Bedömning av serum- och vävnadsnivåer av köldinducerbart RNA-bindande protein hos patienter med Lichen Planus

Målen med denna studie är:

• Bedömning av serum- och vävnadsnivåer av CIRP hos patienter med LP.
• Att jämföra serum- och vävnadsnivåer av CIRP hos patienter med LP och friska kontroller.

• För att jämföra CIRP-nivåer enligt LP-svårighet. En tvärsnittsstudie kommer att genomföras på 40 patienter med LP och 40 ålders- och könsmatchade friska kontroller. Diagnos av LP kommer att vara kliniskt och kommer att bekräftas genom dermoskopi.

  • Metoder för studien:

    1. Utvärdering av CIRP-uttryck:

       Varje deltagare i denna studie kommer att utsättas för både blodprov och hudbiopsi under samma session, sedan kommer varje prov att bearbetas separat och blint vid kliniska patologi- och histologiska avdelningar enligt följande:

• Blodprovstagning:

Tre ml venöst blodprov kommer att tas från var och en av de två studerade grupperna i ett fritt antikoagulantrör, vilket gör att blodet kan koaguleras. Efter 30 minuter efter att ha lämnat röret vid rumstemperatur tills koagulering, sedan kommer prover att centrifugeras (vid 3000 rpm i 15 minuter) och det resulterande serumet kommer att lagras vid -80c tills testning (22). Serum CIRP-nivåer kommer att mätas med hjälp av en enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) kit.

• Hudbiopsier: En hudbiopsi tas med 3 mm stans från varje patient och kontroll. Dessa biopsier kommer att tas under lokalbedövning från LP-lesioner och samma områden matchas i kontrollen. Alla biopsier kommer att lämnas in till histologiska institutionen, Sohag fakulteten för medicin. De fixeras i 10 % neutralt buffrat formalin, dehydreras i stigande etanolkvaliteter följt av nedsänkning i xylen och impregneras sedan i paraffin. Flera 5 mikron (5um) tjocka sektioner från varje block kommer att tas. Ett objektglas kommer att färgas med hematoxylin och eosin (H&E) för rutinmässig histopatologisk undersökning. Andra sektioner kommer att monteras på positivt laddade objektglas och lagras i rumstemperatur för att färgas immunhistokemiskt.

1. Histopatologisk bedömning av H&E-färgade sektioner:

   Sektioner färgade med H&E kommer att utvärderas under ljusmikroskop för att bekräfta diagnosen LP och för att bedöma epidermala och dermala förändringar.

2. Immunohistokemisk (IHC) färgningsmetod Metoden som används för immunfärgning kommer att vara streptavidin-biotinförstärkt system. Paraffininbäddade vävnadssektioner kommer att avparaffineras i xylen, rehydreras i en graderad serie etanol och inkuberas med 3 % väteperoxid. Objektglasen sköljs i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och exponeras sedan för värmeinducerad epitopåtervinning i citratbuffertlösning (Ph 6) i 20 minuter. Efter kylning kommer objektglasen att inkuberas över natten vid rumstemperatur med mus monoklonal anti-CIRP-antikropp (0,1 ml koncentrerad och utspädd med PBS i en utspädning 1:75). Detektion av immunreaktivitet kommer att utföras med användning av det universella märkta Streptavidin-Biotin-systemet, pepparrotsperoxidas. Slutligen kommer reaktionen att visualiseras med ett lämpligt substrat/kromogen (diaminobensidin) reagens. Färgningsproceduren kommer att inkludera de negativa kontrollerna som erhållits genom substitution av primära antikroppar med fosfatbuffrad saltlösning (16).
3. Tolkning av CIRP-immunfärgning:

CIRP-immunfärgning kommer att bedömas separat och blint i LP-skada och kontrollfall. Epidermala och dermala celler kommer att tilldelas positiva genom närvaron av brunaktig färg detekterad genom DAB-reaktion antingen i cytoplasman eller kärnor i ≥ 1 färgade celler (25).