Effecten van roken op orale weefselmonsters

Onderzoeksopzet en opzet Dit was een onderzoeker-geblindeerd, cross-sectioneel onderzoek in één centrum. Tussen november 2018 en juli 2019 werd er gewerkt op de afdeling Parodontologie in Istanbul, Turkije. De studieprocedure werd uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Verklaring van Helsinki en goedgekeurd door de Ethische Commissie van de universiteit (Protocolcode: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; datum goedkeuring: 30 oktober 2018). Gegevens van zes niet-rokende deelnemers met gezond parodontium uit onze eerdere onderzoeken zijn ook in dit onderzoek gebruikt. Nadat de studie mondeling was uitgelegd aan in aanmerking komende proefpersonen, tekenden degenen die bereid waren om deel te nemen een schriftelijk, geïnformeerd toestemmingsformulier. Persoonlijke, identificeerbare informatie over de proefpersonen werd vertrouwelijk behandeld. De studie werd beoordeeld volgens de richtlijnen voor het versterken van de rapportage van observatiestudies in epidemiologie.

Deelnemers Tachtig systemisch gezonde proefpersonen, zowel mannen als vrouwen, namen deel aan het onderzoek. Deelnemers werden geworven uit patiënten die tussen november 2018 en juli 2019 naar onze afdeling kwamen voor parodontaal onderzoek. Diagnoses van klinisch gezond parodontium en gegeneraliseerde parodontitis stadia III-IV/graad B-C werden uitgevoerd volgens de 2017 World Workshop on the Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions. De proefpersonen werden in vier groepen verdeeld: rokers met gegeneraliseerde parodontitis (SGP; n = 20), niet-rokers met gegeneraliseerde parodontitis (NGP; n = 20), rokers met klinisch gezond parodontium (SHP; n = 20) en niet-rokers met klinisch gezond parodontium (NHP; n = 20). Aan de volgende criteria moest worden voldaan om als parodontitispatiënt te worden beschouwd: de aanwezigheid van gegeneraliseerde parodontitis, de aanwezigheid van ten minste 20 tanden, de aanwezigheid van een kies met een indicatie van gingivectomie, kroonverlenging of extractie met een sonderingsdiepte ≥ 5 mm, klinisch aanhechtingsverlies ≥ 5 mm en de aanwezigheid van ten minste tien tanden met een sonderingsdiepte ≥ 5 mm. De volgende criteria duidden op een klinisch gezond parodontium: een gezond en intact parodontium, geen sonderingsdiepte en bloeding bij sondering.

Klinische procedure Alle proefpersonen beantwoordden een vragenlijst waarin leeftijd, geslacht en opleidingsniveau werden beoordeeld. Een klinische evaluatie van parodontitis werd uitgevoerd volgens internationale normen. De CPP's, inclusief plaque-index, sondeerdiepte, bloeding bij sonderen en verlies van klinische hechting, werden geregistreerd vanaf zes locaties per tand van elke proefpersoon met behulp van een parodontale sonde door dezelfde onderzoeker. De monsterverzameling en histopathologische evaluatieprocedures werden uitgevoerd zoals in ons vorige rapport. In het kort werden uitstrijkjes verzameld van het aangehechte tandvleesslijmvlies van het bovenste premolaar-kiesgebied en het mondslijmvlies van de bijpassende wang met behulp van twee afzonderlijke steriele cytoborstels. Monsters werden op glasplaatjes gefixeerd. Biopsiemonsters werden genomen uit het vestibulaire gebied van de maxillaire kiezen tijdens tandextractie of kroonverlenging met behulp van een chirurgisch mes en gefixeerd in 10% formaline tot analyse. Tijdens microscopische inspectie spoelde elke proefpersoon zijn mond voordat er monsters werden genomen om de mogelijkheid van artefacten door chromatineresten te verminderen.

Laboratoriumprocedure Om de geëxfolieerde orale epitheelcellen met micronucleitellingen (de primaire uitkomstmaat) te evalueren, werd de Feulgen-reactie uitgevoerd op alle uitstrijkjes. Cellen werden in een fixeermiddel geplaatst voor nucleaire kleuring en analyse met behulp van Schiff's reagens. Micronuclei in de buccale en gingivale uitstrijkmonsters werden geanalyseerd door ze te observeren in olie-onderdompeling bij een vergroting van 1000x. Duizend cellen werden gecontroleerd en het aantal aanwezige micronuclei werd bepaald. Het optreden van nucleaire morfologische veranderingen, zoals de aanwezigheid van twee kernen in een cel, kernen die vastzaten met een Feulgen-negatieve band, gekrompen kernen, gecondenseerd chromatine, nucleaire desintegratie waarbij de nucleaire integriteit verloren ging, en nucleaire ontbinding werd geschat. Een zigzagstrategie werd gebruikt om de cellen te berekenen.

Histopathologische schade (de secundaire uitkomst) werd geëvalueerd door te focussen op ontstekingscel- en vasculaire dichtheden. Schade werd beoordeeld met behulp van een gemodificeerde semi-kwantitatieve histopathologische beoordelingsmethode met behulp van een schaal van 0 tot 3 (0: geen, 1: mild, 2: matig en 3: intens). Weefselmonsters werden gefixeerd in paraffinewas, in serie gesneden met een dikte van 4 µm, gekleurd met hematoxyline-eosine en onderzocht bij een vergroting van 400 x. Alle uitstrijkjes en weefselmonsters werden gelijktijdig en in hetzelfde laboratorium getest door dezelfde geblindeerde onderzoeker.

Bias De evaluatie van de systemische gezondheidstoestand, tandheelkundige geschiedenis en rookgewoonten van elke deelnemer was gebaseerd op zelfgerapporteerde informatie, ongeacht officiële medische dossiers. Eén onderzoeker verzamelde de gegevens en monsters van de deelnemers, terwijl een andere onderzoeker de laboratoriumonderzoeken deed. Om vertekening te voorkomen, werden vijf steekproefgebieden willekeurig geselecteerd tijdens de histologische onderzoeken.

Studieomvang De steekproefomvang is bepaald met behulp van G*Power versie 3.1.9.4, uitgaande van een alfa-significantieniveau van 0,05, een bètawaarde van 0,1 en een vermogen van 90%. Omdat er vier studiegroepen waren en er behoefte was aan 20 deelnemers per groep, werden tachtig proefpersonen in het onderzoek opgenomen.

Statistische methoden Voor alle statistische analyses is het softwareprogramma Number Cruncher Statistical System 2007 gebruikt. Beschrijvende statistieken (gemiddelde, standaarddeviatie, mediaan) werden gebruikt om de gegevens te evalueren. De one-way variantieanalyse test werd gebruikt om de gemiddelden van drie of meer normaal verdeelde parameters te vergelijken. De Bonferroni-test werd gebruikt om de significante verschillen in paarsgewijze vergelijkingen tussen de groepen te bepalen. De Pearson chikwadraattoets werd gebruikt om kwalitatieve gegevens te vergelijken. De significantie werd beoordeeld op de niveaus p<0,01 en p<0,05.