腹腔内念珠菌病中念珠菌的早期识别 (ICCA)
ICCA 研究（腹腔内念珠菌病中念珠菌的早期鉴定）
腹腔内念珠菌病仍然是危重患者侵袭性念珠菌病的首位病原体，病死率高达60%。 这种高死亡率部分与抗真菌治疗给药的延迟有关。 据该领域的专家称，在腹腔内感染中快速检测念珠菌的新诊断方法是强制性的，因为目前的策略缺乏敏感性和特异性。
Calscreener (SYMCEL®) 是一种新的诊断工具，可根据微代谢活动检测快速识别生物样品中病原体的存在。
ICCA 项目将测试 calscreener 在现有腹膜液生物收集上的可行性、准确性和诊断性能。 该集合来自一组需要腹部手术的腹腔内感染重症患者。 腹腔内感染包括细菌性腹膜炎和腹腔内念珠菌病。 病原体（细菌和酵母菌）的存在是已知的，腹膜液在常规分析（细菌学/真菌学）后被储存。
本项目仅研究酵母的检测/鉴定。
研究概览
详细说明
腹腔内念珠菌感染患者的高死亡率部分与延误抗真菌治疗有关。 念珠菌检测的金标准方法仍然是真菌培养基上的酵母培养物，其响应时间延迟（最多 5 天）。
因此，在常规实践中，开始抗真菌治疗的决定是基于腹膜炎评分等预测评分。 无论得分如何，它们都缺乏敏感性和特异性，可能会使 ICU 患者延迟治疗，从而对死亡率产生负面影响。 一旦引入并且在获得培养结果之前，可以根据 1,3 β D 葡聚糖 < 80 pg/ml 的两种血清测量值停止抗真菌。 这种策略可以让抗真菌备用。 因此，在正确选择抗真菌药物的早期念珠菌检测和鉴定方面存在改进空间。
Calscreener (SYMCEL®) 是一种新的诊断工具，可根据微代谢活动检测快速识别生物样品中病原体的存在。 新陈代谢活动预示着未来的积极文化。 迄今为止，大多数使用 calscreenerTM 进行的实验都涉及细菌。 在开发阶段，已经用念珠菌进行了一些实验，主要是在体外。 缺乏临床样本（如腹膜液）的可行性数据。 此外，目前还没有关于白色念珠菌和非白色念珠菌物种中念珠菌代谢概况的图书馆。 总而言之，它的日常使用目前是不可能的。
已知存在念珠菌的腹膜液中代谢活性检测的第一个结果（我们团队未发表的数据）显示检测时间小于 1 小时。 我们的目标是使用在正在进行的队列研究中收集的生物样本来确认这些有希望的结果。 我们首先需要描述不同念珠菌属物种的代谢活性曲线，以构成一个库。
研究类型
注册 (实际的)
联系人和位置
学习地点
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Vandoeuvre les Nancy、法国、54500
- Central Hospital
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
- 孩子
- 成人
- 年长者
接受健康志愿者
取样方法
研究人群
在本研究中，将使用来自 pBDG2 研究的腹膜液生物学收集的临床样本。 由于常规分析，每个样本的念珠菌的存在都是已知的。 由于 p BDG 2 研究已经开始招募，因此只有来自“NANCY”中心的 100 名首批患者将在 ICCA 研究中接受调查。
将使用 calscreener 获得的结果与通过酵母培养获得的结果进行比较，以确认念珠菌检测，而不管并取决于白色念珠菌和非白色念珠菌物种。
最后，将用 calscreener 检测的延迟与酵母培养物的生长延迟进行比较
描述
该标准属于 pBDG2 研究（腹膜 1.3-ß-D-葡聚糖用于危重患者腹腔内念珠菌病的诊断）。
纳入标准：
- 成人
- 由健康保险覆盖
- 因腹腔内感染入住 ICU，需要进行腹部手术或经皮引流
排除标准：
- 孕妇或哺乳期妇女
- 执行司法决定后被剥夺自由的病人
- 接受精神科治疗的病人
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
- 观测模型：队列
- 时间观点：追溯
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
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腹腔内感染的危重成年患者
ICCA 研究是一项非干预性前瞻性队列研究（pBDG2 研究，NCT03997929）的辅助研究。pBDG2 研究招募了需要进行腹部手术的腹腔内感染的 ICU 患者。 在手术过程中，已收集腹膜液以鉴定所涉及的病原体并指导抗感染治疗。 在常规分析之后，剩余的腹膜液被储存起来以创建一个生物集合。 将使用 calscreener 分析这种生物收集品，其中细菌和酵母菌的含量是已知的。 |
Calscreener (SYMCEL®) 是一种新的诊断工具，可根据微代谢活动检测快速识别生物样品中病原体的存在。
所有活细胞都通过生命的化学和物理过程产生热量；通过监测随时间变化的热流 (J/s, W)，可以获得有关生物系统的大量信息。
cal 筛选器可以直接从样本（此处为腹膜液）测量病原体的代谢活性。 将比较添加或不添加细菌的腹膜液之间的产热量
为了解释代谢活动，将使用光学显微镜和常规培养来分析生长和酵母菌向菌丝的转变
为了解释代谢活性，将处理并比较腹膜液中 5 种白色念珠菌毒力基因（UME6、ALS3、SFL2、HWP1 和 ECE1）的表达水平。
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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检测（是/否）腹膜液中是否存在念珠菌
大体时间：第 1 - 3 天
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Calscreener 检测：检测代谢活动 > 5 µW（根据 SYMCEL 推荐）
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第 1 - 3 天
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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检测延迟（小时）
大体时间：第 1 - 3 天
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从 Calscreener 分析开始到首次检测到热流 > 5 µW 的延迟（以小时为单位）
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第 1 - 3 天
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其他结果措施
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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产热量（焦耳）
大体时间：第 1 - 3 天
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产热取决于腹膜液和细菌的存在与否
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第 1 - 3 天
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念珠菌形态
大体时间：第一天
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将白色念珠菌 SC5314 菌株一式三份接种到 1 mL 的不同腹膜液以及对照培养基（沙氏液和腹水）中，光密度 (OD) 为 0.3 nm，对应于大约 3.10^6 个白色念珠菌菌落. 每毫升白色念珠菌 (C. 白色念珠菌/mL）的培养基。 仅含有不含白色念珠菌的培养基的对照孔也包含在同一 24 孔板上，以确认不存在污染。 将接种 24 孔板并在 37°C 下以 300 RPM 摇动孵育 24 小时。 在最初的 8 小时内，每小时一次在光学显微镜下观察白色念珠菌（酵母或假菌丝或菌丝）的形态，随后在 H16 和 H24 进行观察。 |
第一天
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念珠菌生长
大体时间：第一天
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将白色念珠菌 SC5314 菌株一式三份接种到 1 mL 的不同腹膜液以及对照培养基（沙氏液和腹水）中，光密度 (OD) 为 0.3 nm，对应于大约 3.10^6 个白色念珠菌菌落. 每毫升白色念珠菌 (C. 白色念珠菌/mL）的培养基。 仅含有不含白色念珠菌的培养基的对照孔也包含在同一 24 孔板上，以确认不存在污染。 将接种 24 孔板并在 37°C 下以 300 RPM 摇动孵育 24 小时。 通过将每孔中的 10 μL 接种到 SBD 葡萄糖琼脂上来评估白色念珠菌的生长，并在 37°C 孵育 24 小时后对菌落进行计数。 为了便于计数，预先将每个接种孔制备1000倍稀释液。 |
第一天
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念珠菌毒力基因表达
大体时间：第一天
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不同培养基中白色念珠菌的接种遵循与表型评估相同的方案，在基因表达分析之前过夜培养 24 小时。
感兴趣的五个毒力基因是 UME6、ALS3、SFL2、HWP1 和 ECE1。
24小时过夜培养后，将样品离心以仅保留细胞沉淀。
然后用 10 mL 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 洗涤细胞沉淀两次。
随后，除去 PBS，仅留下细胞沉淀。
RNA 提取将使用 FASTPREP® 裂解技术进行。
将使用 Qiagen®（美国马里兰州日耳曼敦）的 QuantiTect 逆转录试剂盒按照制造商的说明进行逆转录。
使用 CFX96 实时 PCR 系统（Bio-Rad，Marnes-la Coquette，法国）在 MicroAmp 光学 96 孔反应板（Applied Biosystems）中进行 qPCR。
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第一天
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合作者和调查者
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (实际的)
初级完成 (实际的)
研究完成 (实际的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
更多信息
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