Vurdering av serum- og vevsnivåer av kaldt-induserbart RNA-bindende protein hos pasienter med Lichen Planus

Målene med denne studien er:

• Vurdering av serum- og vevsnivåer av CIRP hos pasienter med LP.
• For å sammenligne serum- og vevsnivåer av CIRP hos pasienter med LP og friske kontroller.

• For å sammenligne CIRP-nivåer i henhold til LP-alvorlighetsgrad. En tverrsnittsstudie vil bli utført på 40 pasienter med LP og 40 alders- og kjønnstilpassede friske kontroller. Diagnose av LP vil være klinisk og vil bli bekreftet ved dermoskopi.

  • Metoder for studien:

    1. Evaluering av CIRP-uttrykk:

       Hver deltaker i denne studien vil bli utsatt for både blodprøvetaking og hudbiopsi i samme sesjon, deretter vil hver prøve bli behandlet separat og blindt ved avdelingene for klinisk patologi og histologi som følger:

• Blodprøvetaking:

Tre ml venøs blodprøve vil bli tatt fra hver av de to studerte gruppene i et fritt antikoagulasjonsrør, slik at blodet kan koaguleres. Etter 30 minutter etter å ha forlatt røret ved romtemperatur til koagulering, vil prøvene sentrifugeres (ved 3000 rpm i 15 minutter) og det resulterende serumet lagres ved -80c frem til testing (22). Serum CIRP-nivåer vil bli målt ved hjelp av et enzym-linked immunosorbent assay analyse (ELISA) kit.

• Hudbiopsier: En hudbiopsi vil bli tatt med 3 mm stans fra hver pasient og kontroll. Disse biopsiene vil bli tatt under lokalbedøvelse fra LP-lesjoner og de samme områdene matchet i kontroll. Alle biopsier vil bli sendt til histologisk avdeling, Sohag Det medisinske fakultet. De vil bli fikset i 10 % nøytral bufret formalin, dehydrert i stigende etanolkvaliteter etterfulgt av nedsenking i xylen og deretter impregnert i parafin. Flere 5 mikron (5um) tykke seksjoner fra hver blokk vil bli tatt. Ett objektglass vil bli farget med hematoksylin og eosin (H&E) for rutinemessig histopatologisk undersøkelse. Andre seksjoner vil bli montert på positivt ladede objektglass og lagret ved romtemperatur for å farges immunhistokjemisk.

1. Histopatologisk vurdering av H&E-fargede seksjoner:

   Snitt farget med H&E vil bli evaluert under lysmikroskop for å bekrefte diagnosen LP og for å vurdere epidermale og dermale forandringer.

2. Immunhistokjemisk (IHC) farging prosedyre Metoden som brukes for immunfarging vil være streptavidin-biotin amplifisert system. Parafininnstøpte vevssnitt vil bli avparafinisert i xylen, rehydrert i en gradert serie med etanol og inkubert med 3 % hydrogenperoksid. Objektglassene skylles i fosfatbufret saltvann (PBS) og deretter eksponeres for varmeindusert epitop-uthenting i sitratbufferløsning (Ph 6) i 20 minutter. Etter avkjøling vil objektglassene bli inkubert over natten ved romtemperatur med musemonoklonalt anti-CIRP-antistoff (0,1 ml konsentrert og fortynnet med PBS i en fortynning 1:75). Påvisning av immunreaktivitet vil bli utført ved bruk av det universelle merket Streptavidin-Biotin-systemet, pepperrotperoksidase. Til slutt vil reaksjonen bli visualisert med et passende substrat/kromogen (diaminobenzidin) reagens. Fargeprosedyren vil inkludere de negative kontrollene oppnådd ved substitusjon av primære antistoffer med fosfatbufret saltvann (16).
3. Tolkning av CIRP-immunfarging:

CIRP-immunfarging vil bli vurdert separat og blindt i LP-lesjons- og kontrolltilfeller. Epidermale og dermale celler vil bli tildelt positive ved tilstedeværelse av brunaktig farge detektert ved DAB-reaksjon enten i cytoplasma eller kjerner i ≥ 1 fargede celler (25).