Identificazione precoce della candida nella candidosi intraddominale (ICCA)
Lo studio ICCA (Identificazione precoce della Candida nella CAndidiasi intraddominale)
La candidosi intraddominale rimane la prima origine della candidosi invasiva nei pazienti critici con una mortalità fino al 60%. Questa elevata mortalità è in parte correlata al ritardo nella somministrazione del trattamento antimicotico. Secondo gli esperti del settore, i nuovi metodi diagnostici per rilevare rapidamente la Candida nelle infezioni intra-addominali sono obbligatori perché le attuali strategie soffrono di una mancanza sia di sensibilità che di specificità.
Il calscreener (SYMCEL®) è un nuovo strumento diagnostico per identificare rapidamente la presenza di agenti patogeni in campioni biologici in base al rilevamento dell'attività micrometabolica.
Il progetto ICCA testerà la fattibilità, l'accuratezza e le prestazioni diagnostiche del calscreener su una raccolta biologica esistente di liquido peritoneale. Questa raccolta proveniva da una coorte di pazienti in condizioni critiche con infezione intra-addominale che richiedeva un intervento chirurgico addominale. Le infezioni intraddominali consistono in peritonite batterica e candidosi intraddominale. La presenza di agenti patogeni (batteri e lieviti) è già nota, il liquido peritoneale viene immagazzinato dopo analisi di routine (batteriologia/micologia).
In questo progetto verrà studiato solo il rilevamento/identificazione del lievito.
Panoramica dello studio
Stato
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
L'alto tasso di mortalità dei pazienti con infezione da candidosi intraddominale è in parte correlato al ritardo nel trattamento antimicotico. Il metodo gold standard per il rilevamento della Candida rimane la coltura del lievito su terreno micologico che soffre di un tempo di risposta ritardato (fino a 5 giorni).
Di conseguenza, nella pratica di routine, la decisione di iniziare un trattamento antimicotico si basa su punteggi predittivi come il punteggio di peritonite. Qualunque sia il punteggio, tutti soffrono di una mancanza di sensibilità e specificità e potrebbero esporre i pazienti in terapia intensiva a un trattamento ritardato con un impatto negativo sulla mortalità. Una volta introdotto e prima della disponibilità del risultato della coltura, l'antimicotico può essere interrotto sulla base di due misurazioni sieriche di 1,3 beta D Glucano < 80 pg/ml. Questa strategia consente un ricambio antimicotico. Pertanto, c'è un margine di miglioramento per quanto riguarda il rilevamento e l'identificazione precoce della Candida per la giusta scelta dell'antimicotico.
Il calscreener (SYMCEL®) è un nuovo strumento diagnostico per identificare rapidamente la presenza di agenti patogeni in campioni biologici in base al rilevamento dell'attività micrometabolica. L'attività metabolica anticipa la futura coltura positiva. Ad oggi, la maggior parte degli esperimenti con il calscreenerTM riguarda i batteri. Durante la fase di sviluppo, sono stati eseguiti alcuni esperimenti con Candida, per lo più in vitro. Mancano dati di fattibilità con campioni clinici come il liquido peritoneale. Inoltre, attualmente non esiste una libreria relativa al profilo metabolico di Candida, sia nelle specie albicans che non albicans. Tutto sommato, il suo uso di routine è attualmente impossibile.
I primi risultati (dati non pubblicati dal nostro team) del rilevamento dell'attività metabolica nel fluido peritoneale con presenza nota di Candida hanno mostrato un tempo di rilevamento <1 ora. Miriamo a confermare questi risultati promettenti utilizzando campioni biologici raccolti in uno studio di coorte in corso. Per prima cosa dobbiamo descrivere le curve di attività metabolica di diverse specie di Candida per costituire una libreria.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Contatti e Sedi
Contatto studio
- Nome: Medhi EL SIAGHY
- Numero di telefono: +33 3 83 15 52 85
- Email: m.siaghy@chru-nancy.fr
Luoghi di studio
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Vandoeuvre les Nancy, Francia, 54500
- Central Hospital
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
- Bambino
- Adulto
- Adulto più anziano
Accetta volontari sani
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Nel presente studio verranno utilizzati i campioni clinici provenienti dalla raccolta biologica di liquido peritoneale emessi dallo studio pBDG2. La presenza di Candida di ciascun campione è nota grazie alle analisi di routine. Poiché lo studio p BDG 2 sta già reclutando, solo i primi 100 pazienti del centro "NANCY" saranno esaminati nello STUDIO ICCA.
I risultati ottenuti con il calscreener saranno confrontati con quelli ottenuti dalla coltura del lievito per confermare la rilevazione di Candida indipendentemente ea seconda delle specie albicans e non albicans.
Infine il ritardo di rilevamento con il calscreener sarà confrontato con il ritardo di crescita della coltura del lievito
Descrizione
I criteri appartengono allo studio pBDG2 (Peritoneal 1.3-ß-D-glucan for the Diagnosis of Intra-addominal Candidiasis in Critically Ill Patients).
Criterio di inclusione:
- adulto
- Coperto da assicurazione sanitaria
- Ricoverato in terapia intensiva con infezione intra-addominale che richiede chirurgia addominale o drenaggio percutaneo
Criteri di esclusione:
- Donna incinta o in allattamento
- Paziente privato della libertà dopo la somministrazione della decisione giudiziaria
- Paziente in cura psichiatrica
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Modelli osservazionali: Coorte
- Prospettive temporali: Retrospettiva
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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pazienti adulti in condizioni critiche con infezione intra-addominale
Lo studio ICCA è uno studio accessorio di uno studio di coorte prospettico non interventistico (lo studio pBDG2, NCT03997929). Lo studio pBDG 2 ha arruolato pazienti in terapia intensiva con infezione intra-addominale che richiedeva un intervento chirurgico addominale. Durante l'intervento è stato raccolto il liquido peritoneale per identificare i patogeni coinvolti e guidare le terapie antinfettive. Dopo le analisi di routine, il fluido peritoneale residuo è stato conservato per creare una raccolta biologica. Questa collezione biologica, nella quale è noto il contenuto di batteri e lieviti, sarà analizzata con il calscreener. |
Il calscreener (SYMCEL®) è un nuovo strumento diagnostico per identificare rapidamente la presenza di agenti patogeni in campioni biologici in base al rilevamento dell'attività micrometabolica.
Tutte le cellule viventi producono calore mediante i processi chimici e fisici della vita; monitorando il flusso di calore nel tempo (J/s, W) è possibile ottenere una notevole quantità di informazioni sul sistema biologico.
Il cal screener consente la misurazione dell'attività metabolica dei patogeni direttamente da un campione (qui, il liquido peritoneale). La produzione di calore sarà confrontata tra fluido peritoneale, con o senza aggiunta di batteri
Per spiegare l'attività metabolica, la crescita e la transizione da lievito a ife saranno analizzate mediante microscopia ottica e coltura convenzionale
Per spiegare l'attività metabolica, il livello di espressione di 5 geni di virulenza di Candida albicans (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 e ECE1) sarà preso in considerazione e confrontato nel liquido peritoneale.
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Rilevazione (Si/No) della presenza di Candida nel liquido peritoneale
Lasso di tempo: Giorno 1 - 3
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Rilevamento da parte del calscreener: rilevamento dell'attività metabolica > 5 µW (secondo la raccomandazione SYMCEL)
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Giorno 1 - 3
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Ritardo (in ore) di rilevamento
Lasso di tempo: Giorno 1 - 3
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Ritardo (in ore) dall'inizio dell'analisi calscreener al primo rilevamento del flusso di calore > 5 µW
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Giorno 1 - 3
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Altre misure di risultato
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Produzione di calore (Joule)
Lasso di tempo: Giorno 1 - 3
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Produzione di calore in funzione del liquido peritoneale e della presenza o assenza di batteri
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Giorno 1 - 3
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Morfologia candida
Lasso di tempo: Giorno 1
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Il ceppo di C. albicans SC5314 sarà inoculato in triplicato in un mL del diverso fluido peritoneale, così come nei terreni di controllo (Sabouraud e fluido ascitico) ad una densità ottica (OD) di 0.3 nm, corrispondente a circa 3.10^6 colonie di C. albicans per millilitro (C. albicans/mL) di terreno. Sulla stessa piastra a 24 pozzetti sono stati inclusi anche i pozzetti di controllo contenenti solo i terreni senza C. albicans per confermare l'assenza di contaminazione. La piastra a 24 pozzetti sarà inoculata e incubata a 37°C con agitazione a 300 RPM per 24 ore. La morfologia di C. albicans (lievito o pseudo-ife o ife) è stata osservata al microscopio ottico a intervalli di un'ora per le prime otto ore, seguita da osservazioni a H16 e H24. |
Giorno 1
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Crescita della candida
Lasso di tempo: Giorno 1
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Il ceppo di C. albicans SC5314 sarà inoculato in triplicato in un mL del diverso fluido peritoneale, così come nei terreni di controllo (Sabouraud e fluido ascitico) ad una densità ottica (OD) di 0.3 nm, corrispondente a circa 3.10^6 colonie di C. albicans per millilitro (C. albicans/mL) di terreno. Sulla stessa piastra a 24 pozzetti sono stati inclusi anche i pozzetti di controllo contenenti solo i terreni senza C. albicans per confermare l'assenza di contaminazione. La piastra a 24 pozzetti sarà inoculata e incubata a 37°C con agitazione a 300 RPM per 24 ore. La crescita di C. albicans è stata valutata inoculando 10 μL da ciascun pozzetto su agar destrosio SBD e le colonie sono state contate dopo 24 ore di incubazione a 37°C. Per facilitare il conteggio, sono state preparate in anticipo diluizioni di 1000 volte di ciascun pozzetto inoculato. |
Giorno 1
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Espressione genica della virulenza della candida
Lasso di tempo: Giorno 1
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L'inoculazione di C. albicans nei diversi media ha seguito lo stesso protocollo della valutazione fenotipica, con una coltura durante la notte di 24 ore prima dell'analisi dell'espressione genica.
I cinque geni di virulenza di interesse sono UME6, ALS3, SFL2, HWP1 ed ECE1.
Dopo la coltura notturna di 24 ore, i campioni saranno centrifugati per conservare solo il pellet cellulare.
Il pellet cellulare è stato quindi lavato due volte con 10 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS).
Successivamente, il PBS è stato rimosso, lasciando solo il pellet cellulare.
L'estrazione dell'RNA sarà eseguita utilizzando la tecnologia di lisi FASTPREP®.
La trascrizione inversa verrà eseguita utilizzando il kit QuantiTect Reverse Transcription di Qiagen® (Germantown, Maryland, Stati Uniti) seguendo le istruzioni del produttore.
La qPCR è stata eseguita in piastre di reazione a 96 pozzetti MicroAmp Optical (Applied Biosystems) utilizzando il sistema PCR in tempo reale CFX96 (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, Francia).
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Giorno 1
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Collaboratori
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (Effettivo)
Completamento primario (Effettivo)
Completamento dello studio (Effettivo)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- 2021PI051
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