口腔組織サンプルに対する喫煙の影響

研究デザインと設定 これは、単一施設、研究者盲検、横断研究でした。 作業は、2018 年 11 月から 2019 年 7 月までの間、トルコのイスタンブールにある歯周病学科で実施されました。 研究手順は、ヘルシンキ宣言のガイドラインに従って実施され、大学の倫理委員会によって承認されました (プロトコル コード: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; 承認日：2018 年 10 月 30 日）。 以前の研究からの健康な歯周組織を持つ6人の非喫煙参加者からのデータが、この研究でも使用されました. 適格な被験者に研究が口頭で説明された後、参加を希望する被験者は、書面によるインフォームド コンセント フォームに署名しました。 被験者に関する個人を特定できる情報は秘密にされました。 この研究は、疫学ガイドラインにおける観察研究の報告の強化に従ってレビューされました。

参加者 80 人の全身的に健康な男女両方の被験者が研究に登録されました。 参加者は、2018 年 11 月から 2019 年 7 月の間に歯周病検査のために当科に来た患者から募集されました。 臨床的に健康な歯周組織および全身性歯周炎のステージ III ～ IV / グレード B ～ C の診断は、2017 年の歯周およびインプラント周囲疾患および状態の分類に関する世界ワークショップに従って実施されました。 被験者は、全身性歯周炎の喫煙者（SGP; n = 20）、全身性歯周炎の非喫煙者（NGP; n = 20）、臨床的に健康な歯周組織の喫煙者（SHP; n = 20）、および非喫煙者の4つのグループに分けられました。臨床的に健康な歯周組織 (NHP; n = 20)。 歯周炎の対象と見なされるためには、次の基準を満たす必要がありました: 全身性歯周炎の存在、少なくとも 20 本の歯の存在、歯肉切除術の徴候を伴う大臼歯の存在、歯冠の延長またはプロービング深度が 5mm 以上の抜歯、 5 mm 以上の臨床的アタッチメントの喪失、およびプロービング深度が 5 mm 以上の少なくとも 10 本の歯の存在。 次の基準は、臨床的に健康な歯周組織を示しました: 健康で無傷の歯周組織、プロービング深度なし、プロービング時の出血。

臨床手順 すべての被験者は、年齢、性別、および教育レベルを評価するアンケートに回答しました。 歯周病の臨床評価は、国際基準に従って実施されました。 プラーク インデックス、プロービング深度、プロービング時の出血、および臨床的アタッチメント ロスを含む CPP は、同じ研究者によって歯周プローブを使用して、各被験者の歯ごとに 6 つの部位から記録されました。 サンプル収集と組織病理学的評価手順は、以前のレポートのように実行されました。 手短に言えば、塗抹標本は、2 つの別々の無菌サイトブラシを使用して、上顎小臼歯領域の付着した歯肉粘膜と一致する頬の頬粘膜から採取されました。 サンプルはガラス スライドに固定されました。 生検サンプルは、外科用ブレードを使用して抜歯または歯冠延長中に上顎大臼歯の前庭領域から採取し、分析まで10％ホルマリンで固定しました。 顕微鏡検査中、クロマチン残留物によるアーティファクトの可能性を減らすために、各被験者はサンプルを取得する前に口をすすぎました。

検査手順 小核数を含む剥離した口腔上皮細胞を評価するために (主要な結果)、すべての塗抹サンプルでフォイルゲン反応を実行しました。 シッフ試薬を用いた核染色および分析のために、細胞を固定液に入れた。 頬および歯肉のスメアサンプル中の小核は、1000倍の倍率で油浸中にそれらを観察することによって分析されました。 千個の細胞をチェックし、存在する小核の数を評価しました。 細胞内の 2 つの核の存在、フォイルゲン ネガティブ バンドで締め付けられたように見える核、収縮した核、凝縮したクロマチン、核の完全性の喪失を伴う核の崩壊、および核の溶解など、核の形態学的変化の発生が推定されました。 セルを計算するためにジグザグ戦略が使用されました。

組織病理学的損傷 (副次的結果) は、炎症細胞および血管密度に注目して評価されました。 損傷は、0 から 3 までの範囲のスケールを使用して修正された半定量的組織病理学的評価法を使用して評価されました (0: なし、1: 軽度、2: 中程度、および 3: 激しい)。 組織サンプルをパラフィン ワックスで固定し、厚さ 4 μm で連続的に切片化し、ヘマトキシリン エオジンで染色し、倍率 400 倍で調べました。 すべての塗抹標本および組織サンプルは、同じ実験室で同じ盲目の研究者によって同時に分析されました。

バイアス 各参加者の全身の健康状態、歯科歴、および喫煙習慣の評価は、公式の医療記録に関係なく、自己申告の情報に基づいていました。 1 人の研究者が参加者からデータとサンプルを収集し、別の研究者が実験室での調査を行いました。 偏りを避けるために、組織学的検査中に5つのサンプル領域がランダムに選択されました。

調査サイズ サンプル サイズは、G*Power バージョン 3.1.9.4 を使用して決定されました。 0.05 のアルファ有意水準、0.1 のベータ値、および 90% の検出力を想定しています。 4 つの研究グループがあり、グループごとに 20 人の参加者が必要だったため、80 人の被験者が研究に含まれました。

統計的方法 Number Cruncher Statistical System 2007 ソフトウェア プログラムをすべての統計分析に使用しました。 記述統計 (平均、標準偏差、中央値) を使用してデータを評価しました。 一元配置分散分析検定を使用して、3 つ以上の正規分布パラメーターの平均を比較しました。 ボンフェローニ検定を使用して、グループ間のペアワイズ比較の有意差を決定しました。 ピアソンのカイ二乗検定を使用して、質的データを比較しました。 有意性は、p<0.01 および p<0.05 レベルで評価されました。