Candida-bakteerin varhainen tunnistaminen vatsansisäisessä kandidiaasissa (ICCA)
ICCA-tutkimus (Candidaksen varhainen tunnistaminen vatsansisäisessä kandidiaasissa)
Vatsansisäinen kandidiaasi on edelleen ensimmäinen invasiivisen kandidiaasin aiheuttaja kriittisesti sairailla potilailla, joiden kuolleisuus on jopa 60 %. Tämä korkea kuolleisuus johtuu osittain sienilääkkeiden antamisen viivästymisestä. Alan asiantuntijoiden mukaan uudet diagnostiset menetelmät Candida-bakteerin nopeaan havaitsemiseen vatsansisäisissä infektioissa ovat pakollisia, koska nykyiset strategiat kärsivät sekä herkkyyden että spesifisyyden puutteesta.
Calscreener (SYMCEL®) on uusi diagnostinen työkalu, jolla voidaan nopeasti tunnistaa patogeenien esiintyminen biologisista näytteistä mikrometabolisen aktiivisuuden havaitsemisen perusteella.
ICCA-projekti testaa kalkkisuodattimen toteutettavuutta, tarkkuutta ja diagnostista suorituskykyä olemassa olevassa vatsakalvonesteen biologisessa kokoelmassa. Tämä kokoelma tuli kriittisesti sairaiden potilaiden kohortilta, joilla oli vatsansisäinen infektio, joka vaati vatsan leikkausta. Vatsansisäiset infektiot koostuvat bakteeriperäisestä peritoniitista ja vatsansisäisestä kandidiaasista. Patogeenien (bakteerit ja hiiva) esiintyminen on jo tiedossa, ja vatsakalvon neste varastoidaan rutiinianalyysin jälkeen (bakteriologia / mykologia).
Tässä projektissa tutkitaan vain hiivan havaitsemista/tunnistusta.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Yksityiskohtainen kuvaus
Vatsansisäisen kandidiaasiinfektion potilaiden korkea kuolleisuus johtuu osittain sienilääkehoidon viivästymisestä. Kultastandardi Candida-havaintomenetelmä on edelleen hiivaviljely mykologisella alustalla, joka kärsii viivästyneestä vasteajasta (jopa 5 päivää).
Näin ollen rutiinikäytännössä päätös sienilääkkeen aloittamisesta perustuu ennakoiviin pisteisiin, kuten peritoniittipisteisiin. Oli pisteet mikä tahansa, he kaikki kärsivät herkkyyden ja spesifisyyden puutteesta ja voivat altistaa tehohoitopotilaat viivästyneelle hoidolle, millä on negatiivinen vaikutus kuolleisuuteen. Kun se on otettu käyttöön ja ennen kuin viljelytulos on saatavilla, sienilääke voidaan lopettaa kahdella seerumimittauksella 1,3-beeta-D-glukaani < 80 pg/ml. Tämä strategia mahdollistaa anti-sieni-varan. Siksi Candida-bakteerin varhaisessa havaitsemisessa ja tunnistamisessa on parantamisen varaa oikean sienilääkkeen valinnassa.
Calscreener (SYMCEL®) on uusi diagnostinen työkalu, jolla voidaan nopeasti tunnistaa patogeenien esiintyminen biologisista näytteistä mikrometabolisen aktiivisuuden havaitsemisen perusteella. Metabolinen aktiivisuus ennakoi tulevaa positiivista kulttuuria. Tähän mennessä suurin osa calscreenerTM-kokeista koskee bakteereja. Kehitysvaiheen aikana Candidalla on tehty joitain kokeita, enimmäkseen in vitro. Tietoja käytettävyydestä kliinisillä näytteillä, kuten peritoneaalinesteellä, ei ole. Lisäksi tällä hetkellä ei ole kirjastoa Candidan metabolisesta profiilista sekä albicans- että ei-albicans-lajeissa. Kaiken kaikkiaan sen rutiinikäyttö on tällä hetkellä mahdotonta.
Ensimmäiset tulokset (julkaisemattomat tiedot tiimiltämme) aineenvaihduntaaktiivisuuden havaitsemisesta vatsakalvon nesteessä, jossa tiedetään olevan Candida-bakteeria, osoittivat, että aika havaittiin < 1 tunti. Pyrimme vahvistamaan nämä lupaavat tulokset käyttämällä meneillään olevassa kohorttitutkimuksessa kerättyjä biologisia näytteitä. Meidän on ensin kuvattava eri Candida-lajien metabolisen aktiivisuuden käyrät muodostaaksemme kirjaston.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Vandoeuvre les Nancy, Ranska, 54500
- Central Hospital
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Lapsi
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Tässä tutkimuksessa käytetään kliinisiä näytteitä, jotka on saatu pBDG2-tutkimuksen vatsakalvonesteen biologisesta kokoelmasta. Jokaisen näytteen Candida-bakteerin esiintyminen tiedetään rutiinianalyysin ansiosta. Koska p BDG 2 -tutkimus on jo rekrytoimassa, vain 100 ensimmäistä potilasta keskuksesta "NANCY" tutkitaan ICCA-TUTKIMUKSESSA.
Calscreener-laitteella saatuja tuloksia verrataan hiivaviljelmällä saatuihin tuloksiin Candida-havainnoinnin vahvistamiseksi riippumatta ja riippuen albicans- ja ei-albicans-lajeista.
Lopuksi havainnointiviivettä kalkkiseulonnalla verrataan hiivaviljelmän kasvuviiveeseen
Kuvaus
Kriteerit kuuluvat pBDG2-tutkimukseen (peritoneaalinen 1,3-ß-D-glukaani vatsansisäisen kandidiaasin diagnosointiin kriittisesti sairailla potilailla).
Sisällyttämiskriteerit:
- aikuinen
- Sairausvakuutuksen katettu
- Päästetty teho-osastolle vatsansisäisen infektion vuoksi, joka vaatii vatsan leikkausta tai perkutaanista drenaatiota
Poissulkemiskriteerit:
- Raskaana oleva tai imettävä nainen
- Potilas menetetty vapaudesta lainvoimaisen päätöksen antamisen jälkeen
- Potilas psykiatrisessa hoidossa
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Havaintomallit: Kohortti
- Aikanäkymät: Takautuva
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
kriittisesti sairailla aikuisilla potilailla, joilla on vatsansisäinen infektio
ICCA-tutkimus on ei-interventio-prospektiivisen kohorttitutkimuksen (pBDG2-tutkimus, NCT03997929) apututkimus. pBDG 2 -tutkimukseen on otettu tehohoitopotilaita, joilla on vatsansisäinen infektio, joka vaatii vatsaleikkausta. Leikkauksen aikana peritoneaalista nestettä on kerätty tunnistaakseen mukana olevat taudinaiheuttajat ja ohjatakseen infektioita estäviä hoitoja. Rutiinianalyysien jälkeen jäljelle jäänyt peritoneaalinen neste varastoitiin biologisen kokoelman luomiseksi. Tämä biologinen kokoelma, jossa bakteerien ja hiivojen pitoisuus tunnetaan, analysoidaan kalsiumseulonnalla. |
Calscreener (SYMCEL®) on uusi diagnostinen työkalu, jolla voidaan nopeasti tunnistaa patogeenien esiintyminen biologisista näytteistä mikrometabolisen aktiivisuuden havaitsemisen perusteella.
Kaikki elävät solut tuottavat lämpöä elämän kemiallisilla ja fysikaalisilla prosesseilla; Seuraamalla lämmön virtausta ajan myötä (J/s, W) voidaan saada merkittävä määrä tietoa biologisesta järjestelmästä.
Kalifornian seulontalaite mahdollistaa patogeenien metabolisen aktiivisuuden mittaamisen suoraan näytteestä (tässä peritoneaalisesta nesteestä). Lämmöntuotantoa verrataan vatsakalvon nesteen välillä, bakteerien lisäyksen kanssa tai ilman
Aineenvaihduntaaktiivisuuden selittämiseksi analysoidaan kasvua ja hiivasta hyfaksi siirtymistä optisella mikroskopialla ja tavanomaisella viljelyllä
Aineenvaihduntaaktiivisuuden selittämiseksi tarkastellaan ja verrataan vatsakalvonesteen viiden Candida albicansin virulenssigeenin (UME6, ALS3, SFL2, HWP1 ja ECE1) ilmentymistasoa.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Candida-bakteerin havaitseminen peritoneaalisessa nesteessä (Kyllä/Ei).
Aikaikkuna: Päivät 1-3
|
Havaitseminen kalkkiseulonnalla: metabolisen aktiivisuuden havaitseminen > 5 µW (SYMCEL-suosituksen mukaan)
|
Päivät 1-3
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Havaitsemisen viive (tunteina).
Aikaikkuna: Päivät 1-3
|
Viive (tunteina) kalsiumin analyysin alusta ensimmäiseen lämpövirran havaitsemiseen > 5 µW
|
Päivät 1-3
|
Muut tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Lämmöntuotanto (joule)
Aikaikkuna: Päivät 1-3
|
Lämmöntuotanto riippuu peritoneaalisesta nesteestä ja bakteerien läsnäolosta tai puuttumisesta
|
Päivät 1-3
|
|
Candida morfologia
Aikaikkuna: Päivä 1
|
C. albicans SC5314 -kanta siirrostetaan kolmena kappaleena yhteen ml:aan erilaista vatsakalvonestettä sekä kontrolliväliaineeseen (Sabouraud ja ascitic fluid) optisella tiheydellä (OD) 0,3 nm, mikä vastaa noin 3,10^6 C-pesäkettä albicans millilitrassa (C. albicans/ml) väliainetta. Kontrollikuopat, jotka sisälsivät vain väliainetta ilman C. albicansia, sisällytettiin myös samalle 24-kuoppaiselle levylle kontaminaation puuttumisen varmistamiseksi. 24-kuoppainen levy inokuloidaan ja inkuboidaan 37 °C:ssa ravistellen 300 rpm:ssä 24 tunnin ajan. C. albicansin (hiiva tai pseudohyphae tai hyfit) morfologiaa tarkkailtiin valomikroskoopilla tunnin välein ensimmäisten kahdeksan tunnin ajan, mitä seurasi havainnot H16:ssa ja H24:ssä. |
Päivä 1
|
|
Candida kasvu
Aikaikkuna: Päivä 1
|
C. albicans SC5314 -kanta siirrostetaan kolmena kappaleena yhteen ml:aan erilaista vatsakalvonestettä sekä kontrolliväliaineeseen (Sabouraud ja ascitic fluid) optisella tiheydellä (OD) 0,3 nm, mikä vastaa noin 3,10^6 C-pesäkettä albicans millilitrassa (C. albicans/ml) väliainetta. Kontrollikuopat, jotka sisälsivät vain väliainetta ilman C. albicansia, sisällytettiin myös samalle 24-kuoppaiselle levylle kontaminaation puuttumisen varmistamiseksi. 24-kuoppainen levy inokuloidaan ja inkuboidaan 37 °C:ssa ravistellen 300 rpm:ssä 24 tunnin ajan. C. albicansin kasvu arvioitiin siirrostamalla 10 µl kustakin kuopasta SBD-dekstroosiagarille, ja pesäkkeet laskettiin 24 tunnin 37 °C:ssa inkuboinnin jälkeen. Laskennan helpottamiseksi jokaisesta siirrostetusta kuopasta valmistettiin etukäteen 1000-kertaiset laimennokset. |
Päivä 1
|
|
Candida virulenssigeenin ilmentyminen
Aikaikkuna: Päivä 1
|
C. albicansin siirrostus eri väliaineisiin noudatti samaa protokollaa kuin fenotyypin arvioinnissa yön yli 24 tunnin viljelyllä ennen geeniekspressioanalyysiä.
Viisi kiinnostavaa virulenssigeeniä ovat UME6, ALS3, SFL2, HWP1 ja ECE1.
24 tunnin yli yön viljelyn jälkeen näytteet sentrifugoidaan, jotta vain solupelletti säilyy.
Solupelletti pestiin sitten kahdesti 10 ml:lla fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS).
Sen jälkeen PBS poistettiin jättäen jälkeensä vain solupelletin.
RNA-uutto suoritetaan käyttämällä FASTPREP®-lyysitekniikkaa.
Käänteinen transkriptio suoritetaan käyttämällä QuantiTect Reverse Transcription -pakkausta, jonka valmistaja on Qiagen® (Germantown, Maryland, Yhdysvallat) valmistajan ohjeiden mukaisesti.
QPCR suoritettiin MicroAmp Optical 96-well Reaction Plates (Applied Biosystems) -reaktiolevyillä käyttäen CFX96 Real-Time PCR -järjestelmää (Bio-Rad, Marnes-la Coquette, Ranska).
|
Päivä 1
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 2021PI051
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .