Effets du tabagisme sur les échantillons de tissus buccaux

Conception et cadre de l'étude Il s'agissait d'une étude transversale monocentrique menée en aveugle par l'investigateur. Les travaux ont été menés au Département de parodontologie d'Istanbul, en Turquie, entre novembre 2018 et juillet 2019. La procédure d'étude a été menée conformément aux directives de la Déclaration d'Helsinki et approuvée par le comité d'éthique de l'université (code de protocole : 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759 ; date d'approbation : 30 octobre 2018). Les données de six participants non-fumeurs avec un parodonte sain de nos études précédentes ont également été utilisées dans cette étude. Après que l'étude ait été expliquée verbalement aux sujets éligibles, ceux qui souhaitaient participer ont signé un formulaire de consentement écrit et éclairé. Les informations personnelles et identifiables sur les sujets sont restées confidentielles. L'étude a été examinée conformément aux lignes directrices sur le renforcement de la déclaration des études observationnelles en épidémiologie.

Participants Quatre-vingts sujets systémiquement sains, hommes et femmes, ont été inscrits à l'étude. Les participants ont été recrutés parmi les patients venus dans notre service pour des examens parodontaux entre novembre 2018 et juillet 2019. Les diagnostics de parodonte cliniquement sain et de parodontite généralisée stades III-IV/grades B-C ont été effectués conformément à l'atelier mondial 2017 sur la classification des maladies et affections parodontales et péri-implantaires. Les sujets ont été séparés en quatre groupes : les fumeurs atteints de parodontite généralisée (SGP ; n = 20), les non-fumeurs atteints de parodontite généralisée (NGP ; n = 20), les fumeurs atteints de parodonte cliniquement sain (SHP ; n = 20) et les non-fumeurs. avec un parodonte cliniquement sain (NHP ; n = 20). Les critères suivants devaient être remplis pour être considéré comme un sujet de parodontite : la présence d'une parodontite généralisée, la présence d'au moins 20 dents, la présence d'une molaire avec une indication de gingivectomie, d'allongement de couronne ou d'extraction avec une profondeur de sondage ≥ 5 mm, perte d'attache clinique ≥ 5 mm et présence d'au moins dix dents avec une profondeur de sondage ≥ 5 mm. Les critères suivants indiquaient un parodonte cliniquement sain : un parodonte sain et intact, pas de profondeur de sondage et un saignement au sondage.

Procédure clinique Tous les sujets ont répondu à un questionnaire qui évaluait l'âge, le sexe et le niveau d'éducation. Une évaluation clinique de la maladie parodontale a été réalisée selon les normes internationales. Les CPP, y compris l'indice de plaque, la profondeur de sondage, le saignement au sondage et la perte d'attache clinique, ont été enregistrés à partir de six sites par dent de chaque sujet à l'aide d'une sonde parodontale par le même chercheur. Les procédures de collecte d'échantillons et d'évaluation histopathologique ont été effectuées comme dans notre rapport précédent. En bref, des échantillons de frottis ont été prélevés à partir de la muqueuse gingivale attachée de la zone prémolaire-molaire supérieure et de la muqueuse buccale de la joue correspondante à l'aide de deux cytobrosses stériles séparées. Les échantillons ont été fixés sur des lames de verre. Des échantillons de biopsie ont été prélevés dans la zone vestibulaire des molaires maxillaires lors d'une extraction dentaire ou d'un allongement de couronne à l'aide d'une lame chirurgicale et fixés dans du formol à 10 % jusqu'à l'analyse. Au cours de l'inspection microscopique, chaque sujet s'est rincé la bouche avant d'obtenir des échantillons afin de réduire la possibilité d'artefacts par des restes de chromatine.

Procédure de laboratoire Pour évaluer les cellules épithéliales orales exfoliées contenant le nombre de micronoyaux (résultat principal), la réaction de Feulgen a été réalisée sur tous les échantillons de frottis. Les cellules ont été placées dans un fixateur pour la coloration nucléaire et l'analyse en utilisant le réactif de Schiff. Les micronoyaux dans les échantillons de frottis buccaux et gingivaux ont été analysés en les observant en immersion dans l'huile à un grossissement de 1000×. Mille cellules ont été contrôlées et le nombre de micronoyaux présents a été évalué. L'apparition de changements morphologiques nucléaires, tels que la présence de deux noyaux dans une cellule, des noyaux qui semblaient serrés avec une bande négative de Feulgen, des noyaux rétrécis, une chromatine condensée, une désintégration nucléaire impliquant la perte de l'intégrité nucléaire et une dissolution nucléaire a été estimée. Une stratégie en zigzag a été utilisée pour calculer les cellules.

Les dommages histopathologiques (le résultat secondaire) ont été évalués en se concentrant sur les densités cellulaires et vasculaires inflammatoires. Les dommages ont été évalués à l'aide d'une méthode d'évaluation histopathologique semi-quantitative modifiée utilisant une échelle allant de 0 à 3 (0 : aucun, 1 : léger, 2 : modéré et 3 : intense). Des échantillons de tissus ont été fixés dans de la cire de paraffine, sectionnés en série à une épaisseur de 4 µm, colorés avec de l'hématoxyline-éosine et examinés à un grossissement de 400×. Tous les échantillons de frottis et de tissus ont été analysés simultanément et dans le même laboratoire par le même enquêteur en aveugle.

Biais L'évaluation de l'état de santé systémique, des antécédents dentaires et des habitudes tabagiques de chaque participant était basée sur des informations autodéclarées, indépendamment des dossiers médicaux officiels. Un chercheur a recueilli les données et les échantillons des participants tandis qu'un autre chercheur a entrepris les investigations en laboratoire. Pour éviter les biais, cinq zones d'échantillonnage ont été sélectionnées au hasard lors des examens histologiques.

Taille de l'étude La taille de l'échantillon a été déterminée à l'aide de G*Power version 3.1.9.4, en supposant un niveau de signification alpha de 0,05, une valeur bêta de 0,1 et une puissance de 90 %. Comme il y avait quatre groupes d'étude et un besoin de 20 participants par groupe, quatre-vingts sujets ont été inclus dans l'étude.

Méthodes statistiques Le logiciel Number Cruncher Statistical System 2007 a été utilisé pour toutes les analyses statistiques. Des statistiques descriptives (moyenne, écart-type, médiane) ont été utilisées pour évaluer les données. Le test d'analyse de variance à un facteur a été utilisé pour comparer les moyennes de trois paramètres ou plus normalement distribués. Le test de Bonferroni a été utilisé pour déterminer les différences significatives dans les comparaisons par paires entre les groupes. Le test du chi carré de Pearson a été utilisé pour comparer les données qualitatives. La signification a été évaluée aux niveaux p<0,01 et p<0,05.