吸烟对口腔组织样本的影响

研究设计和设置 这是一项单中心、研究者设盲的横断面研究。 工作于 2018 年 11 月至 2019 年 7 月在土耳其伊斯坦布尔的牙周病学系进行。 研究程序根据赫尔辛基宣言的指导方针进行，并经大学伦理委员会批准（协议代码：10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759； 批准日期：2018 年 10 月 30 日）。 本研究也使用了我们之前研究中六名牙周组织健康的非吸烟参与者的数据。 在向符合条件的受试者口头解释研究后，那些愿意参加的人签署了一份书面的知情同意书。 有关受试者的个人身份信息被保密。 根据加强流行病学观察研究报告指南对研究进行了审查。

参与者 80 名全身健康的男性和女性受试者参加了这项研究。 参与者是从 2018 年 11 月至 2019 年 7 月期间来我科进行牙周检查的患者中招募的。 根据 2017 年牙周和种植体周围疾病和病症分类世界研讨会，对临床健康的牙周组织和广泛性牙周炎 III-IV 期/B-C 级进行了诊断。 受试者分为四组：患有全身性牙周炎的吸烟者（SGP；n = 20）、患有全身性牙周炎的非吸烟者（NGP；n = 20）、患有临床健康牙周组织的吸烟者（SHP；n = 20）和非吸烟者具有临床健康的牙周组织（NHP；n = 20）。 需要满足以下标准才能被视为牙周炎受试者：存在广泛性牙周炎，存在至少 20 颗牙齿，存在具有牙龈切除术适应症的磨牙，牙冠延长或拔牙探诊深度≥5mm，临床附着丧失 ≥ 5 毫米，并且存在至少 10 颗探诊深度 ≥ 5 毫米的牙齿。 以下标准表明临床上健康的牙周组织：健康且完整的牙周组织、无探诊深度和探诊出血。

临床程序 所有受试者都回答了一份评估年龄、性别和教育水平的问卷。 根据国际标准对牙周病进行临床评估。 CPP，包括菌斑指数、探诊深度、探诊出血和临床附着丧失，由同一研究人员使用牙周探针从每个受试者的每颗牙齿的六个部位进行记录。 样本收集和组织病理学评估程序按照我们之前的报告进行。 简而言之，使用两个单独的无菌细胞刷从上前磨牙区域的附着牙龈粘膜和匹配脸颊的颊粘膜收集涂片样本。 样品固定在载玻片上。 在拔牙或牙冠延长期间使用手术刀片从上颌磨牙的前庭区域采集活检样本，并在分析前固定在 10% 福尔马林中。 在显微镜检查期间，每个受试者在获取样本之前漱口，以减少通过染色质残留物产生伪影的可能性。

实验室程序 为了评估含有微核计数的脱落口腔上皮细胞（主要结果），对所有涂片样本进行了 Feulgen 反应。 将细胞置于固定液中进行核染色并使用希夫氏试剂进行分析。 通过在 1000 倍放大倍数下在油浸中观察它们来分析颊和牙龈涂片样品中的微核。 检查了一千个细胞，并评估了存在的微核计数。 估计了核形态变化的发生，例如细胞内存在两个核、出现 Feulgen 阴性带束缚的核、缩小的核、凝聚的染色质、涉及核完整性丧失的核解体和核溶解。 锯齿形策略用于计算单元格。

通过关注炎症细胞和血管密度来评估组织病理学损伤（次要结果）。 使用改进的半定量组织病理学评估方法评估损伤，使用范围从 0 到 3 的量表（0：无，1：轻度，2：中度，和 3：强烈）。 组织样本固定在石蜡中，以 4 µm 厚度连续切片，用苏木精-伊红染色，并在 400 倍放大倍数下检查。 所有涂片和组织样本均由同一位盲法研究者在同一实验室同时进行化验。

偏差 对每位参与者的全身健康状况、牙科病史和吸烟习惯的评估均基于自我报告的信息，而不考虑官方医疗记录。 一名研究人员从参与者那里收集数据和样本，而另一名研究人员进行实验室调查。 为避免偏差，在组织学检查期间随机选择了五个样本区域。

研究规模 样本量是使用 G*Power 版本 3.1.9.4 确定的， 假设 alpha 显着性水平为 0.05，beta 值为 0.1，功效为 90%。 由于有四个研究组，每组需要 20 名参与者，因此研究中包括 80 名受试者。

统计方法 Number Cruncher Statistical System 2007 软件程序用于所有统计分析。 描述性统计（平均值、标准偏差、中位数）用于评估数据。 方差检验的单向分析用于比较三个或更多正态分布参数的均值。 Bonferroni 检验用于确定组间成对比较的显着差异。 Pearson 卡方检验用于比较定性数据。 在 p<0.01 和 p<0.05 水平评估显着性。