Identificação Precoce de Candida na Candidíase Intra-abdominal (ICCA)
O estudo ICCA (Early Identification of Candida in Intra-abdominal CAndidiasis)
A candidíase intra-abdominal continua sendo a primeira origem da candidíase invasiva em pacientes críticos com mortalidade de até 60%. Essa alta mortalidade está parcialmente relacionada ao atraso na administração do tratamento antifúngico. De acordo com especialistas da área, novos métodos de diagnóstico para detectar rapidamente Candida em infecções intra-abdominais são obrigatórios porque as estratégias atuais sofrem de falta de sensibilidade e especificidade.
O calscreener (SYMCEL®) é uma nova ferramenta de diagnóstico para identificar rapidamente a presença de patógenos em amostras biológicas com base na detecção de atividade micrometabólica.
O projeto ICCA testará a viabilidade, a precisão e o desempenho diagnóstico do calscreener em uma coleção biológica existente de fluido peritoneal. Esta coleção veio de uma coorte de pacientes gravemente enfermos com infecção intra-abdominal que exigiu cirurgia abdominal. As infecções intra-abdominais consistem em peritonite bacteriana e candidíase intra-abdominal. A presença de patógenos (bactérias e leveduras) já é conhecida, sendo o líquido peritoneal armazenado após análises de rotina (bacteriologia/micologia).
Apenas a detecção/identificação de leveduras será investigada neste projeto.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A alta taxa de mortalidade de pacientes com infecção intra-abdominal por candidíase está parcialmente relacionada ao atraso no tratamento antifúngico. O método padrão-ouro para detecção de Candida continua sendo a cultura de levedura em meio micológico que sofre de um tempo de resposta retardado (até 5 dias).
Consequentemente, na prática de rotina, a decisão de iniciar um tratamento antifúngico é baseada em escores preditivos, como o escore de peritonite. Qualquer que seja o escore, todos sofrem de falta de sensibilidade e especificidade e podem expor pacientes de UTI a atrasos no tratamento com impacto negativo na mortalidade. Uma vez introduzido e antes da disponibilidade do resultado da cultura, o antifúngico pode ser interrompido com base em duas dosagens séricas de 1,3 beta D Glucan < 80 pg/ml. Essa estratégia permite a reposição de antifúngicos. Portanto, há espaço para melhorias em relação à detecção e identificação precoce de Candida para a escolha correta do antifúngico.
O calscreener (SYMCEL®) é uma nova ferramenta de diagnóstico para identificar rapidamente a presença de patógenos em amostras biológicas com base na detecção de atividade micrometabólica. A atividade metabólica antecipa a futura cultura positiva. Até o momento, a maioria dos experimentos com o calscreenerTM diz respeito a bactérias. Durante a fase de desenvolvimento, alguns experimentos foram realizados com Candida, principalmente in vitro. Faltam dados de viabilidade com amostras clínicas, como o líquido peritoneal. Além disso, atualmente não existe uma biblioteca sobre o perfil metabólico de Candida, tanto em espécies albicans quanto não albicans. Em suma, seu uso rotineiro é atualmente impossível.
Os primeiros resultados (dados inéditos de nossa equipe) de detecção de atividade metabólica em líquido peritoneal com presença conhecida de Candida mostraram uma detecção de tempo <1 hora. Nosso objetivo é confirmar esses resultados promissores usando amostras biológicas coletadas em um estudo de coorte em andamento. Primeiro precisamos descrever as curvas de atividade metabólica de diferentes espécies de Candida para constituir uma biblioteca.
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Vandoeuvre les Nancy, França, 54500
- Central Hospital
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Filho
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Método de amostragem
População do estudo
No presente estudo serão utilizadas as amostras clínicas provenientes da coleção biológica de líquido peritoneal provenientes do estudo pBDG2. A presença de Candida de cada amostra é conhecida graças à análise de rotina. Como o estudo p BDG 2 já está recrutando, apenas os 100 primeiros pacientes do centro "NANCY" serão investigados no ESTUDO ICCA.
Os resultados obtidos com o calscreener serão comparados com os obtidos por cultura de leveduras para confirmar a detecção de Candida independente e dependendo das espécies albicans e não albicans.
Por fim, o atraso de detecção com o calscreener será comparado ao atraso de crescimento da cultura de levedura
Descrição
Os critérios pertencem ao estudo pBDG2 (Peritoneal 1.3-ß-D-glucan for the Diagnosis of Intra-abdominal Candidiasis in Critically Ill Patients).
Critério de inclusão:
- adulto
- Coberto pelo seguro de saúde
- Admitido em UTI com infecção intra-abdominal necessitando de cirurgia abdominal ou drenagem percutânea
Critério de exclusão:
- Mulher grávida ou lactante
- Paciente privado de liberdade após administração de decisão judicial
- Paciente em acompanhamento psiquiátrico
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Modelos de observação: Coorte
- Perspectivas de Tempo: Retrospectivo
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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pacientes adultos em estado crítico com infecção intra-abdominal
O estudo ICCA é um estudo auxiliar de um estudo de coorte prospectivo não intervencional (estudo pBDG2, NCT03997929). O estudo pBDG 2 inscreveu pacientes de UTI com infecção intra-abdominal que requerem cirurgia abdominal. Durante a cirurgia, o líquido peritoneal foi coletado para identificar os patógenos envolvidos e orientar as terapias anti-infecciosas. Após as análises de rotina, o líquido peritoneal remanescente foi armazenado para formar uma coleção biológica. Essa coleção biológica, na qual se conhece o conteúdo de bactérias e leveduras, será analisada com o calscreener. |
O calscreener (SYMCEL®) é uma nova ferramenta de diagnóstico para identificar rapidamente a presença de patógenos em amostras biológicas com base na detecção de atividade micrometabólica.
Todas as células vivas produzem calor pelos processos químicos e físicos da vida; monitorando o fluxo de calor ao longo do tempo (J/s, W) uma quantidade significativa de informação pode ser obtida sobre o sistema biológico.
O cal screener permite a medição da atividade metabólica de patógenos diretamente de uma amostra (aqui, o líquido peritoneal). A produção de calor será comparada entre líquido peritoneal, com ou sem adição de bactérias
Para explicar a atividade metabólica, o crescimento e a transição levedura-hifa serão analisados usando microscopia óptica e cultura convencional
Para explicar a atividade metabólica, o nível de expressão de 5 genes de virulência de Candida albicans (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 e ECE1) será abordado e comparado entre fluido peritoneal.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Detecção (Sim/Não) da presença de Candida no líquido peritoneal
Prazo: Dia 1 - 3
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Detecção pelo calscreener: detecção de atividade metabólica > 5 µW (de acordo com a recomendação SYMCEL)
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Dia 1 - 3
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Atraso (em horas) de detecção
Prazo: Dia 1 - 3
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Atraso (em horas) desde o início da análise do calscreener até a primeira detecção de fluxo de calor > 5 µW
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Dia 1 - 3
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Outras medidas de resultado
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Produção de calor (Joule)
Prazo: Dia 1 - 3
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Produção de calor em função do líquido peritoneal e da presença ou ausência de bactérias
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Dia 1 - 3
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Morfologia de Candida
Prazo: Dia 1
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A cepa de C. albicans SC5314 será inoculada em triplicata em um mL dos diferentes fluidos peritoneais, bem como meios de controle (Sabouraud e fluido ascítico) a uma densidade óptica (DO) de 0,3 nm, correspondendo a aproximadamente 3,10^6 colônias de C. . albicans por mililitro (C. albicans/mL) de mídia. Os poços de controle contendo apenas o meio sem C. albicans também foram incluídos na mesma placa de 24 poços para confirmar a ausência de contaminação. A placa de 24 poços será inoculada e incubada a 37°C com agitação a 300 RPM por 24 horas. A morfologia de C. albicans (levedura ou pseudo-hifas ou hifas) foi observada ao microscópio de luz em intervalos de uma hora durante as oito horas iniciais, seguidas de observações em H16 e H24. |
Dia 1
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Crescimento de cândida
Prazo: Dia 1
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A cepa de C. albicans SC5314 será inoculada em triplicata em um mL dos diferentes fluidos peritoneais, bem como meios de controle (Sabouraud e fluido ascítico) a uma densidade óptica (DO) de 0,3 nm, correspondendo a aproximadamente 3,10^6 colônias de C. . albicans por mililitro (C. albicans/mL) de mídia. Os poços de controle contendo apenas o meio sem C. albicans também foram incluídos na mesma placa de 24 poços para confirmar a ausência de contaminação. A placa de 24 poços será inoculada e incubada a 37°C com agitação a 300 RPM por 24 horas. O crescimento de C. albicans foi avaliado pela inoculação de 10 μL de cada poço em ágar SBD dextrose, e as colônias foram contadas após 24 horas de incubação a 37°C. Para facilitar a contagem, diluições de 1000 vezes de cada poço inoculado foram preparadas previamente. |
Dia 1
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Expressão gênica de virulência de Candida
Prazo: Dia 1
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A inoculação de C. albicans nos diferentes meios seguiu o mesmo protocolo da avaliação fenotípica, com cultivo noturno de 24h antes da análise da expressão gênica.
Os cinco genes de virulência de interesse são UME6, ALS3, SFL2, HWP1 e ECE1.
Após o cultivo noturno de 24 horas, as amostras serão centrifugadas para reter apenas o pellet celular.
O sedimento celular foi então lavado duas vezes com 10 mL de solução salina tamponada com fosfato (PBS).
Posteriormente, o PBS foi removido, deixando para trás apenas o pellet celular.
A extração de RNA será realizada utilizando a tecnologia de lise FASTPREP®.
A transcrição reversa será realizada com o kit QuantiTect Reverse Transcription da Qiagen® (Germantown, Maryland, Estados Unidos) seguindo as instruções do fabricante.
A qPCR foi realizada em MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plates (Applied Biosystems) usando o CFX96 Real-Time PCR System (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, França).
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Dia 1
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 2021PI051
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
produto fabricado e exportado dos EUA
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