L'inoculation de C. albicans dans les différents milieux a suivi le même protocole que pour l'évaluation phénotypique, avec une nuit de culture de 24h avant l'analyse de l'expression génique.
Les cinq gènes de virulence d'intérêt sont UME6, ALS3, SFL2, HWP1 et ECE1.
Après la culture d'une nuit de 24 heures, les échantillons seront centrifugés pour ne conserver que le culot cellulaire.
Le culot cellulaire a ensuite été lavé deux fois avec 10 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS).
Par la suite, le PBS a été retiré, ne laissant que le culot cellulaire.
L'extraction de l'ARN sera réalisée à l'aide de la technologie de lyse FASTREPE®.
La transcription inverse sera effectuée à l'aide du kit QuantiTect Reverse Transcription de Qiagen® (Germantown, Maryland, États-Unis) en suivant les instructions du fabricant.
La qPCR a été réalisée dans des plaques de réaction MicroAmp Optical à 96 puits (Applied Biosystems) à l'aide du système de PCR en temps réel CFX96 (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, France).
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Jour 1
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Collaborateurs
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Réel)
Achèvement de l'étude (Réel)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- 2021PI051
Plan pour les données individuelles des participants (IPD)
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