Účinky kouření na vzorky ústní tkáně

Design studie a nastavení Jednalo se o jednocentrovou, zkoušejícím zaslepenou, průřezovou studii. Práce probíhaly na katedře parodontologie v Istanbulu v Turecku od listopadu 2018 do července 2019. Postup studie byl proveden podle pokynů Helsinské deklarace a schválen Etickou komisí univerzity (kód protokolu: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; datum schválení: 30. října 2018). V této studii byla také použita data od šesti nekuřáků se zdravým parodontem z našich předchozích studií. Poté, co byla studie slovně vysvětlena způsobilým subjektům, ti, kteří se chtěli zúčastnit, podepsali písemný informovaný souhlas. Osobní, identifikovatelné informace o subjektech byly důvěrné. Studie byla přezkoumána v souladu s pokyny pro posílení hlášení o pozorovacích studiích v epidemiologii.

Účastníci Do studie bylo zařazeno 80 systémově zdravých subjektů, mužů i žen. Účastníci se rekrutovali z pacientů, kteří na naše oddělení přišli na parodontologická vyšetření v období od listopadu 2018 do července 2019. Diagnostika klinicky zdravého parodontu a generalizované parodontitidy stadia III-IV/stupně B-C byla provedena podle Světového workshopu o klasifikaci parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů v roce 2017. Subjekty byly rozděleny do čtyř skupin: kuřáci s generalizovanou parodontitidou (SGP; n = 20), nekuřáci s generalizovanou parodontitidou (NGP; n = 20), kuřáci s klinicky zdravým parodontem (SHP; n = 20) a nekuřáci s klinicky zdravým parodontem (NHP; n = 20). K tomu, abychom mohli být považováni za pacienta s parodontitidou, je třeba splnit následující kritéria: přítomnost generalizované parodontitidy, přítomnost alespoň 20 zubů, přítomnost moláru s indikací gingivektomie, prodloužení korunky nebo extrakce s hloubkou sondy ≥ 5 mm, klinická ztráta úponu ≥ 5 mm a přítomnost alespoň deseti zubů s hloubkou sondy ≥ 5 mm. Následující kritéria indikovala klinicky zdravý parodont: zdravý a intaktní parodont, žádná hloubka sondy a krvácení při sondování.

Klinický postup Všechny subjekty odpověděly na dotazník, který hodnotil věk, pohlaví a úroveň vzdělání. Klinické hodnocení onemocnění parodontu bylo provedeno podle mezinárodních standardů. CPP, včetně indexu plaku, hloubky sondování, krvácení při sondování a klinické ztráty úponu, byly zaznamenány ze šesti míst na zub od každého subjektu pomocí periodontální sondy stejným výzkumníkem. Postupy odběru vzorků a histopatologického hodnocení byly provedeny jako v naší předchozí zprávě. Stručně, vzorky nátěru byly odebrány z připojené gingivální sliznice horní premolárně-molárové oblasti a bukální sliznice lícující tváře pomocí dvou samostatných sterilních cytokartáčů. Vzorky byly fixovány na sklíčka. Bioptické vzorky byly odebrány z vestibulární oblasti maxilárních molárů během extrakce zubu nebo prodlužování korunky pomocí chirurgické čepele a fixovány v 10% formalínu až do analýzy. Během mikroskopické kontroly si každý subjekt před odebráním vzorků vypláchl ústa, aby se snížila možnost artefaktů prostřednictvím zbytků chromatinu.

Laboratorní postup K vyhodnocení počtu exfoliovaných orálních epiteliálních buněk obsahujících mikrojader (primární výsledek) byla na všech vzorcích nátěru provedena Feulgenova reakce. Buňky byly umístěny do fixativu pro nukleární barvení a analýzu pomocí Schiffova činidla. Mikrojádra ve vzorcích bukálního a gingiválního nátěru byla analyzována jejich pozorováním v olejové imerzi při 1000násobném zvětšení. Bylo zkontrolováno tisíc buněk a byl hodnocen počet přítomných mikrojader. Byl odhadnut výskyt jaderných morfologických změn, jako je přítomnost dvou jader v buňce, jádra, která se jevila jako sevřená s Feulgenovým negativním pásem, zmenšená jádra, kondenzovaný chromatin, rozpad jádra zahrnující ztrátu integrity jádra a rozpouštění jádra. K výpočtu buněk byla použita cik-cak strategie.

Histopatologické poškození (sekundární výsledek) bylo hodnoceno zaměřením na hustotu zánětlivých buněk a cév. Poškození bylo hodnoceno pomocí modifikované semikvantitativní metody histopatologického hodnocení pomocí stupnice od 0 do 3 (0: žádné, 1: mírné, 2: střední a 3: intenzivní). Vzorky tkání byly fixovány v parafinovém vosku, sériově nařezány na tloušťku 4 um, obarveny hematoxylinem-eosinem a vyšetřeny při 400násobném zvětšení. Všechny vzorky nátěrů a tkání byly testovány současně a ve stejné laboratoři stejným zaslepeným výzkumníkem.

Zaujatost Hodnocení systémového zdravotního stavu, zubní anamnézy a kuřáckých návyků každého účastníka bylo založeno na informacích, které si sám uvedl bez ohledu na oficiální lékařské záznamy. Jeden výzkumník shromáždil data a vzorky od účastníků, zatímco jiný výzkumník provedl laboratorní vyšetřování. Aby se předešlo zkreslení, bylo během histologických vyšetření náhodně vybráno pět vzorových oblastí.

Velikost studie Velikost vzorku byla určena pomocí G*Power verze 3.1.9.4, za předpokladu hladiny významnosti alfa 0,05, hodnoty beta 0,1 a 90% síly. Protože existovaly čtyři studijní skupiny a potřeba 20 účastníků na skupinu, bylo do studie zahrnuto osmdesát subjektů.

Statistické metody Pro všechny statistické analýzy byl použit softwarový program Number Cruncher Statistical System 2007. K vyhodnocení dat byla použita deskriptivní statistika (průměr, směrodatná odchylka, medián). Jednosměrná analýza rozptylového testu byla použita k porovnání průměrů tří nebo více normálně rozdělených parametrů. Ke stanovení signifikantních rozdílů v párovém srovnání mezi skupinami byl použit Bonferroniho test. Pro srovnání kvalitativních dat byl použit Pearsonův chí-kvadrát test. Významnost byla hodnocena na hladinách p<0,01 a p<0,05.