扁平苔藓患者血清和组织中冷诱导 RNA 结合蛋白水平的评估

本研究的目的是：

• 评估 LP 患者的血清和组织 CIRP 水平。
• 比较 LP 患者和健康对照者的血清和组织 CIRP 水平。

• 根据 LP 严重程度比较 CIRP 水平。 将对 40 名 LP 患者和 40 名年龄和性别匹配的健康对照者进行横断面研究。 LP 的诊断将通过临床进行，并通过皮肤镜检查进行确认。

  • 研究方法：

    1. CIRP表达的评估：

       本研究的每位参与者将在同一疗程中接受血液采样和皮肤活检，然后每个样本将在临床病理学和组织学部门单独进行盲处理，如下所示：

• 血液采样：

将从两个研究组中的每一组抽取 3 毫升静脉血样本，放入免费的抗凝管中，使血液凝固。 将管置于室温下30分钟直至凝固，然后将样品离心（3000rpm，15分钟），并将所得血清保存在-80℃直至测试（22）。 将使用酶联免疫吸附测定分析 (ELISA) 试剂盒测量血清 CIRP 水平。

• 皮肤活检：每位患者和对照者将用3 毫米打孔器进行一次皮肤活检。 这些活检将在局部麻醉下从 LP 病变和对照中匹配的相同区域进行。 所有活检将提交给索哈格医学院组织学系。 将它们固定在 10% 中性缓冲福尔马林中，在升序乙醇中脱水，然后浸入二甲苯中，然后浸渍在石蜡中。 从每个块中取出几个 5 微米 (5um) 厚的切片。 将用苏木精和伊红 (H&E) 对一张载玻片进行染色，以进行常规组织病理学检查。 其他切片将安装在带正电的载玻片上并保存在室温下以进行免疫组织化学染色。

1. H&E 染色切片的组织病理学评估：

   H&E 染色的切片将在光学显微镜下进行评估，以确认 LP 的诊断并评估表皮和真皮的变化。

2. 免疫组织化学（IHC）染色程序用于免疫染色的方法将是链霉亲和素-生物素扩增系统。 石蜡包埋的组织切片将在二甲苯中脱蜡，在一系列梯度乙醇中再水化，并用 3% 过氧化氢孵育。 载玻片将在磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中冲洗，然后在柠檬酸盐缓冲溶液 (Ph 6) 中进行热诱导表位修复 20 分钟。 冷却后，将载玻片与小鼠单克隆抗 CIRP 抗体（0.1 ml 浓缩并用 PBS 按 1:75 稀释度稀释）在室温下孵育过夜。 将使用通用标记链霉亲和素-生物素系统、辣根过氧化物酶进行免疫反应性检测。 最后，通过适当的底物/色原（二氨基联苯胺）试剂使反应可视化。 染色程序将包括通过用磷酸盐缓冲盐水替代一抗而获得的阴性对照 (16)。
3. CIRP免疫染色解读：

CIRP 免疫染色将在 LP 病变和对照病例中单独、盲法评估。 通过 DAB 反应在 ≥ 1 个染色细胞的细胞质或细胞核中检测到棕色着色，表皮和真皮细胞将被指定为阳性 (25)。