扁平苔癬患者における寒冷誘導性 RNA 結合タンパク質の血清および組織レベルの評価

この研究の目的は次のとおりです。

• LP患者における血清および組織のCIRPレベルの評価。
• LP患者と健康な対照患者の血清および組織のCIRPレベルを比較する。

• LP の重症度に応じて CIRP レベルを比較します。 横断研究は、40人のLP患者と40人の年齢と性別が一致した健康な対照者に対して実施される。 LP の診断は臨床的に行われ、ダーモスコピーによって確認されます。

  • 研究方法:

    1. CIRP 発現の評価:

       この研究のすべての参加者は、同じセッションで採血と皮膚生検の両方を受け、その後、各サンプルは次のように臨床病理学部門と組織部門で個別に盲目的に処理されます。

• 採血:

3 ml の静脈血サンプルを 2 つの研究グループのそれぞれから、遊離の抗凝固剤チューブに入れて採取し、血液を凝固させます。 凝固するまでチューブを室温で 30 分間放置した後、サンプルを遠心分離し (3000 rpm で 15 分間)、得られた血清を試験まで -80℃ で保存します (22)。 血清 CIRP レベルは、酵素結合免疫吸着検定法分析 (ELISA) キットを使用して測定されます。

• 皮膚生検: 各患者および対照から 3 mm パンチで皮膚生検を 1 つ採取します。 これらの生検は、LP 病変および対照と一致する同じ領域から局所麻酔下で採取されます。 すべての生検はソハグ医学部の組織学部に提出されます。 それらを 10% 中性緩衝ホルマリンで固定し、グレードの高いエタノールで脱水した後、キシレンに浸漬し、その後パラフィンに含浸させます。 各ブロックから 5 ミクロン (5um) の厚さの切片がいくつか採取されます。 1 枚のスライドは、ルーチンの組織病理学的検査のためにヘマトキシリンおよびエオシン (H&E) で染色されます。 他の切片は、免疫組織化学的に染色するために、正に帯電したスライドにマウントされ、室温で保存されます。

1. H&E 染色切片の組織病理学的評価:

   H&E で染色された切片は、LP の診断を確認し、表皮と真皮の変化を評価するために光学顕微鏡で評価されます。

2. 免疫組織化学 (IHC) 染色手順 免疫染色に使用される方法は、ストレプトアビジン-ビオチン増幅系となります。 パラフィン包埋組織切片はキシレン中で脱パラフィンされ、段階的な一連のエタノール中で再水和され、3% 過酸化水素とともにインキュベートされます。 スライドをリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) でリンスし、クエン酸緩衝液 (Ph 6) で 20 分間熱誘導エピトープ回復にさらします。 冷却後、スライドをマウスモノクローナル抗CIRP抗体(0.1mlに濃縮し、PBSで1:75に希釈したもの)とともに室温で一晩インキュベートする。 免疫反応性の検出は、ユニバーサル標識ストレプトアビジン-ビオチン システム、ホースラディッシュ ペルオキシダーゼを使用して実行されます。 最後に、反応は適切な基質/色原体 (ジアミノベンジジン) 試薬によって視覚化されます。 染色手順には、一次抗体をリン酸緩衝生理食塩水に置き換えることによって得られるネガティブコントロールが含まれます (16)。
3. CIRP 免疫染色の解釈:

CIRP 免疫染色は、LP 病変と対照症例で個別に盲目的に評価されます。 表皮細胞と真皮細胞は、1 つ以上の染色細胞の細胞質または核のいずれかで DAB 反応によって検出される茶色がかった色の存在によって陽性に割り当てられます (25)。