Früherkennung von Candida bei intraabdominaler Candidiasis (ICCA)
Die ICCA-Studie (Early Identification of Candida in Intra-abdominal CANdidiasis)
Die intraabdominale Candidose bleibt der erste Ursprung einer invasiven Candidose bei kritisch kranken Patienten mit einer Sterblichkeit von bis zu 60 %. Diese hohe Sterblichkeit hängt teilweise mit der Verzögerung der Verabreichung von Antimykotika zusammen. Nach Ansicht von Experten auf diesem Gebiet sind neue diagnostische Methoden zum schnellen Nachweis von Candida bei intraabdominellen Infektionen zwingend erforderlich, da die derzeitigen Strategien an einem Mangel an Sensitivität und Spezifität leiden.
Der Calscreener (SYMCEL®) ist ein neues diagnostisches Werkzeug zur schnellen Identifizierung von Krankheitserregern in biologischen Proben basierend auf dem Nachweis mikrometabolischer Aktivität.
Das ICCA-Projekt wird die Machbarkeit, die Genauigkeit und die diagnostische Leistung des Calscreeners an einer bestehenden biologischen Sammlung von Peritonealflüssigkeit testen. Diese Sammlung stammte von einer Kohorte kritisch kranker Patienten mit intraabdomineller Infektion, die eine Bauchoperation erforderte. Intraabdominale Infektionen bestehen aus bakterieller Peritonitis und intraabdomineller Candidiasis. Das Vorhandensein von Krankheitserregern (Bakterien und Hefen) ist bereits bekannt, die Peritonealflüssigkeit wird nach Routineanalysen (Bakteriologie / Mykologie) aufbewahrt.
In diesem Projekt wird ausschließlich der Nachweis / die Identifizierung von Hefen untersucht.
Studienübersicht
Status
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Die hohe Sterblichkeitsrate von Patienten mit intraabdomineller Candidiasis-Infektion hängt teilweise mit der Verzögerung der antimykotischen Behandlung zusammen. Die Goldstandardmethode für den Candida-Nachweis bleibt die Hefekultur auf mykologischen Medien, die unter einer verzögerten Reaktionszeit (bis zu 5 Tage) leidet.
Folglich basiert die Entscheidung zum Beginn einer antimykotischen Behandlung in der Routinepraxis auf prädiktiven Scores wie dem Peritonitis-Score. Unabhängig von der Punktzahl leiden sie alle unter einem Mangel an Sensitivität und Spezifität und könnten Patienten auf der Intensivstation einer verzögerten Behandlung mit negativen Auswirkungen auf die Sterblichkeit aussetzen. Nach der Einführung und vor dem Vorliegen des Kulturergebnisses kann das Antimykotikum basierend auf zwei Serummessungen von 1,3-Beta-D-Glucan < 80 pg/ml gestoppt werden. Diese Strategie ermöglicht Anti-Pilz-Ersatz. Daher gibt es Raum für Verbesserungen in Bezug auf die frühzeitige Candida-Erkennung und Identifizierung für die richtige Wahl des Antimykotikums.
Der Calscreener (SYMCEL®) ist ein neues diagnostisches Werkzeug zur schnellen Identifizierung von Krankheitserregern in biologischen Proben basierend auf dem Nachweis mikrometabolischer Aktivität. Die Stoffwechselaktivität nimmt die zukünftige positive Kultur vorweg. Die meisten Experimente mit dem calscreenerTM betreffen bisher Bakterien. Während der Entwicklungsphase wurden einige Experimente mit Candida durchgeführt, meist in vitro. Machbarkeitsdaten mit klinischen Proben wie der Peritonealflüssigkeit fehlen. Außerdem gibt es derzeit keine Bibliothek bezüglich des metabolischen Profils von Candida, sowohl bei albicans- als auch bei Nicht-albicans-Spezies. Insgesamt ist ein routinemäßiger Einsatz derzeit nicht möglich.
Erste Ergebnisse (unveröffentlichte Daten unseres Teams) zum Nachweis der Stoffwechselaktivität in Peritonealflüssigkeit mit bekannter Anwesenheit von Candida zeigten eine Nachweiszeit < 1 Stunde. Wir wollen diese vielversprechenden Ergebnisse anhand biologischer Proben bestätigen, die in einer laufenden Kohortenstudie gesammelt wurden. Wir müssen zuerst die metabolischen Aktivitätskurven verschiedener Candida-Spezies beschreiben, um eine Bibliothek aufzubauen.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Vandoeuvre les Nancy, Frankreich, 54500
- Central Hospital
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
- Kind
- Erwachsene
- Älterer Erwachsener
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
In der vorliegenden Studie werden die klinischen Proben aus der biologischen Sammlung von Peritonealflüssigkeit aus der pBDG2-Studie verwendet. Das Vorhandensein von Candida in jeder Probe ist dank Routineanalysen bekannt. Da die p BDG 2 Studie bereits rekrutiert, werden in der ICCA STUDY nur die 100 ersten Patienten aus dem Zentrum „NANCY“ untersucht.
Die mit dem Calscreener erzielten Ergebnisse werden mit denen der Hefekultur verglichen, um den Candida-Nachweis zu bestätigen, unabhängig von und abhängig von den albicans- und non-albicans-Spezies.
Abschließend wird die Nachweisverzögerung mit dem Calscreener mit der Wachstumsverzögerung der Hefekultur verglichen
Beschreibung
Die Kriterien gehören zur pBDG2-Studie (Peritoneal 1.3-ß-D-glucan for the Diagnosis of Intra-abdominal Candidiasis in Critically Ill Patients).
Einschlusskriterien:
- Erwachsene
- Von der Krankenkasse übernommen
- Aufnahme auf der Intensivstation mit intraabdomineller Infektion, die eine Bauchoperation oder perkutane Drainage erfordert
Ausschlusskriterien:
- Schwangere oder stillende Frau
- Patientin nach Vollzug der gerichtlichen Entscheidung die Freiheit entzogen
- Patient in psychiatrischer Behandlung
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Beobachtungsmodelle: Kohorte
- Zeitperspektiven: Retrospektive
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
|---|---|
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kritisch kranke erwachsene Patienten mit intraabdominaler Infektion
Die ICCA-Studie ist eine Zusatzstudie zu einer nicht-interventionellen prospektiven Kohortenstudie (der pBDG2-Studie, NCT03997929). In die pBDG-2-Studie wurden Intensivpatienten mit intraabdominaler Infektion aufgenommen, die eine Bauchoperation erforderten. Während der Operation wurde Peritonealflüssigkeit gesammelt, um die beteiligten Krankheitserreger zu identifizieren und antiinfektive Therapien zu leiten. Nach den Routineanalysen wurde die verbleibende Peritonealflüssigkeit gelagert, um eine biologische Sammlung anzulegen. Diese biologische Sammlung, in der der Gehalt an Bakterien und Hefen bekannt ist, wird mit dem Calscreener analysiert. |
Der Calscreener (SYMCEL®) ist ein neues diagnostisches Werkzeug zur schnellen Identifizierung von Krankheitserregern in biologischen Proben basierend auf dem Nachweis mikrometabolischer Aktivität.
Alle lebenden Zellen erzeugen Wärme durch die chemischen und physikalischen Prozesse des Lebens; Durch Überwachung des Wärmeflusses über die Zeit (J/s, W) kann eine beträchtliche Menge an Informationen über das biologische System erhalten werden.
Der Cal-Screener ermöglicht die Messung der Stoffwechselaktivität von Krankheitserregern direkt aus einer Probe (hier der Peritonealflüssigkeit). Die Wärmeproduktion wird zwischen Peritonealflüssigkeit mit oder ohne Zugabe von Bakterien verglichen
Um die Stoffwechselaktivität zu erklären, werden Wachstum und Übergang von Hefe zu Hyphen mittels optischer Mikroskopie und konventioneller Kultur analysiert
Um die Stoffwechselaktivität zu erklären, wird das Expressionsniveau von 5 Virulenzgenen von Candida albicans (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 und ECE1) untersucht und zwischen Peritonealflüssigkeit verglichen.
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Nachweis (Ja/Nein) des Vorhandenseins von Candida in der Peritonealflüssigkeit
Zeitfenster: Tag 1 - 3
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Nachweis durch den Calscreener: Nachweis von Stoffwechselaktivität > 5 µW (gemäß SYMCEL-Empfehlung)
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Tag 1 - 3
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Verzögerung (in Stunden) der Erkennung
Zeitfenster: Tag 1 - 3
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Verzögerung (in Stunden) vom Beginn der Calscreener-Analyse bis zum ersten Nachweis eines Wärmeflusses > 5 µW
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Tag 1 - 3
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Andere Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
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Wärmeproduktion (Joule)
Zeitfenster: Tag 1 - 3
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Wärmeproduktion abhängig von der Peritonealflüssigkeit und der Anwesenheit oder Abwesenheit von Bakterien
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Tag 1 - 3
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Candida-Morphologie
Zeitfenster: Tag 1
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Der Stamm C. albicans SC5314 wird in dreifacher Ausfertigung in einen ml der verschiedenen Peritonealflüssigkeit sowie in Kontrollmedien (Sabouraud und Aszitesflüssigkeit) mit einer optischen Dichte (OD) von 0,3 nm inokuliert, was etwa 3,10^6 Kolonien von C. albicans entspricht . albicans pro Milliliter (C. albicans/ml) Medien. Kontrollvertiefungen, die nur das Medium ohne C. albicans enthielten, wurden ebenfalls auf derselben 24-Well-Platte angebracht, um das Fehlen einer Kontamination zu bestätigen. Die 24-Well-Platte wird beimpft und bei 37 °C unter Schütteln bei 300 U/min 24 Stunden lang inkubiert. Die Morphologie von C. albicans (Hefe oder Pseudo-Hyphen) wurde in den ersten acht Stunden in stündlichen Abständen unter einem Lichtmikroskop beobachtet, gefolgt von Beobachtungen bei H16 und H24. |
Tag 1
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Candida-Wachstum
Zeitfenster: Tag 1
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Der Stamm C. albicans SC5314 wird in dreifacher Ausfertigung in einen ml der verschiedenen Peritonealflüssigkeit sowie in Kontrollmedien (Sabouraud und Aszitesflüssigkeit) mit einer optischen Dichte (OD) von 0,3 nm inokuliert, was etwa 3,10^6 Kolonien von C. albicans entspricht . albicans pro Milliliter (C. albicans/ml) Medien. Kontrollvertiefungen, die nur das Medium ohne C. albicans enthielten, wurden ebenfalls auf derselben 24-Well-Platte angebracht, um das Fehlen einer Kontamination zu bestätigen. Die 24-Well-Platte wird beimpft und bei 37 °C unter Schütteln bei 300 U/min 24 Stunden lang inkubiert. Das Wachstum von C. albicans wurde durch Inokulation von 10 μl aus jeder Vertiefung auf SBD-Dextrose-Agar beurteilt und die Kolonien wurden nach 24-stündiger Inkubation bei 37 °C gezählt. Um das Zählen zu erleichtern, wurden zuvor 1000-fache Verdünnungen jeder beimpften Vertiefung hergestellt. |
Tag 1
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Genexpression der Candida-Virulenz
Zeitfenster: Tag 1
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Die Inokulation von C. albicans in den verschiedenen Medien folgte dem gleichen Protokoll wie für die phänotypische Bewertung, mit einer Übernachtkultur von 24 Stunden vor der Genexpressionsanalyse.
Die fünf interessierenden Virulenzgene sind UME6, ALS3, SFL2, HWP1 und ECE1.
Nach der 24-stündigen Kultur über Nacht werden die Proben zentrifugiert, um nur das Zellpellet zurückzuhalten.
Das Zellpellet wurde dann zweimal mit 10 ml phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen.
Anschließend wurde das PBS entfernt, so dass nur das Zellpellet zurückblieb.
Die RNA-Extraktion wird mit der FASTPREP®-Lyse-Technologie durchgeführt.
Die Reverse Transkription wird mit dem QuantiTect Reverse Transcription Kit von Qiagen® (Germantown, Maryland, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt.
Die qPCR wurde in MicroAmp Optical 96-Well Reaction Plates (Applied Biosystems) unter Verwendung des CFX96 Real-Time PCR System (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, Frankreich) durchgeführt.
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Tag 1
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Mitarbeiter
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
Studienabschluss (Tatsächlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- 2021PI051
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Produkt, das in den USA hergestellt und aus den USA exportiert wird
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Klinische Studien zur Candidiasis, invasiv
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Merck Sharp & Dohme LLCBeendet
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