A Candida korai azonosítása intraabdominalis candidiasisban (ICCA)
Az ICCA-tanulmány (a Candida korai azonosítása intraabdominális CAndidiasisban)
Az intraabdominalis candidiasis továbbra is az invazív candidiasis első forrása a kritikus állapotú betegeknél, ahol a mortalitás eléri a 60%-ot. Ez a magas mortalitás részben a gombaellenes kezelés késleltetésével függ össze. A terület szakértői szerint az új diagnosztikai módszerek a Candida gyors kimutatására az intraabdominális fertőzésekben kötelezőek, mivel a jelenlegi stratégiák az érzékenység és a specifitás hiányától szenvednek.
A calscreener (SYMCEL®) egy új diagnosztikai eszköz a kórokozók jelenlétének gyors azonosítására a biológiai mintákban a mikrometabolikus aktivitás kimutatása alapján.
Az ICCA projekt a vízkőszűrő megvalósíthatóságát, pontosságát és diagnosztikai teljesítményét teszteli a peritoneális folyadék meglévő biológiai gyűjteményén. Ez a gyűjtemény olyan kritikus állapotú betegek csoportjától származott, akik hasi fertőzésben szenvedtek, és hasi műtétre volt szükség. Az intraabdominalis fertőzések bakteriális peritonitisből és intraabdominalis candidiasisból állnak. A kórokozók (baktériumok és élesztőgombák) jelenléte már ismert, a peritoneális folyadékot rutinelemzés után tárolják (bakteriológia / mikológia).
Ebben a projektben csak az élesztőgombák kimutatását / azonosítását vizsgáljuk.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Beavatkozás / kezelés
Részletes leírás
Az intraabdominalis candidiasis fertőzésben szenvedő betegek magas mortalitása részben a gombaellenes kezelés késleltetésével függ össze. A Candida kimutatásának arany standard módszere továbbra is a mikológiai táptalajon végzett élesztőtenyésztés, amely késleltetett válaszidőtől (akár 5 napig) szenved.
Következésképpen a rutin gyakorlatban a gombaellenes kezelés megkezdésére vonatkozó döntés a prediktív pontszámokon, például a peritonitis pontszámán alapul. Bármi is legyen a pontszám, mindannyian az érzékenység és a specifikusság hiányától szenvednek, és az intenzív osztályos betegeket késleltetett kezelésnek tehetik ki, ami negatív hatással van a mortalitásra. A bejuttatást követően és a tenyésztés eredményének rendelkezésre állása előtt a gombaellenes szer leállítható két szérummérték alapján: 1,3 béta D glükán < 80 pg/ml. Ez a stratégia gombaellenes tartalékot tesz lehetővé. Ezért van még mit javítani a Candida korai felismerése és azonosítása terén a megfelelő gombaellenes szer kiválasztásához.
A calscreener (SYMCEL®) egy új diagnosztikai eszköz a kórokozók jelenlétének gyors azonosítására a biológiai mintákban a mikrometabolikus aktivitás kimutatása alapján. A metabolikus aktivitás előrevetíti a jövő pozitív kultúráját. A mai napig a calscreenerTM-mel végzett kísérletek többsége baktériumokra vonatkozik. A fejlesztési szakaszban néhány kísérletet végeztek Candidával, többnyire in vitro. Hiányoznak a klinikai mintákkal, például a peritoneális folyadékkal való megvalósíthatósági adatok. Emellett jelenleg nincs könyvtár a Candida metabolikus profiljáról, mind az albicans, mind a nem albicans fajokban. Összességében a rutinszerű használata jelenleg lehetetlen.
Az ismert Candida jelenlétét mutató peritoneális folyadékban végzett metabolikus aktivitás kimutatásának első eredményei (a csapatunktól származó, nem publikált adatok) 1 óra alatti észlelési időt mutattak. Célunk, hogy megerősítsük ezeket az ígéretes eredményeket egy folyamatban lévő kohorsz vizsgálat során gyűjtött biológiai minták felhasználásával. Először is le kell írnunk a különböző Candida fajok metabolikus aktivitási görbéit, hogy egy könyvtárat alkothassunk.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Tényleges)
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi helyek
-
-
-
Vandoeuvre les Nancy, Franciaország, 54500
- Central Hospital
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
- Gyermek
- Felnőtt
- Idősebb felnőtt
Egészséges önkénteseket fogad
Mintavételi módszer
Tanulmányi populáció
Jelen tanulmányban a pBDG2 vizsgálatból származó peritoneális folyadék biológiai gyűjteményéből származó klinikai mintákat használjuk fel. A Candida jelenléte minden mintában ismert a rutinelemzésnek köszönhetően. Mivel a p BDG 2 vizsgálat már toborzás alatt áll, csak a "NANCY" központ 100 első betegét vizsgálják meg az ICCA STUDY-ban.
A calscreenerrel kapott eredményeket összehasonlítják az élesztőtenyésztéssel kapott eredményekkel, hogy megerősítsék a Candida kimutatását, függetlenül és az albicans és nem albicans fajoktól függően.
Végül a kimutatás késleltetését a calscreenerrel összehasonlítjuk az élesztőtenyészet növekedési késleltetésével
Leírás
A kritériumok a pBDG2 vizsgálathoz tartoznak (peritoneális 1,3-ß-D-glükán az intraabdominalis candidiasis diagnosztizálására kritikusan beteg betegeknél).
Bevételi kritériumok:
- felnőtt
- Egészségbiztosítás fedezi
- Hasi műtétet vagy perkután drenázst igénylő intraabdominális fertőzéssel intenzív osztályon vették fel
Kizárási kritériumok:
- Terhes vagy szoptató nő
- A bírósági határozat meghozatalát követően szabadságától megfosztott beteg
- Pszichiátriai gondozás alatt álló beteg
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
- Megfigyelési modellek: Kohorsz
- Időperspektívák: Visszatekintő
Kohorszok és beavatkozások
Csoport / Kohorsz |
Beavatkozás / kezelés |
|---|---|
|
kritikus állapotú, intraabdominális fertőzésben szenvedő felnőtt betegek
Az ICCA-vizsgálat egy nem-beavatkozásos prospektív kohorszvizsgálat (a pBDG2 vizsgálat, NCT03997929) kiegészítő vizsgálata. A pBDG 2 vizsgálatba hasi műtétet igénylő intraabdominális fertőzésben szenvedő intenzív osztályos betegeket vontak be. A műtét során peritoneális folyadékot gyűjtöttek, hogy azonosítsák az érintett kórokozókat és irányítsák a fertőzés elleni terápiát. A rutin elemzések után a megmaradt peritoneális folyadékot biológiai gyűjtemény létrehozása céljából tároltuk. Ezt a biológiai gyűjteményt, amelyben a baktériumok és élesztőgombák tartalma ismert, a vízkőszűrővel elemezzük. |
A calscreener (SYMCEL®) egy új diagnosztikai eszköz a kórokozók jelenlétének gyors azonosítására a biológiai mintákban a mikrometabolikus aktivitás kimutatása alapján.
Minden élő sejt hőt termel az élet kémiai és fizikai folyamatai révén; a hőáramlás időbeli (J/s, W) figyelemmel kísérésével jelentős mennyiségű információ nyerhető a biológiai rendszerre vonatkozóan.
A cal screener lehetővé teszi a kórokozók metabolikus aktivitásának mérését közvetlenül egy mintából (itt a peritoneális folyadékból). A hőtermelést összehasonlítják a peritoneális folyadékkal, baktériumok hozzáadásával vagy anélkül
Az anyagcsere-aktivitás magyarázata érdekében optikai mikroszkóppal és hagyományos tenyésztéssel elemezzük a növekedést és az élesztőről a hifára való átmenetet.
A metabolikus aktivitás magyarázata érdekében 5 Candida albicans virulenciagén (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 és ECE1) expressziós szintjét vizsgáljuk és hasonlítjuk össze a peritoneális folyadék között.
|
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Candida jelenlétének kimutatása (Igen/Nem) a peritoneális folyadékban
Időkeret: 1-3 nap
|
Érzékelés a vízkőszűrővel: > 5 µW metabolikus aktivitás kimutatása (a SYMCEL ajánlása szerint)
|
1-3 nap
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Az észlelés késleltetése (órákban).
Időkeret: 1-3 nap
|
Késleltetés (órákban) a vízkőszűrő analízisének kezdetétől az 5 µW-nál nagyobb hőáramlás első észleléséig
|
1-3 nap
|
Egyéb eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
Hőtermelés (Joule)
Időkeret: 1-3 nap
|
Hőtermelés a peritoneális folyadéktól és a baktériumok jelenlététől vagy hiányától függően
|
1-3 nap
|
|
Candida morfológia
Időkeret: 1. nap
|
A C. albicans SC5314 törzset három párhuzamosban oltjuk be egy ml különböző peritoneális folyadékba, valamint kontroll táptalajba (Sabouraud és ascitic fluid) 0,3 nm optikai sűrűség (OD) mellett, ami körülbelül 3,10^6 C kolóniának felel meg. albicans per milliliter (C. albicans/ml) táptalajt. Ugyanerre a 24 lyukú lemezre csak a C. albicans nélküli tápközeget tartalmazó kontroll lyukakat is helyeztük a szennyeződés hiányának igazolására. A 24 lyukú lemezt beoltjuk, és 37 °C-on 24 órán át 300 RPM-es rázatással inkubáljuk. A C. albicans morfológiáját (élesztőgomba vagy pszeudo-hyphae vagy hifák) fénymikroszkóp alatt figyelték meg óránkénti időközönként az első nyolc órában, majd a H16 és H24 megfigyeléseket. |
1. nap
|
|
Candida növekedés
Időkeret: 1. nap
|
A C. albicans SC5314 törzset három párhuzamosban oltjuk be egy ml különböző peritoneális folyadékba, valamint kontroll táptalajba (Sabouraud és ascitic fluid) 0,3 nm optikai sűrűség (OD) mellett, ami körülbelül 3,10^6 C kolóniának felel meg. albicans per milliliter (C. albicans/ml) táptalajt. Ugyanerre a 24 lyukú lemezre csak a C. albicans nélküli tápközeget tartalmazó kontroll lyukakat is helyeztük a szennyeződés hiányának igazolására. A 24 lyukú lemezt beoltjuk, és 37 °C-on 24 órán át 300 RPM-es rázatással inkubáljuk. A C. albicans növekedését úgy értékeltük, hogy mindegyik lyukból 10 µl-t oltottak SBD dextróz agarra, és a telepeket 24 órás 37 °C-os inkubáció után megszámoltuk. A számlálás megkönnyítése érdekében minden beoltott lyukból 1000-szeres hígítást készítettünk előzetesen. |
1. nap
|
|
Candida virulencia génexpresszió
Időkeret: 1. nap
|
A különböző táptalajokban a C. albicans beoltása ugyanazt a protokollt követte, mint a fenotípusos értékelésnél, a génexpressziós analízis előtt 24 órával egy éjszakán át végzett tenyésztéssel.
Az öt érdekes virulenciagén az UME6, ALS3, SFL2, HWP1 és ECE1.
A 24 órás éjszakán át tartó tenyésztés után a mintákat centrifugáljuk, hogy csak a sejtpellet maradjon meg.
A sejtpelletet ezután kétszer mostuk 10 ml foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS).
Ezt követően a PBS-t eltávolítottuk, csak a sejtpelletet hagyva hátra.
Az RNS extrakciót a FASTPREP® lízis technológiával hajtják végre.
A fordított transzkripció a Qiagen® (Germantown, Maryland, Egyesült Államok) QuantiTect Reverse Transcription készletével történik, a gyártó utasításait követve.
A qPCR-t MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plates-ben (Applied Biosystems) végeztük a CFX96 Real-Time PCR rendszer (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, Franciaország) segítségével.
|
1. nap
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Együttműködők
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Tényleges)
A tanulmány befejezése (Tényleges)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Tényleges)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Tényleges)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
Kulcsszavak
További vonatkozó MeSH feltételek
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- 2021PI051
Terv az egyéni résztvevői adatokhoz (IPD)
Tervezi megosztani az egyéni résztvevői adatokat (IPD)?
Gyógyszer- és eszközinformációk, tanulmányi dokumentumok
Egy amerikai FDA által szabályozott gyógyszerkészítményt tanulmányoz
Egy amerikai FDA által szabályozott eszközterméket tanulmányoz
az Egyesült Államokban gyártott és onnan exportált termék
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .