Wczesna identyfikacja Candida w kandydozie jamy brzusznej (ICCA)
Badanie ICCA (wczesna identyfikacja Candida w candydozie wewnątrzbrzusznej)
Kandydoza wewnątrzbrzuszna pozostaje pierwszym źródłem inwazyjnej kandydozy u pacjentów w stanie krytycznym, ze śmiertelnością sięgającą 60%. Ta wysoka śmiertelność jest częściowo związana z opóźnieniem podania leczenia przeciwgrzybiczego. Według ekspertów w tej dziedzinie nowe metody diagnostyczne umożliwiające szybkie wykrywanie Candida w zakażeniach w obrębie jamy brzusznej są konieczne, ponieważ obecne strategie cierpią na brak zarówno czułości, jak i swoistości.
Calscreener (SYMCEL®) to nowe narzędzie diagnostyczne do szybkiej identyfikacji obecności patogenów w próbkach biologicznych w oparciu o wykrywanie aktywności mikrometabolicznej.
Projekt ICCA przetestuje wykonalność, dokładność i wydajność diagnostyczną calscreenera na istniejącym biologicznym zbiorze płynu otrzewnowego. Ta kolekcja pochodziła od kohorty krytycznie chorych pacjentów z infekcją w obrębie jamy brzusznej, która wymagała operacji jamy brzusznej. Zakażenia w obrębie jamy brzusznej obejmują bakteryjne zapalenie otrzewnej i kandydozę w obrębie jamy brzusznej. Obecność patogenów (bakterii i drożdżaków) jest już znana, płyn otrzewnowy jest przechowywany po rutynowej analizie (bakteriologia/mikologia).
W ramach tego projektu zbadane zostanie jedynie wykrywanie/identyfikacja drożdży.
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Wysoka śmiertelność pacjentów z zakażeniem kandydozą jamy brzusznej jest częściowo związana z opóźnieniem w leczeniu przeciwgrzybiczym. Złotym standardem metody wykrywania Candida pozostaje hodowla drożdży na podłożach mikologicznych, które charakteryzują się opóźnionym czasem reakcji (do 5 dni).
W związku z tym w rutynowej praktyce decyzja o rozpoczęciu leczenia przeciwgrzybiczego opiera się na wynikach predykcyjnych, takich jak wskaźnik zapalenia otrzewnej. Niezależnie od wyniku, wszystkie cierpią na brak czułości i swoistości i mogą narazić pacjentów OIOM na opóźnione leczenie, co ma negatywny wpływ na śmiertelność. Po wprowadzeniu i przed udostępnieniem wyniku hodowli, podawanie środka przeciwgrzybiczego można przerwać na podstawie dwóch pomiarów w surowicy 1,3 beta-D-glukanu < 80 pg/ml. Strategia ta umożliwia przeciwgrzybicze zapasowe. Istnieje zatem pole do ulepszeń w zakresie wczesnego wykrywania Candida i identyfikacji w celu właściwego doboru środka przeciwgrzybiczego.
Calscreener (SYMCEL®) to nowe narzędzie diagnostyczne do szybkiej identyfikacji obecności patogenów w próbkach biologicznych w oparciu o wykrywanie aktywności mikrometabolicznej. Aktywność metaboliczna przewiduje przyszłą pozytywną kulturę. Do tej pory większość eksperymentów z calscreenerem dotyczy bakterii. W fazie rozwoju przeprowadzono pewne eksperymenty z Candida, głównie in vitro. Brakuje danych dotyczących wykonalności z próbkami klinicznymi, takimi jak płyn otrzewnowy. Poza tym obecnie nie ma biblioteki dotyczącej profilu metabolicznego Candida, zarówno u gatunków albicans, jak i non-albicans. W sumie jego rutynowe stosowanie jest obecnie niemożliwe.
Pierwsze wyniki (niepublikowane dane naszego zespołu) wykrywania aktywności metabolicznej w płynie otrzewnowym przy znanej obecności Candida wykazały czas wykrywania <1 godzina. Naszym celem jest potwierdzenie tych obiecujących wyników przy użyciu próbek biologicznych zebranych w ramach trwającego badania kohortowego. Najpierw musimy opisać krzywe aktywności metabolicznej różnych gatunków Candida, aby stworzyć bibliotekę.
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Kontakty i lokalizacje
Kontakt w sprawie studiów
- Nazwa: Medhi EL SIAGHY
- Numer telefonu: +33 3 83 15 52 85
- E-mail: m.siaghy@chru-nancy.fr
Lokalizacje studiów
-
-
-
Vandoeuvre les Nancy, Francja, 54500
- Central Hospital
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
- Dziecko
- Dorosły
- Starszy dorosły
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
W niniejszej pracy wykorzystane zostaną próbki kliniczne pochodzące z biologicznego zbioru płynu otrzewnowego pochodzącego z badania pBDG2. Obecność Candida w każdej próbce jest znana dzięki rutynowej analizie. Ponieważ trwa już rekrutacja do badania p BDG 2, tylko 100 pierwszych pacjentów z ośrodka „NANCY” zostanie objętych BADANIEM ICCA.
Wyniki uzyskane za pomocą calscreenera zostaną porównane z wynikami uzyskanymi z hodowli drożdży w celu potwierdzenia wykrycia Candida niezależnie iw zależności od gatunku albicans i non-albicans.
Na koniec porównamy opóźnienie wykrycia za pomocą calscreenera z opóźnieniem wzrostu kultury drożdży
Opis
Kryteria należą do badania pBDG2 (otrzewnowy 1,3-ß-D-glukan do diagnostyki kandydozy wewnątrzbrzusznej u pacjentów w stanie krytycznym).
Kryteria przyjęcia:
- dorosły
- Objęte ubezpieczeniem zdrowotnym
- Przyjęty na OIT z infekcją wewnątrzbrzuszną wymagającą operacji jamy brzusznej lub drenażu przezskórnego
Kryteria wyłączenia:
- Kobieta w ciąży lub karmiąca piersią
- Pacjent pozbawiony wolności po wydaniu orzeczenia sądowego
- Pacjent pod opieką psychiatryczną
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Modele obserwacyjne: Kohorta
- Perspektywy czasowe: Z mocą wsteczną
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
dorosłych pacjentów w stanie krytycznym z zakażeniem w obrębie jamy brzusznej
Badanie ICCA jest badaniem pomocniczym nieinterwencyjnego prospektywnego badania kohortowego (badanie pBDG2, NCT03997929). Podczas operacji pobrano płyn otrzewnowy w celu identyfikacji zaangażowanych patogenów i ukierunkowania terapii przeciwinfekcyjnych. Pozostały płyn otrzewnowy po rutynowych badaniach przechowywano w celu stworzenia kolekcji biologicznej. Ten zbiór biologiczny, w którym znana jest zawartość bakterii i drożdży, będzie analizowany za pomocą calscreenera. |
Calscreener (SYMCEL®) to nowe narzędzie diagnostyczne do szybkiej identyfikacji obecności patogenów w próbkach biologicznych w oparciu o wykrywanie aktywności mikrometabolicznej.
Wszystkie żywe komórki wytwarzają ciepło w chemicznych i fizycznych procesach życiowych; monitorując przepływ ciepła w czasie (J/s, W) można uzyskać znaczną ilość informacji dotyczących systemu biologicznego.
Screener cal umożliwia pomiar aktywności metabolicznej patogenów bezpośrednio z próbki (tu płyn otrzewnowy). Produkcja ciepła zostanie porównana pomiędzy płynem otrzewnowym, z dodatkiem lub bez dodatku bakterii
Aby wyjaśnić aktywność metaboliczną, wzrost i przemiana drożdży w strzępki zostaną przeanalizowane przy użyciu mikroskopii optycznej i konwencjonalnej kultury
Aby wyjaśnić aktywność metaboliczną, zbadany zostanie poziom ekspresji 5 genów wirulencji Candida albicans (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 i ECE1) i porównany między płynami otrzewnowymi.
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Wykrywanie (tak/nie) obecności Candida w płynie otrzewnowym
Ramy czasowe: Dzień 1 - 3
|
Wykrywanie przez calscreener : wykrywanie aktywności metabolicznej > 5 µW (zgodnie z zaleceniami SYMCEL)
|
Dzień 1 - 3
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Opóźnienie (w godzinach) wykrycia
Ramy czasowe: Dzień 1 - 3
|
Opóźnienie (w godzinach) od rozpoczęcia analizy calscreener do pierwszego wykrycia przepływu ciepła > 5 µW
|
Dzień 1 - 3
|
Inne miary wyników
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Produkcja ciepła (J)
Ramy czasowe: Dzień 1 - 3
|
Wytwarzanie ciepła w zależności od płynu otrzewnowego oraz obecności lub braku bakterii
|
Dzień 1 - 3
|
|
Morfologia Candida
Ramy czasowe: Dzień 1
|
Szczep C. albicans SC5314 zostanie zaszczepiony w trzech powtórzeniach do jednego ml różnych płynów otrzewnowych, jak również do pożywek kontrolnych (płyn Sabourauda i płyn puchlinowy) przy gęstości optycznej (OD) 0,3 nm, co odpowiada około 3,10^6 kolonii C. albicans albicans na mililitr (C. albicans/ml) pożywki. Studzienki kontrolne zawierające tylko pożywki bez C. albicans umieszczono również na tej samej 24-studzienkowej płytce, aby potwierdzić brak zanieczyszczenia. 24-dołkową płytkę zaszczepia się i inkubuje w 37°C z wytrząsaniem przy 300 RPM przez 24 godziny. Morfologię C. albicans (drożdże lub pseudo-strzępki lub strzępki) obserwowano pod mikroskopem świetlnym w odstępach godzinowych przez pierwsze osiem godzin, a następnie obserwowano w H16 i H24. |
Dzień 1
|
|
Wzrost Candida
Ramy czasowe: Dzień 1
|
Szczep C. albicans SC5314 zostanie zaszczepiony w trzech powtórzeniach do jednego ml różnych płynów otrzewnowych, jak również do pożywek kontrolnych (płyn Sabourauda i płyn puchlinowy) przy gęstości optycznej (OD) 0,3 nm, co odpowiada około 3,10^6 kolonii C. albicans albicans na mililitr (C. albicans/ml) pożywki. Studzienki kontrolne zawierające tylko pożywki bez C. albicans umieszczono również na tej samej 24-studzienkowej płytce, aby potwierdzić brak zanieczyszczenia. 24-dołkową płytkę zaszczepia się i inkubuje w 37°C z wytrząsaniem przy 300 RPM przez 24 godziny. Wzrost C. albicans oceniano przez inokulację 10 μl z każdej studzienki na agar z dekstrozą SBD, a kolonie liczono po 24 godzinach inkubacji w temperaturze 37°C. Aby ułatwić liczenie, wcześniej przygotowano 1000-krotne rozcieńczenia każdej zaszczepionej studzienki. |
Dzień 1
|
|
Ekspresja genu wirulencji Candida
Ramy czasowe: Dzień 1
|
Inokulacja C. albicans w różnych pożywkach przebiegała zgodnie z tym samym protokołem, jak w przypadku oceny fenotypowej, z całonocną hodowlą przez 24 godziny przed analizą ekspresji genów.
Pięć interesujących genów wirulencji to UME6, ALS3, SFL2, HWP1 i ECE1.
Po 24-godzinnej całonocnej hodowli próbki zostaną odwirowane w celu zatrzymania jedynie osadu komórkowego.
Następnie osad komórkowy przemyto dwukrotnie 10 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS).
Następnie usunięto PBS, pozostawiając jedynie osad komórek.
Ekstrakcja RNA zostanie przeprowadzona przy użyciu technologii lizy FASTPREP®.
Odwrotna transkrypcja zostanie przeprowadzona przy użyciu zestawu QuantiTect Reverse Transcription firmy Qiagen® (Germantown, Maryland, Stany Zjednoczone) zgodnie z instrukcjami producenta.
qPCR przeprowadzono w 96-dołkowych płytkach reakcyjnych MicroAmp Optical (Applied Biosystems) przy użyciu systemu PCR w czasie rzeczywistym CFX96 (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, Francja).
|
Dzień 1
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Współpracownicy
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- 2021PI051
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
produkt wyprodukowany i wyeksportowany z USA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .