Effekter av røyking på orale vevsprøver

Studiedesign og setting Dette var en enkeltsenter, etterforskerblindet, tverrsnittsstudie. Arbeidet ble utført ved Institutt for periodontologi i Istanbul, Tyrkia, mellom november 2018 og juli 2019. Studieprosedyren ble utført i henhold til retningslinjene i Helsinki-erklæringen og godkjent av universitetets etiske komité (Protokollkode: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; dato for godkjenning: 30. oktober 2018). Data fra seks ikke-røykende deltakere med frisk periodontium fra våre tidligere studier ble også brukt i denne studien. Etter at studien ble muntlig forklart til kvalifiserte personer, signerte de som var villige til å delta et skriftlig, informert samtykkeskjema. Personlig, identifiserbar informasjon om forsøkspersonene ble holdt konfidensiell. Studien ble gjennomgått etter retningslinjene for styrking av rapportering av observasjonsstudier i epidemiologi.

Deltakere Åtti systemisk friske forsøkspersoner, både menn og kvinner, ble registrert i studien. Deltakerne ble rekruttert fra pasienter som kom til vår avdeling for periodontale undersøkelser mellom november 2018 og juli 2019. Diagnoser av klinisk frisk periodontium og generalisert periodontitt stadier III-IV/grad B-C ble utført i henhold til 2017 World Workshop on the Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions. Forsøkspersonene ble delt inn i fire grupper: røykere med generalisert periodontitt (SGP; n = 20), ikke-røykere med generalisert periodontitt (NGP; n = 20), røykere med klinisk frisk periodontium (SHP; n = 20) og ikke-røykere med klinisk frisk periodontium (NHP; n = 20). Følgende kriterier måtte oppfylles for å bli betraktet som en periodontitt-person: tilstedeværelse av generalisert periodontitt, tilstedeværelse av minst 20 tenner, tilstedeværelse av en molar med indikasjon på gingivektomi, kroneforlengelse eller ekstraksjon med en sonderingsdybde ≥ 5 mm, klinisk festetap ≥ 5 mm, og tilstedeværelsen av minst ti tenner med en sonderingsdybde ≥ 5 mm. Følgende kriterier indikerte et klinisk sunt periodontium: et sunt og intakt periodontium, ingen sonderingsdybde og blødning ved sondering.

Klinisk prosedyre Alle forsøkspersonene svarte på et spørreskjema som vurderte alder, kjønn og utdanningsnivå. En klinisk evaluering av periodontal sykdom ble utført i henhold til internasjonale standarder. CPP-ene, inkludert plakkindeks, sonderingsdybde, blødning ved sondering og klinisk festetap, ble registrert fra seks steder per tann fra hvert individ ved bruk av en periodontal sonde av samme forsker. Prøveinnsamlingen og histopatologisk evalueringsprosedyrer ble utført som i vår forrige rapport. Kort fortalt ble utstryksprøver samlet fra den vedlagte tannkjøttslimhinnen i det øvre premolar-molare området og bukkalslimhinnen i det matchende kinnet ved bruk av to separate sterile cytobørster. Prøver ble festet på glassplater. Biopsiprøver ble tatt fra det vestibulære området av maxillære molarer under tannekstraksjon eller kroneforlengelse ved bruk av et kirurgisk blad og fiksert i 10 % formalin frem til analyse. Under mikroskopisk inspeksjon skyllet hvert forsøksperson munnen før prøver ble tatt for å redusere muligheten for artefakter gjennom kromatinrester.

Laboratorieprosedyre For å evaluere de eksfolierte orale epitelcellene som inneholder antall mikrokjerner (primært utfall), ble Feulgen-reaksjonen utført på alle utstryksprøver. Celler ble plassert i et fiksativ for kjernefysisk farging og analyse ved bruk av Schiffs reagens. Mikrokjerner i bukkal- og gingivalutstrykprøvene ble analysert ved å observere dem i oljenedsenking ved 1000× forstørrelse. Ett tusen celler ble kontrollert, og antallet mikrokjerner tilstede ble vurdert. Forekomsten av kjernefysiske morfologiske endringer, slik som tilstedeværelsen av to kjerner i en celle, kjerner som så ut til å ha et Feulgen-negativt bånd, krympede kjerner, kondensert kromatin, kjernefysisk desintegrasjon som involverer tap av kjernefysisk integritet og kjernefysisk oppløsning ble estimert. En sikksakk-strategi ble brukt for å beregne cellene.

Histopatologisk skade (det sekundære utfallet) ble evaluert ved å fokusere på inflammatoriske celle- og vaskulære tettheter. Skaden ble vurdert ved bruk av en modifisert semi-kvantitativ histopatologisk vurderingsmetode ved bruk av en skala fra 0 til 3 (0: ingen, 1: mild, 2: moderat og 3: intens). Vevsprøver ble fiksert i parafinvoks, seksjonert i serie med en tykkelse på 4 µm, farget med hematoksylin-eosin og undersøkt ved 400× forstørrelse. Alle utstryk og vevsprøver ble analysert samtidig og i samme laboratorium av den samme blindede etterforskeren.

Bias Evalueringen av hver deltakers systemiske helsestatus, tannhistorie og røykevaner var basert på selvrapportert informasjon uavhengig av offisielle medisinske journaler. En forsker samlet inn data og prøver fra deltakerne mens en annen forsker utførte laboratorieundersøkelsene. For å unngå skjevhet ble fem prøveområder tilfeldig valgt under de histologiske undersøkelsene.

Studiestørrelse Prøvestørrelsen ble bestemt ved å bruke G*Power versjon 3.1.9.4, forutsatt et alfa-signifikansnivå på 0,05, en betaverdi på 0,1 og 90 % kraft. Ettersom det var fire studiegrupper og behov for 20 deltakere per gruppe, ble åtti forsøkspersoner inkludert i studien.

Statistiske metoder Programvaren Number Cruncher Statistical System 2007 ble brukt for alle statistiske analyser. Beskrivende statistikk (gjennomsnitt, standardavvik, median) ble brukt for å evaluere dataene. Enveis variansanalyse-testen ble brukt til å sammenligne gjennomsnittet av tre eller flere normalfordelte parametere. Bonferroni-testen ble brukt til å bestemme de signifikante forskjellene i parvise sammenligninger mellom gruppene. Pearson kjikvadrattest ble brukt til å sammenligne kvalitative data. Signifikans ble evaluert ved nivåene p<0,01 og p<0,05.