Tupakoinnin vaikutukset suun kudosnäytteisiin

Tutkimuksen suunnittelu ja asettaminen Tämä oli yhden keskuksen, tutkijan sokkoutettu, poikkileikkaustutkimus. Työ tehtiin periodontologian osastolla Istanbulissa, Turkissa marraskuun 2018 ja heinäkuun 2019 välisenä aikana. Opiskelumenettely suoritettiin Helsingin julistuksen ohjeiden mukaisesti ja yliopiston eettisen toimikunnan hyväksymä (protokollakoodi: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; hyväksymispäivä: 30. lokakuuta 2018). Myös tässä tutkimuksessa käytettiin aiempien tutkimustemme tietoja kuudelta tupakoimattomalta osallistujalta, joilla oli terve parodontium. Kun tutkimus oli suullisesti selitetty kelvollisille koehenkilöille, osallistumaan halukkaat allekirjoittivat kirjallisen, tietoon perustuvan suostumuslomakkeen. Henkilökohtaiset, tunnistettavissa olevat tiedot kohteista pidettiin luottamuksellisina. Tutkimus arvioitiin Epidemiologian havainnointitutkimusten raportoinnin vahvistaminen -ohjeiden mukaisesti.

Osallistujat Kahdeksankymmentä systeemisesti tervettä henkilöä, sekä miehiä että naisia, otettiin mukaan tutkimukseen. Osallistujat rekrytoitiin potilaista, jotka tulivat osastollemme parodontologian tutkimuksiin marraskuun 2018 ja heinäkuun 2019 välisenä aikana. Kliinisesti terveen parodontiitin ja yleistyneen parodontiittivaiheen III-IV/asteet B-C diagnoosit tehtiin vuoden 2017 parodontaali- ja peri-implanttisairauksien ja -tilojen luokittelua käsittelevän World Workshopin mukaisesti. Koehenkilöt jaettiin neljään ryhmään: tupakoijat, joilla oli yleistynyt parodontiitti (SGP; n = 20), tupakoimattomat, joilla oli yleistynyt parodontiitti (NGP; n = 20), tupakoijat, joilla oli kliinisesti terve parodontiitti (SHP; n = 20) ja tupakoimattomat kliinisesti terveellä parodontiumilla (NHP; n = 20). Seuraavien kriteerien on täytyttävä, jotta hänet voidaan katsoa parodontiittipotilaaksi: yleistynyt parodontiitti, vähintään 20 hampaat, poskihammas, jossa on merkkejä ienpoistosta, kruunun pidentäminen tai poisto, jonka koetussyvyys on ≥ 5 mm, kliinisen kiinnittymisen menetys ≥ 5 mm ja vähintään kymmenen hammasta, joiden mittaussyvyys on ≥ 5 mm. Seuraavat kriteerit osoittivat kliinisesti tervettä parodontiumia: terve ja ehjä parodontiumi, ei mittaussyvyyttä ja verenvuotoa koettaessa.

Kliininen toimenpide Kaikki koehenkilöt vastasivat kyselyyn, jossa arvioitiin ikä, sukupuoli ja koulutustaso. Parodontiittisairauden kliininen arviointi suoritettiin kansainvälisten standardien mukaisesti. CPP-arvot, mukaan lukien plakkiindeksi, mittaussyvyys, verenvuoto koettaessa ja kliinisen kiinnittymisen menetys, kirjattiin kuudesta kohdasta hammasta kohden jokaisesta koehenkilöstä käyttämällä saman tutkijan parodontaalista koetinta. Näytteenotto ja histopatologiset arviointitoimenpiteet suoritettiin kuten edellisessä raportissamme. Lyhyesti sanottuna sivelynäytteitä otettiin ylemmän esihammas-hampaalueen kiinnitetystä ikenen limakalvosta ja vastaavan posken posken limakalvosta käyttämällä kahta erillistä steriiliä sytoharjaa. Näytteet kiinnitettiin lasilevyille. Biopsianäytteet otettiin poskihampaiden vestibulaarialueelta hampaan poiston tai kruunun pidentämisen aikana käyttämällä kirurgista terää ja kiinnitettiin 10 % formaliiniin analyysiin asti. Mikroskooppisen tarkastuksen aikana jokainen koehenkilö huuhteli suunsa ennen näytteiden ottamista vähentääkseen artefaktien mahdollisuutta kromatiinijäännösten kautta.

Laboratoriomenettely Mikrotumamäärän (ensisijainen tulos) sisältävien kuoriutuneiden suun epiteelisolujen arvioimiseksi kaikille sivelynäytteille suoritettiin Feulgen-reaktio. Solut asetettiin kiinnitysaineeseen tumavärjäystä ja analyysiä varten käyttämällä Schiffin reagenssia. Bukkaali- ja iennäytteissä olevat mikrotumat analysoitiin tarkkailemalla niitä öljyimmersioina 1000-kertaisella suurennuksella. Tuhat solua tarkastettiin ja läsnä olevien mikrotumien määrä arvioitiin. Tuman morfologisten muutosten esiintyminen, kuten kahden ytimen läsnäolo solussa, ytimet, jotka näyttivät peittyneeltä Feulgen-negatiivisella nauhalla, kutistuneet ytimet, kondensoitunut kromatiini, ytimen hajoaminen, johon liittyy ytimen eheyden menetys, ja ytimen hajoaminen. Solujen laskemiseen käytettiin siksak-strategiaa.

Histopatologinen vaurio (sekundaarinen tulos) arvioitiin keskittymällä tulehdussolujen ja verisuonten tiheyteen. Vauriot arvioitiin käyttämällä modifioitua semikvantitatiivista histopatologista arviointimenetelmää käyttämällä asteikolla 0-3 (0: ei mitään, 1: lievä, 2: kohtalainen ja 3: voimakas). Kudosnäytteet kiinnitettiin parafiinivahaan, leikattiin sarjoittain 4 um:n paksuudella, värjättiin hematoksyliinieosiinilla ja tutkittiin 400-kertaisella suurennuksella. Kaikki sively- ja kudosnäytteet analysoitiin samanaikaisesti ja samassa laboratoriossa samalla soketulla tutkijalla.

Harha Kunkin osallistujan systeemisen terveydentilan, hammashistorian ja tupakointitottumusten arviointi perustui itse ilmoittamiin tietoihin virallisista potilaskertomuksista riippumatta. Yksi tutkija keräsi tiedot ja näytteet osallistujilta, kun taas toinen tutkija suoritti laboratoriotutkimukset. Vihan välttämiseksi histologisten tutkimusten aikana valittiin satunnaisesti viisi näytealuetta.

Tutkimuksen koko Otoskoko määritettiin G*Power-versiolla 3.1.9.4, oletetaan alfa-merkittävyystasoksi 0,05, beeta-arvoksi 0,1 ja tehoksi 90 %. Koska opintoryhmiä oli neljä ja osallistujatarpeeksi 20 ryhmää, tutkimukseen osallistui kahdeksankymmentä koehenkilöä.

Tilastolliset menetelmät Kaikissa tilastollisissa analyyseissä käytettiin Number Cruncher Statistical System 2007 -ohjelmistoa. Aineiston arvioinnissa käytettiin kuvaavia tilastoja (keskiarvo, keskihajonta, mediaani). Yksisuuntaista varianssianalyysiä käytettiin kolmen tai useamman normaalijakautuneen parametrin keskiarvojen vertailuun. Bonferroni-testiä käytettiin määrittämään merkittäviä eroja ryhmien välisissä parivertailuissa. Kvalitatiivisten tietojen vertaamiseen käytettiin Pearsonin khin neliötestiä. Merkitys arvioitiin tasoilla p < 0,01 ja p < 0,05.