Évaluation des niveaux sériques et tissulaires de protéine de liaison à l'ARN inductible par le froid chez les patients atteints de lichen plan

Les objectifs de cette étude sont :

• Évaluation des taux sériques et tissulaires de CIRP chez les patients atteints de LP.
• Comparer les taux sériques et tissulaires de CIRP chez les patients atteints de LP et les témoins sains.

• Comparer les niveaux de CIRP en fonction de la gravité de la LP. Une étude transversale sera menée sur 40 patients atteints de LP et 40 témoins sains de même âge et sexe. Le diagnostic de LP sera clinique et sera confirmé par dermoscopie.

  • Méthodes de l'étude :

    1. Évaluation de l’expression CIRP :

       Chaque participant à cette étude sera soumis à la fois à un prélèvement sanguin et à une biopsie cutanée au cours de la même séance, puis chaque échantillon sera traité séparément et à l'aveugle dans les services de pathologie clinique et d'histologie comme suit :

• Prélèvement de sang :

Un échantillon de sang veineux de trois ml sera prélevé dans chacun des deux groupes étudiés dans un tube anticoagulant gratuit, permettant la coagulation du sang. Après 30 minutes de maintien du tube à température ambiante jusqu'à coagulation, les échantillons seront ensuite centrifugés (à 3 000 tr/min pendant 15 min) et le sérum résultant sera conservé à -80 °C jusqu'au test (22). Les taux sériques de CIRP seront mesurés à l'aide d'un kit d'analyse immuno-enzymatique (ELISA).

• Biopsies cutanées : une biopsie cutanée sera réalisée avec un punch de 3 mm sur chaque patient et contrôle. Ces biopsies seront réalisées sous anesthésie locale à partir des lésions LP et des mêmes zones appariées en contrôle. Toutes les biopsies seront soumises au département d'histologie de la Faculté de médecine de Sohag. Ils seront fixés dans du formol tamponné neutre à 10%, déshydratés dans des qualités ascendantes d'éthanol suivi d'une immersion dans du xylène puis imprégnés de paraffine. Plusieurs sections de 5 microns (5 um) d'épaisseur de chaque bloc seront prélevées. Une lame sera colorée à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E) pour un examen histopathologique de routine. D'autres coupes seront montées sur des lames chargées positivement et conservées à température ambiante pour être colorées par voie immunohistochimique.

1. Évaluation histopathologique des coupes colorées H&E :

   Les coupes colorées avec H&E seront évaluées au microscope optique pour confirmer le diagnostic de LP et pour évaluer les changements épidermiques et dermiques.

2. Procédure de coloration immunohistochimique (IHC) La méthode utilisée pour l'immunocoloration sera un système amplifié streptavidine-biotine. Les coupes de tissus incluses en paraffine seront déparaffinées dans du xylène, réhydratées dans une série graduée d'éthanol et incubées avec 3 % de peroxyde d'hydrogène. Les lames seront rincées dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), puis exposées à la récupération d'épitopes induite par la chaleur dans une solution tampon citrate (Ph 6) pendant 20 minutes. Après refroidissement, les lames seront incubées toute une nuit à température ambiante avec un anticorps monoclonal de souris anti-CIRP (0,1 ml concentré et dilué par PBS dans une dilution 1:75). La détection de l'immunoréactivité sera réalisée à l'aide du système universel marqué streptavidine-biotine, peroxydase de raifort. Enfin, la réaction sera visualisée par un réactif substrat/chromogène approprié (diaminobenzidine). La procédure de coloration comprendra les contrôles négatifs obtenus par substitution des anticorps primaires par une solution saline tamponnée au phosphate (16).
3. Interprétation de l’immunocoloration CIRP :

L'immunocoloration CIRP sera évaluée séparément et à l'aveugle dans les cas de lésion LP et de contrôle. Les cellules épidermiques et dermiques seront considérées comme positives par la présence d'une coloration brunâtre détectée par réaction DAB soit dans le cytoplasme, soit dans les noyaux de ≥ 1 cellules colorées (25).