Effekter av rökning på orala vävnadsprover

Studiens design och miljö Detta var en encenter, forskarblind, tvärsnittsstudie. Arbetet utfördes vid avdelningen för parodontologi i Istanbul, Turkiet, mellan november 2018 och juli 2019. Studieförfarandet genomfördes enligt riktlinjerna i Helsingforsdeklarationen och godkändes av universitetets etiska kommitté (Protokollkod: 10840098-604.01.01-E.47596&10840098-604.01.01-E.4759; godkännandedatum: 30 oktober 2018). Data från sex icke-rökare deltagare med friskt parodontium från våra tidigare studier användes också i denna studie. Efter att studien förklarats muntligt för berättigade försökspersoner, undertecknade de som var villiga att delta ett skriftligt, informerat samtyckesformulär. Personlig, identifierbar information om försökspersonerna hölls konfidentiell. Studien granskades efter riktlinjerna för att stärka rapporteringen av observationsstudier i epidemiologi.

Deltagare Åttio systemiskt friska försökspersoner, både män och kvinnor, inkluderades i studien. Deltagarna rekryterades från patienter som kom till vår avdelning för parodontala undersökningar mellan november 2018 och juli 2019. Diagnoser av kliniskt friskt parodontium och generaliserad parodontit stadier III-IV/grad B-C utfördes enligt 2017 års World Workshop on the Classification of Periodontal and Peri-implant Diseases and Conditions. Försökspersonerna delades in i fyra grupper: rökare med generaliserad parodontit (SGP; n = 20), icke-rökare med generaliserad parodontit (NGP; n = 20), rökare med kliniskt frisk parodontium (SHP; n = 20) och icke-rökare med kliniskt friskt parodontium (NHP; n = 20). Följande kriterier behövde uppfyllas för att betraktas som en parodontitpatient: förekomst av generaliserad parodontit, närvaro av minst 20 tänder, närvaro av en molar med indikation på gingivektomi, kronförlängning eller extraktion med ett sonderingsdjup ≥ 5 mm, klinisk fästförlust ≥ 5 mm, och förekomsten av minst tio tänder med ett sonderingsdjup ≥ 5 mm. Följande kriterier indikerade ett kliniskt friskt parodontium: ett friskt och intakt parodontium, inget sonderingsdjup och blödning vid sondering.

Klinisk procedur Alla försökspersoner besvarade ett frågeformulär som bedömde ålder, kön och utbildningsnivå. En klinisk utvärdering av periodontal sjukdom genomfördes enligt internationella standarder. CPP:erna, inklusive plackindex, sonderingsdjup, blödning vid sondering och klinisk förlust av fäste, registrerades från sex ställen per tand från varje individ med användning av en periodontal sond av samma forskare. Provtagningen och histopatologiska utvärderingsprocedurer utfördes som i vår tidigare rapport. I korthet samlades utstryksprover från den fästa tandköttsslemhinnan i det övre premolar-molarområdet och munslemhinnan på den matchande kinden med användning av två separata sterila cytoborstar. Prover fixerades på objektglas. Biopsiprover togs från det vestibulära området av de maxillära molarerna under tandextraktion eller kronförlängning med hjälp av ett kirurgiskt blad och fixerades i 10 % formalin fram till analys. Under mikroskopisk inspektion sköljde varje försöksperson sin mun innan prover togs för att minska risken för artefakter genom kromatinrester.

Laboratorieförfarande För att utvärdera de exfolierade orala epitelcellerna innehållande mikrokärnor (det primära resultatet), utfördes Feulgen-reaktionen på alla utstryksprover. Celler placerades i ett fixativ för nukleär färgning och analys med användning av Schiffs reagens. Mikrokärnor i de buckala och gingivala utstryksproverna analyserades genom att observera dem i oljedoppning vid 1000x förstoring. Ett tusen celler kontrollerades och antalet närvarande mikrokärnor bedömdes. Förekomsten av nukleära morfologiska förändringar, såsom närvaron av två kärnor i en cell, kärnor som visade sig vara sammanbundna med ett Feulgen-negativt band, krympta kärnor, kondenserat kromatin, kärnsönderfall som involverade förlust av nukleär integritet och kärnupplösning uppskattades. En sicksackstrategi användes för att beräkna cellerna.

Histopatologisk skada (det sekundära resultatet) utvärderades genom att fokusera på inflammatoriska cell- och vaskulära tätheter. Skadan bedömdes med en modifierad semikvantitativ histopatologisk bedömningsmetod med en skala från 0 till 3 (0: ingen, 1: mild, 2: måttlig och 3: intensiv). Vävnadsprover fixerades i paraffinvax, sektionerades i serie med en tjocklek av 4 µm, färgades med hematoxylin-eosin och undersöktes vid 400x förstoring. Alla utstryks- och vävnadsprover analyserades samtidigt och i samma laboratorium av samma blindade utredare.

Bias Utvärderingen av varje deltagares systemiska hälsostatus, tandhistoria och rökvanor baserades på självrapporterad information oavsett officiella medicinska journaler. En forskare samlade in data och prover från deltagarna medan en annan forskare genomförde laboratorieundersökningarna. För att undvika partiskhet valdes fem provområden slumpmässigt ut under de histologiska undersökningarna.

Studiestorlek Provstorleken bestämdes med G*Power version 3.1.9.4, antar en alfasignifikansnivå på 0,05, ett betavärde på 0,1 och 90 % effekt. Eftersom det fanns fyra studiegrupper och ett behov av 20 deltagare per grupp ingick åttio försökspersoner i studien.

Statistiska metoder Programvaran Number Cruncher Statistical System 2007 användes för alla statistiska analyser. Beskrivande statistik (medelvärde, standardavvikelse, median) användes för att utvärdera data. Envägsvariansanalysen användes för att jämföra medelvärdet av tre eller flera normalfördelade parametrar. Bonferroni-testet användes för att bestämma de signifikanta skillnaderna i parvisa jämförelser mellan grupperna. Pearson chi-kvadrattest användes för att jämföra kvalitativa data. Signifikans utvärderades vid nivåerna p<0,01 och p<0,05.