細針生検 (FNB) と外科的サンプルに基づく分子分類の一致

背景情報 甲状腺がんは罹患率で 8 番目に一般的ながんであり、発生率は 1992 年以来毎年 6% 以上増加しています。 甲状腺乳頭がん（PTC）は甲状腺がんのほとんどを占めており、甲状腺がんの発生率の増加はほぼ完全に小さなPTCの検出増加に起因している可能性があります(1)。 PTC は通常、治癒率が高く予後が良好です。 しかし、PTC の約 10 ～ 15% はより攻撃的な行動を示し、放射性ヨウ素などの従来の補助療法に抵抗性であることがよくあります (2,3)。 PTC 症例数の増加 (および医療費の潜在的な負担) を考慮すると、正確な予測がますます重要になっています。 予後と再発のリスクを正確に推定できれば、予後が良好な患者に対する不必要に大規模な手術、検査、追跡調査が回避され、より大規模な手術、補助療法、長期の追跡調査が必要な患者に向けられるようになります。

米国甲状腺協会 (ATA) のリスク層別化システム 治療の決定は、臨床的および病理学的要因に基づいて疾患再発のリスクを推定する米国甲状腺協会 (ATA) のリスク層別化システムによって情報提供されます。 このシステムは多くの研究によって遡及的に検証されていますが、説明される分散の割合は最適とは言えず、19% ～ 34% の範囲にあります (4, 5)。 ATA システムが再発を完全に予測できないのは、このシステムが腫瘍の分子プロファイルに関連するリスクを適切に統合できないことに関連している可能性があります。 現在 ATA リスク階層化システムに組み込まれている分子マーカーは BRAFV600E の 1 つだけです。 ATA リスク層別化システムのもう 1 つの制限は、リスクの推定に必要なすべての臨床データと病理学的データが利用可能な手術後の場合にのみ完全に実装できることです。 その時点で、重要な治療法はすでに決定されており、手術の影響はすでに患者によって認識されています。

治療前のリスク推定: 現在の標準治療 2015 年、ATA は、甲状腺葉切除術などのより保守的な手術を受ける患者を選択するために使用できる基準について報告しました。 2015 ATA ガイドラインによると、以下の術前基準を持つ患者は低リスクとみなされます: 腫瘍サイズ 1 ～ 4 cm、臨床的にリンパ節陰性、甲状腺外への転移なし、甲状腺がんの家族歴なし、首への放射線治療歴なし ( 6)。 これらの患者は、最初に甲状腺葉切除術（甲状腺全摘術ではなく）で治療される可能性があります。 しかし、術後のリスク層別化（手術後に入手可能なすべての臨床情報および病理学的情報を使用）により、当初の推定よりもリスクが高いと分類されたため、40～60％は甲状腺全摘術が必要となります（7～11）。 最近の研究では、手術中または最終的な病理が判明した後に追加の危険因子が認識されたため、患者の51%が甲状腺全摘術への転換を必要としました(12)。 これは、臨床的な術前リスク推定の限界と、改良された術前リスク推定方法の必要性を示しています。 したがって、甲状腺がんの外科医と患者は、完全な甲状腺切除術の必要性を最小限に抑えながら、適切な患者に葉切除術を実施する決定を精緻化する追加情報から恩恵を受けることになる。

Thyroid GuidePx®: 新しい分子リスク層別システム 予後を確実に判定するための ATA リスク層別システムの欠点は、Thyroid GuidePx® 遺伝子シグネチャを含む新しい分子リスク層別システムを使用して解決されました。 コンピューター ソフトウェア アルゴリズムを使用して、再発に関連する転写物 (mRNA) と再発の非存在に関連する転写物が、PTC 患者 335 人のトレーニング セットで特定され、その後 167 人の検証セットで検証されました。 データセットに含まれる腫瘍は新鮮に凍結されたものです。

予後遺伝子の発現パターンに基づいて 3 つの分子サブタイプが同定されました。 これらは、タイプ 1、タイプ 2、およびタイプ 3 と呼ばれます。タイプ 3 の PTC は、最も悪性度の高い生物学的性質と最も高い再発率を持っていました。 その後、韓国の 124 人の PTC 患者とエドモントンの 167 人の患者でも検証されました。

分子サブタイプは腫瘍の段階に関連して検討されました。 具体的には、リンパ節疾患のない1～4cmの腫瘍（甲状腺葉切除術の潜在的候補となる患者を含む）を、より進行した疾患を持つ患者とは別に分析した。 興味深いことに、タイプ 3 PTC は腫瘍の病期に関係なく高い再発率を示しました。 タイプ 1 およびタイプ 2 の PTC を持つ肺葉切除術候補者の再発率は 3% 未満でした (図 1A、B、Protocol_Calgary_ July 11, 2023.docx を参照してください) 添付）。

テストのパフォーマンス PTC の分子サブタイプを特定する NGS ベースのテストは、Thyroid GuidePx® と呼ばれました。 Thyroid GuidePx® を使用した PTC の分子的および臨床的サブ分類を組み合わせて、ATA リスク階層化システムと比較しました。 ATA リスク階層化グループは、各症例について 2 人の臨床医によって決定されました。 時間依存の受信者動作特性曲線下面積 (AUROC) を計算するために、低リスク対中/高リスクの 2 項分類が適用されました。 AUROCは、TCGA発見コホートとエドモントンコホートからの再発結果に基づいて計算されました。 最高のリスク層別化パフォーマンスは、臨床的特徴 (腫瘍サイズやリンパ節転移など) と組み合わせた Thyroid GuidePx® 検査によって達成されました。 腫瘍サイズとリンパ節の状態を考慮すると、smoothROCtime パッケージを使用した場合の 5 年間の AUROC は、Thyroid GuidePx® では 0.80、ATA リスク階層化システムでは 0.51 でした (図 2、Protocol_Calgary_ July 11, 2023.docx を参照) 添付）。

Thyroid GuidePx®: アッセイの説明 Thyroid GuidePx® 検査は、ターゲットを絞ったハイブリッド キャプチャ エンリッチメント RNA シーケンス (RNA-Seq) に基づくアッセイです。 テスト入力は、ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 組織または細針生検 (FNB) 甲状腺乳頭癌標本から単離された RNA です。 ライブラリーの調製には、Thyroid GuidePx® パネル内の各遺伝子の標的領域を特異的に増幅することが含まれます。 パネルは 82 個の遺伝子で構成されます。 得られたサンプル ライブラリは、シーケンス用のすべての試薬を含む MiSeq/MiSeqDx 試薬カートリッジに移されます。 MiSeq/MiSeqDx シーケンサーのコンポーネントであるリアルタイム分析 (RTA) ソフトウェアは、シーケンス実行中にベースコールと関連する品質スコアを提供します。 シーケンスおよび品質情報を含む FASTQ ファイルが生成されます。 FASTQ ファイルは、各アンプリコンのヌクレオチド配列とそれに対応する品質スコアを保存するために広く使用されているテキストベースのファイル形式です。 FASTQ ファイルは、配列アラインメント アルゴリズムの入力として機能します。 アライメントされた読み取りは BAM 形式でファイルに書き込まれ、その後読み取りカウントと式の値に変換されます。 次に、遺伝子発現レベルがアルゴリズムに送信され、リスク カテゴリが分類されます。

このソフトウェアは、82 遺伝子の Thyroid GuidePx® パネル内の遺伝子グループの発現パターンに基づいてリスクを分類します。 遺伝子発現のパターンと5年無再発生存期間を関連付ける502人の患者サンプルを用いた研究に基づいて、3つの分子クラスが定義されています。 BRAFV600E 変異が豊富な高リスクグループ。そして、2 つの低リスク分子サブグループが特定されました。

臨床的有用性

Thyroid GuidePx® によって提供されるより正確な予後は、臨床医の治療決定に影響を与える可能性があります。 以下は、臨床医が Thyroid GuidePx® から得られた新しい情報をどのように適用できるかの例です。

1. 低リスク PTC は、甲状腺全摘術ではなく、甲状腺の部分切除術 (葉切除術など) または積極的な監視によって治療できる可能性があります。 これには、時間とコストの節約に加えて、2 つの大きな利点があります。 まず、葉切除後の甲状腺ホルモンの生涯にわたる補充の潜在的な必要性が減少します。 第二に、両側反回神経損傷や永続的な副甲状腺機能低下症など、甲状腺全摘術の潜在的に壊滅的な合併症のリスクが事実上ありません。
2. 低リスク PTC を正確に特定できれば、アジュバント放射性ヨウ素 (RAI) の適切性も高まります。 RAI 療法は、唾液腺機能不全、卵巣および精巣機能不全、骨髄抑制などの一時的および長期的な副作用を引き起こす可能性があります。 RAI 療法には二次悪性腫瘍の理論上のリスクもあります。1 つの推定では、100mCi の 131I は治療を受ける患者 10,000 人あたり 56 個の悪性腫瘍を誘発します (15)。 RAI 治療を全生存期間または無病生存期間の改善が得られる患者に限定することも費用対効果が高くなります。
3. PTC の監視は、2 つの理由から患者と医療機関に負担をかける可能性があります。1 つは、PTC と診断されるのは中年が最も多く、患者は診断後も長期間生存することが多いです。 これは、再発の早期発見のための定期的な検査と調査が何年にもわたって続く可能性があることを意味します。 追跡調査には通常、年に一度の身体検査、甲状腺刺激ホルモンとサイログロブリンの血清測定、および定期的な首の超音波検査が含まれます。 低リスク患者は追跡検査と調査の間の間隔が長くなり、監視から解放される可能性があります。
4. 再発リスクの高い患者を正確に特定することも重要です。 ATA リスク階層化システムは、再発の予測が不正確であることが知られています。 2015 ATA リスク層別化システムを使用して「低リスク」と分類された患者では、患者の 16% が最終的に再発性疾患を発症します (16)。 このリスク分類の結果、これらの患者は十分な治療を受けられない可能性があります。 高リスクのより正確な割り当てが可能な患者では、より積極的な治療（甲状腺全摘術やRAIなど）や臨床試験への登録が考慮される場合があります。

細針生検による甲状腺 GuidePx® これまでの研究は外科標本を使用して行われており、市販のアッセイもこの形式で作成されています。 しかし、医療経済研究所による最近の研究では、手術前に検査を実施することで、Thyroid GuidePx® の費用対効果を高めることができると判明しました。 術前に検査を実施するには、細針生検 (FNB) から採取したサンプルを使用して検査が良好に機能する必要があります。

甲状腺 FNB は、細胞学的評価のために細胞を ThinPrep に移す前に、通常、メタノールベースの緩衝液体保存剤である CytoLyt で最大 7 日間保存されます。 私たちと他の研究者 (17-21) は、CytoLyt の細胞から高品質の DNA と RNA を得ることができることを以前に確認しました。 12 人の PTC 患者を対象とした当社の最近の実現可能性研究では、FNB に対する Thyroid GuidePx® アッセイの実行が実現可能であることが実証されました。 これまでのところ、技術的な成功率は100％で、手術サンプルとの遺伝子レベルの一致率は0.9を超えています。 ただし、分子疾患の特徴付けに限られた FNB に依存するということは、サンプルが腫瘍全体を代表するものであることを意味します。 原発腫瘍と転移では、ゲノムおよびトランスクリプトームの不均一性が報告されています (23)。 したがって、FNB​​ によって取得されたサンプルと手術サンプルの間の一致を文書化することが重要になります。

試験の目的と目的 この研究の一般的な目的は、細針生検からのより限られたサンプルが、Thyroid GuidePx® 検査を使用して有効な分子分類を決定するために、より大きな腫瘍を十分に代表しているかどうかを判断することです。

主な目的 1. FNA から取得した Thyroid GuidePx® 分子分類と一致する手術サンプルの間の一致を判断します。

二次的な目的

1. FNA と手術サンプルを使用して、有効な Thyroid GuidePx® を完成させる際の技術的成功率を比較します。
2. ATA リスク階層化システムを使用した再発転帰と、手術サンプルを使用して Thyroid GuidePx® によって分類された患者を比較する。
3. ATA リスク階層化システムを使用した再発転帰と、FNA サンプルを使用して Thyroid GuidePx® によって分類された患者を比較します。

トライアルデザイン トライアルの回路図 (Protocol_Calgary_ July 11, 2023.docx を参照してください) 添付）

サンプルの取得と分析 術前組織診断が PTC (Bethesda VI) であるか、PTC の疑いがある (Bethesda V) と診断され、包含基準および除外基準に記載されているとおり、甲状腺の部分切除または全摘の資格がある患者は参加するよう招待されます。 。 同意後、患者は外科医の計画に従って手術を受けます。 人口統計学的、臨床的、病理学的データがすべての参加者から取得されます。

手術中に甲状腺と腫瘍が露出した場合、外科医は直視下で優勢な腫瘍（つまり、術前に特定された病変）の FNB を実行します。 これは、術前のFNBの生体内状態を最も厳密にシミュレートしながら、経皮生検の潜在的な技術的失敗（例：病変の不適切な標的化）を制限します。 FNB 由来の細胞物質はすぐに輸送培地 (CytoLyt) に入れられ、冷蔵されます。 サンプルは、RNA 分離と RNASeq のために中央検査室に毎週送られます。 同時に、FNB サンプルは、訓練を受けた細胞病理学者によって腫瘍細胞の存在について検査されます。

複数の結節が存在する場合、外科医は病理医に代わって FNB 結節にマークを付けます。 協力する病理学者の指示の下、腫瘍の一部が切除されて急速冷凍され、隣接する一部がホルマリン固定およびパラフィン包埋（FFPE）のために採取されます。 FFPE サンプルから 1 枚の H&E スライドを H&E 染色し、3 ～ 6 枚の未染色切片を調製し、顕微解剖、RNA 単離および RNASeq のために中央検査室に送ります。 このプロセスは日常的な検体処理プロトコルに従い、標準的な病理学的診断方法を妨げません。

患者がバイオバンキングのためのオプションのインフォームドコンセントフォームに署名している場合、凍結サンプルが十分に残っている場合、サンプルは再検査（必要な場合）の目的、または全トランスクリプトーム分析や突然変異分析などの追加研究をサポートする目的で保存されます。 これらの目的でこれらのサンプルを使用するには、追加の倫理承認が必要になります。

12人の患者を対象とした実現可能性研究はすでに完了している。 サンプルの取得とアッセイの実行における技術的成功率は 100% で、FNB の RNA の量と質は優れており、FNB と手術サンプルで実行されたアッセイでは遺伝子レベルの優れた一致がありました。

Thyroid GuidePx® の RNASeq は、カルガリー大学カミング医科大学にある高精度腫瘍学の専門知識を備えた臨床研究所である OncoHelix で実施されます。 OncoHelix で適時に検査を実施できない場合、サンプルは現在商業的に検査を行っているフロリダ州オーランドの CAP/CLIA 認定ラボである Protean BioDiagnostics で検査されます。 リスク クラスは、RNASeq によって生成されたデータを使用して、Qualisure Diagnostics によって設計されたソフトウェアによって割り当てられます。

エンドポイント

プライマリエンドポイント:

1. 甲状腺乳頭がん FNB と対応する凍結手術サンプルの一致、分子リスク分類

二次エンドポイント:

1. FNB を使用して有効な Thyroid GuidePx® を完成させる技術的成功率
2. FFPE 手術サンプルで有効な Thyroid GuidePx® を完成させる技術的成功率。
3. 5年後の生化学的再発率（甲状腺全摘術のみを受けた患者の場合、サイログロブリン≧1ng/mL）
4. 5年後の構造的再発率

5. 予後検査としての検査性能、Thyroid GuidePx®: FNB および手術サンプル

   1. 特異度: 検査によって予測された構造的再発のない患者の割合
   2. 感度: 5 年以内に病気が再発する個人を特定する検査の能力 (予測される構造的再発の割合)
   3. オーロック
   4. 陽性的中率
   5. 陰性的中率

6. パフォーマンス、ATA リスク階層化

   1. 特異度: 検査によって予測された構造的再発のない患者の割合
   2. 感度: 5 年以内に病気が再発する個人を特定する検査の能力 (予測される構造的再発の割合)
   3. オーロック
   4. 陽性的中率
   5. 陰性的中率

ブラインド化とバイアスの制限 十分な RNA 品質 (DV200>30) を持つサンプルのみが分析に含まれます。 腫瘍細胞 (「細胞診陽性」) を含む FNB のみが一致計算に含まれます。 RNASeq は、臨床的な詳細を知らない技術者によって実行されます。 特に、技術者は手術標本と FNB から一致するサンプルを特定することができません。 分子分類は盲検法で実行されます。 データは独立したデータ監視委員会によって監視されます。 データ監視委員会は統計学者を含む少なくとも3人で構成され、データ分析を監視する。

停止ルール 我々の手術サンプルでは、​​バッチ間およびバッチ内のリピートの遺伝子レベルの一致は一貫して > 0.9 でした。 細胞診陽性 FNB と凍結手術サンプル (「ゴールドスタンダード」) の間の遺伝子レベルの一致が、24 人の患者の各バッチについて監視されます。 R<0.9 の場合は、分析ワークフローと機器を再評価するために一時停止します。 72 人の患者を対象とした後も一致率が引き続き 0.9 を下回る場合、FNB の評価は中止しますが、手術サンプルの検査は継続します。 これは高リスクの研究ではないため、試験を途中で終了するつもりはありません。 FNB と手術サンプル間の一致性が低い場合でも、(手術サンプルにおける) 分子分類に関連する研究結果から得られたデータは有用です。

被験者の選択と取り消し 選択基準

1. 年齢 18 歳以上
2. Bethesda V または VI 細胞診として解釈される細針生検 (FNB) に基づく甲状腺乳頭がんの診断
3. 腫瘍サイズ > 最大直径 1 cm
4. 患者は手術候補者です
5. 患者様の同意がある場合

除外基準

1. 甲状腺がんの家族歴
2. 首への放射線照射歴
3. 細針生検を受けることができない、または受けたくない
4. 甲状腺摘出手術を受けることを望まない
5. 最終的な病理検査では甲状腺乳頭がんは証明されない
6. 明らかな優勢結節がない場合
7. 定義された結節のサンプリングを妨げる複数の結節がある場合

被験者の辞退基準 被験者は、研究者または研究スタッフの一人に通知することにより、いつでも参加を中止することができます。 撤退前に取得されたデータは分析に使用されますが、撤退後に追加のデータは収集されません。 被験者の要望に応じて、検査前にサンプルを採取することができます。 サンプルが RNASeq (Thyroid GuidePx®) によって検査されていない場合、被験者は置き換えられます。

被験者の治療 Thyroid GuidePx® によって決定された分子分類と再発リスクは、医師と患者に開示されます。 再発リスクは、アルバータ州とオーストラリアの症例を含む累積的な検証データに基づいています。 凍結手術サンプル（「ゴールドスタンダード」）の結果のみが開示されます。 通常の標準と同様に、治療の決定は、入手可能なすべての臨床情報の総合に基づいて、患者と協力して医師によって行われます。 この臨床試験は治療経路を定義するものではありません。 フォローアップの頻度と期間はプロトコルによって規定されるものではなく、担当医師によって決定されます。 これは非介入研究であるため、コンプライアンスは監視されません。

有効性の評価 副次的結果は、再発リスクを層別化するための検査成績です。 検査のパフォーマンスは、FNB によって採取されたサンプルと外科的サンプルで比較され、その後、現在の標準治療 (ATA リスク階層化システム) と比較されます。 再発までの時間は、最初の治療が完了した時点から測定されます。 手術後に微視的な疾患が残っている患者では、治療用量の放射性ヨウ素の投与が完了してから再発までの時間が測定されます。 再発事象は、2016 年の米国甲状腺協会ガイドラインに基づいて定義されます。

以下の基準は、治療後の無病状態を示します: (i) 腫瘍の臨床的証拠がない。 (ii) 放射性ヨウ素画像処理および/または子宮頸部超音波検査では腫瘍の証拠がない。 (iii) 甲状腺全摘術後の場合、未刺激の血清サイログロブリン (Tg) <0.2 ng/ml。葉切除後の場合、未刺激の Tg<30。 治療に対する不確定な反応は次のように定義されます: (i) 腫瘍の臨床的証拠がない。 (ii) 放射性ヨウ素画像処理および/または子宮頸部超音波検査では腫瘍の証拠がない。 (iii) 甲状腺全摘術後の場合、無刺激 Tg 0.2 ～ 1。葉切除後の場合、Tg > 30。 甲状腺全摘術後の生化学的不完全反応は、構造的疾患がない場合に Tg > 1 と定義されます。 Tg 値は、干渉抗体 (TgAb) が存在しない場合にのみ信頼できます (6)。

患者が以前にＴｇＡｂの非存在下で検出不能なＴｇを有し、前回の手術後１年以内に頸部超音波検査が陰性であった場合、疾患は真の再発として定義される。 持続性疾患は、上記の閾値を超えるTg、異常な頸部超音波、TgAbレベルの持続的な増加、または遠隔転移の存在として定義されます。

持続性疾患および/または転移性疾患（非治癒切除）を有する患者は、無再発生存期間の計算には含まれません。

安全性の評価 標準的な臨床ケアからの唯一の相違点は、FNB による術中のサンプル調達です。 ただし、計画された外科手術と比較すると、このリスクは小さいです。 主なリスクは臨床的に重大な出血の小さなリスクであり、1% 未満と推定されます。 この研究に関連する介入は行われないため、有害事象を監視する計画はありません。

統計 CytoLyt 内のサンプルの RNASeq 条件の最適化 SOP に従って、CytoLyt 内の FNB から RNA が単離されます。 RNA の量は NanoDrop によって評価され、品質は DV200 によって定量化されます。 RNASeq は、CytoLyt サンプルと、さまざまな読み取り深度で対応する凍結サンプルで実行されます。 CytoLyt 組織と FFPE 組織のペアでは、アッセイ指標は入力組織の保存方法、RNA の品質 (DV200)、および保存時間の関数として評価されます。 遺伝子発現は、CytoLyt 組織と凍結組織のペアで比較され、条件間で相関付けられます。 最も重要な結果である分子クラスの割り当ては、ペアのサンプルで比較されます。

以下のパフォーマンス指標は、次世代シーケンシングに特有の要件の米国病理学者協会 (CAP) チェックリストに基づいて、各実験で評価されます。

アッセイ測定基準

a) RNASeq メトリクス: (i) リード数 (総リード数、一意のリード数、重複リード数、rRNA リード数、鎖特異性)。 (ii) カバレッジ (特定のゲノム位置をカバーするリード数): 平均カバレッジ、平均変動係数、5'/3' カバレッジ、カバレッジのギャップ、GC バイアス (iii) 発現相関関係 (測定された発現レベルと既知のレベルb) 個々の遺伝子の検出: (i) 分析感度: ERCC 内部標準の各遺伝子が正しく同定されたケースの割合。

(ii) 分析特異性: ERCC 内部標準を構成する遺伝子が存在しないことを識別する能力 (iii) 精度: 感度 + 特異性

FNB 標本と外科標本で決定された分子リスク層別化 (甲状腺 GuidePx®) の比較 甲状腺乳頭がんを示さない最終病理の患者は、一致解析から除外されます。 同様に、細胞学陰性の FNB サンプルは一致分析から除外されます。 分子クラスの割り当ては、FNB によって取得されたサンプルと、対応する凍結外科標本の間で比較されます。 外科的サンプルはゴールドスタンダードとみなされます。 カッパ統計は、2 つのサンプル タイプ間の一致の重要性を判断するために使用されます。

リスク階層は、Thyroid GuidePx® と ATA リスク階層化システムを使用して、盲検法で割り当てられます。 5年後の構造的および生化学的再発率がリスククラスごとに比較されます。 疾患状態 (構造的再発) を条件としたバイナリ テスト結果が、テストの精度を評価するために使用されます。 構造的反復はゴールドスタンダードを表します。 2 つの依存比率の両側マクネマー検定を使用して、リスク階層化の各方法の感度と特異度を評価し、各精度尺度を個別に評価するための多重度のホルム調整を使用します。

Thyroid GuidePx® のパフォーマンス

上記の研究から、Thyroid GuidePx® のパフォーマンスは、FNB サンプルと手術サンプルで個別に評価されます。 パフォーマンス特性は次のように評価されます。

1. 時間依存の AUROC (受信者オペレータ曲線の下の面積) (24)。 計算の目的上、検査陽性の閾値レベルは中リスクまたは高リスクの指定となります（中リスクの割り当てでは大幅に異なる臨床判断が生じることが予想されるため）。
2. 感度: Kamarudin および Kolamunnage-Dona によって記述されているように、5 年間の累積感度として計算されます (24)
3. 特異性: Kamarudin および Kolamunnage-Dona によって説明されているように、動的特異性として計算されます (24)

サンプルサイズの計算 外科標本と 109 人の患者の対応する FNB からの分子リスク割り当てを比較します。 臨床的に許容される一致の最低レベルは 80% です。 サンプル サイズの計算は、3 つの分子サブグループの 2 つの測定値間の一致を示すリン カッパ統計に基づいて行われました (25)。 両側仮説を有意水準 0.05 で適用し、検出力を 90% に固定しました。 分子サブグループのサイズは、23% (タイプ 1)、49% (タイプ 2)、および 28% (タイプ 3) に固定されました。 帰無仮説が FNB と手術サンプル間の一致レベルが 0.6 である場合、109 人の患者で 0.8 以上の一致レベルを検出できることになります。 同じゼロレベルの一致を仮定すると、40 人の患者で 0.90 の一致が検出可能になります。

ベセスダ V 細胞診の患者の約 25%、およびベセスダ VI 細胞診の患者の約 5% が良性疾患を患っています。 さらに、約 5% のケースでは、FFPE サンプルでは RNASeq の品質が不十分です。 これに基づき、中退率は20％を計画しております。 したがって、この試験には 130 人の患者が参加するように設計されています。

ソースデータ/文書への直接アクセス 臨床試験サイトでは、治験関連のモニタリング、監査、REB レビュー、および規制検査が許可され、ソースデータ/文書への直接アクセスが提供されます。

臨床試験監査は、患者の権利、安全性、福祉が適切に保護されていることを保証し、治験実施計画書、プロセスおよび合意、ICH Good Clinical Practice 基準および適用される規制要件への準拠を評価し、データの品質を評価するために実行されます。

国内の規制当局はいつでも研究施設を監査または検査するために来ることができます。 この監査は、主任研究者および研究チームとのインタビュー、文書および実践のレビュー、施設、機器およびソースデータの検証のレビューで構成されます。

研究者は、国内の規制当局に対して、臨床研究に関する紙文書および/または電子文書への直接アクセスを許可します（例: CRF、病院の患者カルテや治験責任医師の研究ファイルなどの情報源文書）。 研究の実施に関連するすべての施設施設は、監査中に訪問される可能性があります（例: 検査室、外来部門）。 調査員は、監査活動に関して合理的な時間と場所で協力し、支援を提供することに同意します。

品質管理と品質保証 研究代表者は、すべての研究メンバーがプロトコールに従い、規制および適正臨床実施基準を遵守していることを保証します。 すべての臨床試験施設では、治験関連のモニタリング、監査、REB レビュー、および規制検査が許可され、ソース データ/文書への直接アクセスが提供されます。

データ監視委員会 (DMC) は治験実施中に次のように会合します。 1. 治験開始時に DMC 憲章を完成させるため。 2. 24 人の参加者が登録された後。 3. 72 人の参加者が登録された後。 4. 登録完了後。

倫理 責任研究者は、この研究がヘルシンキ宣言に同意して実施されることを保証するものとします。 この研究は、適正臨床実施に関する ICH 三者調和ガイドラインを含むすべての研究について、カナダおよび国際の適正臨床実施基準に従って実施されます。 適用される政府規制、NNHPD 臨床試験ガイドライン、およびアルバータ州保健サービスの研究方針と手順も遵守されます。

このプロトコールおよび修正は、研究を実施するための正式な承認を得るために HREBA-CC に提出されます。 研究の実施に関する HREBA-CC の決定は、研究者に対して書面で行われます。

外科サンプルからの実質的な転帰データがあるため、外科サンプルからの分子リスク分類の開示 (「ゴールドスタンダード」) は正当化されます。 さらに、この試験が開始されると、この検査はLaboratory Developed Test（LDT）として市販される予定です。

データの取り扱いと記録の保管 研究が完了すると、この研究のすべてのデータはプロトコールに従って 15 年間保持され、カルガリー臨床研究センターに保管されます。

資金と保険 この試験は Qualisure Diagnostics, Inc. によって資金提供され、査読済みの助成金によって補われます。 保険はカルガリー大学とアルバータ州保健サービス、およびQualisure Diagnosticsによって提供されます。

出版方針 この臨床研究の結果は、指定された研究者全員を共著者として査読済みの雑誌に掲載されます。 すべての資金源が認められます。

6.0 標準的な慣行を超える、または標準的な慣行に追加する手順、治療、または活動について説明します。

標準的な臨床ケアからの唯一の違いは、FNB による術中のサンプル調達です。 ただし、計画された外科手術と比較すると、このリスクは小さいです。 主なリスクは臨床的に重大な出血の小さなリスクであり、1% 未満と推定されます。 この研究に関連する介入は行われないため、有害事象を監視する計画はありません。

手術中に甲状腺と腫瘍が露出した場合、外科医は直視下で優勢な腫瘍（つまり、術前に特定された病変）の FNB を実行します。 これは、術前のFNBの生体内状態を最も厳密にシミュレートしながら、経皮生検の潜在的な技術的失敗（例：病変の不適切な標的化）を制限します。

協力する病理学者の指示の下、腫瘍の一部が切除されて急速冷凍され、隣接する一部がホルマリン固定とパラフィン包埋のために採取されます。 診断および臨床使用のために十分な組織が採取された場合にのみ、組織は研究のために放出されます。