Effetti del fumo sui campioni di tessuto orale

Disegno e impostazione dello studio Si trattava di uno studio cross-sezionale a centro singolo, in cieco per i ricercatori. Il lavoro è stato condotto presso il Dipartimento di Parodontologia di Istanbul, in Turchia, tra novembre 2018 e luglio 2019. La procedura di studio è stata condotta secondo le linee guida della Dichiarazione di Helsinki e approvata dal Comitato Etico dell'università (Codice protocollo: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; data di approvazione: 30 ottobre 2018). In questo studio sono stati utilizzati anche i dati di sei partecipanti non fumatori con parodonto sano dei nostri studi precedenti. Dopo che lo studio è stato spiegato verbalmente ai soggetti idonei, quelli disposti a partecipare hanno firmato un modulo di consenso informato scritto. Le informazioni personali e identificabili sui soggetti sono state mantenute riservate. Lo studio è stato rivisto seguendo le linee guida Rafforzare la segnalazione degli studi osservazionali in epidemiologia.

Partecipanti Ottanta soggetti sistematicamente sani, sia maschi che femmine, sono stati arruolati nello studio. I partecipanti sono stati reclutati tra i pazienti che sono venuti nel nostro dipartimento per gli esami parodontali tra novembre 2018 e luglio 2019. Le diagnosi di parodonto clinicamente sano e parodontite generalizzata stadi III-IV/gradi B-C sono state eseguite secondo il Workshop mondiale 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari. I soggetti sono stati divisi in quattro gruppi: fumatori con parodontite generalizzata (SGP; n = 20), non fumatori con parodontite generalizzata (NGP; n = 20), fumatori con parodontite clinicamente sana (SHP; n = 20) e non fumatori con parodonto clinicamente sano (NHP; n = 20). I seguenti criteri dovevano essere soddisfatti per essere considerato un soggetto con parodontite: la presenza di parodontite generalizzata, la presenza di almeno 20 denti, la presenza di un molare con indicazione di gengivectomia, allungamento della corona o estrazione con una profondità di sondaggio ≥ 5 mm, perdita clinica di attacco ≥ 5 mm e presenza di almeno dieci denti con profondità di sondaggio ≥ 5 mm. I seguenti criteri indicavano un parodonto clinicamente sano: un parodonto sano e intatto, nessuna profondità di sondaggio e sanguinamento al sondaggio.

Procedura clinica Tutti i soggetti hanno risposto a un questionario che valutava l'età, il sesso e il livello di istruzione. È stata condotta una valutazione clinica della malattia parodontale secondo gli standard internazionali. I CPP, inclusi indice di placca, profondità di sondaggio, sanguinamento al sondaggio e perdita di attacco clinico, sono stati registrati da sei siti per dente di ciascun soggetto utilizzando una sonda parodontale dello stesso ricercatore. La raccolta del campione e le procedure di valutazione istopatologica sono state eseguite come nel nostro precedente rapporto. In breve, i campioni di striscio sono stati raccolti dalla mucosa gengivale aderente dell'area premolare-molare superiore e dalla mucosa buccale della guancia corrispondente utilizzando due cytobrushes sterili separati. I campioni sono stati fissati su vetrini. I campioni bioptici sono stati prelevati dall'area vestibolare dei molari mascellari durante l'estrazione del dente o l'allungamento della corona utilizzando una lama chirurgica e fissati in formalina al 10% fino all'analisi. Durante l'ispezione microscopica, ogni soggetto si è sciacquato la bocca prima di ottenere i campioni per ridurre la possibilità di artefatti dovuti ai resti di cromatina.

Procedura di laboratorio Per valutare le cellule epiteliali orali esfoliate contenenti la conta dei micronuclei (l'esito primario), la reazione di Feulgen è stata eseguita su tutti i campioni di striscio. Le cellule sono state poste in un fissativo per la colorazione nucleare e l'analisi utilizzando il reagente di Schiff. I micronuclei nei campioni di striscio buccale e gengivale sono stati analizzati osservandoli in immersione in olio a 1000 ingrandimenti. Sono state controllate mille cellule ed è stata valutata la conta dei micronuclei presenti. È stato stimato il verificarsi di cambiamenti morfologici nucleari, come la presenza di due nuclei all'interno di una cellula, nuclei che apparivano fissati con una banda negativa di Feulgen, nuclei rimpiccioliti, cromatina condensata, disintegrazione nucleare che comportava la perdita dell'integrità nucleare e dissoluzione nucleare. Per calcolare le celle è stata utilizzata una strategia a zigzag.

Il danno istopatologico (l'esito secondario) è stato valutato concentrandosi sulle densità delle cellule infiammatorie e vascolari. Il danno è stato valutato utilizzando un metodo di valutazione istopatologica semiquantitativo modificato utilizzando una scala che va da 0 a 3 (0: nessuno, 1: lieve, 2: moderato e 3: intenso). I campioni di tessuto sono stati fissati in cera di paraffina, sezionati in serie con uno spessore di 4 µm, colorati con ematossilina-eosina ed esaminati con un ingrandimento di 400 ×. Tutti i campioni di striscio e tessuto sono stati analizzati contemporaneamente e nello stesso laboratorio dallo stesso investigatore in cieco.

Bias La valutazione dello stato di salute sistemica, della storia dentale e delle abitudini al fumo di ciascun partecipante si è basata su informazioni auto-riportate indipendentemente dalle cartelle cliniche ufficiali. Un ricercatore ha raccolto i dati e i campioni dai partecipanti mentre un altro ricercatore ha intrapreso le indagini di laboratorio. Per evitare distorsioni, cinque aree campione sono state selezionate casualmente durante gli esami istologici.

Dimensione dello studio La dimensione del campione è stata determinata utilizzando G*Power versione 3.1.9.4, assumendo un livello di significatività alfa di 0,05, un valore beta di 0,1 e una potenza del 90%. Poiché c'erano quattro gruppi di studio e la necessità di 20 partecipanti per gruppo, ottanta soggetti sono stati inclusi nello studio.

Metodi statistici Per tutte le analisi statistiche è stato utilizzato il programma software Number Cruncher Statistical System 2007. Le statistiche descrittive (media, deviazione standard, mediana) sono state utilizzate per valutare i dati. Il test di analisi della varianza unidirezionale è stato utilizzato per confrontare le medie di tre o più parametri distribuiti normalmente. Il test di Bonferroni è stato utilizzato per determinare le differenze significative nei confronti a coppie tra i gruppi. Il test del chi quadrato di Pearson è stato utilizzato per confrontare i dati qualitativi. La significatività è stata valutata ai livelli p<0,01 e p<0,05.