A dohányzás hatásai a szájszövetmintákra

Vizsgálat tervezése és beállítása Ez egy egyközpontú, kutató által vakított, keresztmetszeti vizsgálat volt. A munka a törökországi isztambuli Parodontológiai Osztályon zajlott 2018 novembere és 2019 júliusa között. A tanulmányi eljárást a Helsinki Nyilatkozat irányelvei szerint végezték, és az egyetem Etikai Bizottsága hagyta jóvá (Protokoll kód: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; jóváhagyás időpontja: 2018. október 30.). Hat nemdohányzó, egészséges parodontiummal rendelkező résztvevő korábbi vizsgálataiból származó adatait ebben a vizsgálatban is felhasználtuk. Miután a vizsgálatot szóban elmagyarázták a jogosult alanyoknak, a részt venni szándékozók írásos, tájékozott beleegyező nyilatkozatot írtak alá. Az alanyokkal kapcsolatos személyes, azonosítható információkat bizalmasan kezelték. A tanulmányt az Epidemiológiai megfigyelési tanulmányok jelentésének megerősítése iránymutatások alapján felülvizsgálták.

Résztvevők Nyolcvan szisztémásan egészséges alanyt vontak be a vizsgálatba, férfiakat és nőket egyaránt. A résztvevőket olyan betegekből vettük fel, akik 2018 novembere és 2019 júliusa között érkeztek osztályunkra parodontológiai vizsgálatra. A klinikailag egészséges periodontium és generalizált parodontitis III-IV. stádiumú/B-C fokozatú diagnosztizálása a 2017-es World Workshop on the Classification of Periodontalis and Peri-implant Diseases and Conditions szerint történt. Az alanyokat négy csoportra osztották: generalizált parodontitisben szenvedők (SGP; n = 20), nemdohányzók generalizált parodontitisben (NGP; n = 20), klinikailag egészséges fogágygyulladásban szenvedők (SHP; n = 20) és nemdohányzók klinikailag egészséges parodontiummal (NHP; n = 20). A következő kritériumoknak kell teljesülniük ahhoz, hogy parodontitisnek minősüljenek: generalizált parodontitis jelenléte, legalább 20 fog megléte, ínyeltávolításra utaló őrlőfog megléte, korona meghosszabbítása vagy extrakciója 5 mm-nél nagyobb szondázási mélységgel, klinikai kötődési veszteség ≥ 5 mm, és legalább tíz fog jelenléte ≥ 5 mm szondázási mélységgel. A következő kritériumok klinikailag egészséges parodontiumot jeleztek: egészséges és ép fogágy, nincs szondázási mélység és vérzés szondázáskor.

Klinikai eljárás Minden alany válaszolt egy kérdőívre, amely felmérte az életkort, a nemet és az iskolai végzettséget. A fogágybetegség klinikai értékelését a nemzetközi szabványok szerint végezték. A CPP-ket, beleértve a plakk-indexet, a szondázási mélységet, a vérzést a szondázáskor és a klinikai tapadás elvesztését, foganként hat helyről rögzítették minden alanytól fogankénti foganként, ugyanaz a kutató periodontális szondával. A mintagyűjtést és a kórszövettani értékelési eljárásokat az előző jelentésünkhöz hasonlóan végeztük. Röviden összefoglalva, a felső premoláris-moláris terület kapcsolódó ínynyálkahártyájáról és az illeszkedő arc bukkális nyálkahártyájáról két különálló, steril citokefe segítségével kenetmintákat vettünk. A mintákat tárgylemezekre rögzítettük. A maxilláris őrlőfogak vesztibuláris területéről a foghúzás vagy a koronahosszabbítás során sebészeti pengével biopsziás mintákat vettünk és 10%-os formalinban rögzítettük az elemzésig. A mikroszkópos vizsgálat során minden alany kiöblítette a száját, mielőtt mintát vett volna, hogy csökkentse a kromatinmaradványok miatti műtermékek lehetőségét.

Laboratóriumi eljárás A hámozott szájhámsejtek mikronukleuszszámának értékelésére (az elsődleges eredmény) minden kenetmintán Feulgen-reakciót végeztünk. A sejteket fixálóba helyeztük a magfestéshez és a Schiff-reagenssel végzett elemzéshez. A bukkális és gingivális kenetmintákban lévő mikronukleuszokat 1000-szeres nagyítással olajmerítésben elemeztük. Ezer sejtet ellenőriztünk, és meghatároztuk a jelenlévő mikronukleusok számát. Megbecsülték a magmorfológiai változások előfordulását, például két sejtmag jelenlétét egy sejten belül, a Feulgen-negatív sávval összeszorított sejtmagokat, összezsugorodott magokat, kondenzált kromatint, a mag integritásának elvesztésével járó nukleáris szétesést és a magfeloldódást. Cikcakk stratégiát alkalmaztunk a sejtek kiszámításához.

A hisztopatológiai károsodást (másodlagos kimenetel) a gyulladásos sejt- és érsűrűségre összpontosítva értékelték. A károsodást módosított szemikvantitatív kórszövettani értékelési módszerrel értékelték, 0-tól 3-ig terjedő skálán (0: nincs, 1: enyhe, 2: közepes és 3: intenzív). A szövetmintákat paraffinviaszban fixáltuk, 4 µm vastagságú sorozatban metszettek, hematoxilin-eozinnal festettük, és 400-szoros nagyítással vizsgáltuk. Minden kenetet és szövetmintát egyidejűleg és ugyanabban a laboratóriumban vizsgált meg ugyanaz a vak vizsgáló.

Elfogultság Az egyes résztvevők szisztémás egészségi állapotának, fogászati ​​kórelőzményének és dohányzási szokásainak értékelése saját maguk által közölt információkon alapult, függetlenül a hivatalos orvosi feljegyzésektől. Az egyik kutató az adatokat és mintákat gyűjtötte a résztvevőktől, egy másik kutató pedig a laboratóriumi vizsgálatokat végezte. A torzítás elkerülése érdekében a szövettani vizsgálatok során véletlenszerűen öt mintaterületet választottunk ki.

A vizsgálat mérete A minta méretét a G*Power 3.1.9.4-es verziójával határoztuk meg, 0,05-ös alfa-szignifikanciaszintet, 0,1-es béta-értéket és 90%-os teljesítményt feltételezve. Mivel négy vizsgálati csoport volt, és csoportonként 20 résztvevőre volt szükség, nyolcvan alanyt vontak be a vizsgálatba.

Statisztikai módszerek Minden statisztikai elemzéshez a Number Cruncher Statistical System 2007 szoftvert használtuk. Az adatok kiértékeléséhez leíró statisztikákat (átlag, szórás, medián) használtunk. Az egytényezős varianciaanalízist három vagy több normális eloszlású paraméter átlagának összehasonlítására használtuk. A Bonferroni tesztet használtuk a csoportok közötti páronkénti összehasonlítás szignifikáns különbségeinek meghatározására. A minőségi adatok összehasonlítására a Pearson khi-négyzet tesztet használtuk. A szignifikanciát p<0,01 és p<0,05 szinten értékeltük.