A hideg által indukálható RNS-kötő fehérje szérum- és szöveti szintjének felmérése Lichen Planusban szenvedő betegeknél

Ennek a tanulmánynak a céljai a következők:

• A CIRP szérum- és szöveti szintjének értékelése LP-ben szenvedő betegeknél.
• A CIRP szérum- és szöveti szintjének összehasonlítása LP-ben szenvedő és egészséges kontrollokban.

• A CIRP-szintek összehasonlítása az LP súlyossága szerint. Egy keresztmetszeti vizsgálatot 40 LP-ben szenvedő betegen és 40 éves korú és nemű egészséges kontrollokon végeznek. Az LP diagnózisa klinikailag történik, és dermoszkópiával igazolják.

  • A vizsgálat módszerei:

    1. A CIRP kifejezés értékelése:

       A vizsgálatban részt vevő minden résztvevőtől ugyanabban az ülésben vérmintát és bőrbiopsziát vesznek, majd minden egyes mintát külön-külön és vakon dolgoznak fel a Klinikai Patológiai és Szövettani Osztályokon az alábbiak szerint:

• Vérvétel:

A két vizsgált csoport mindegyikéből három ml vénás vérmintát vesznek egy szabad antikoaguláns csőben, lehetővé téve a vér alvadását. 30 perccel a csövet szobahőmérsékleten hagyjuk a koagulációig, majd a mintákat centrifugáljuk (3000 rpm-en 15 percig), és a kapott szérumot -80 °C-on tároljuk a tesztelésig (22). A szérum CIRP-szintjét egy enzim-linked immunosorbent assay analysis (ELISA) készlettel mérik.

• Bőrbiopszia: Minden betegtől és kontrolltól egy bőrbiopsziát vesznek 3 mm-es ütéssel. Ezeket a biopsziákat helyi érzéstelenítésben veszik az LP-léziókból, és ugyanazokról a területekről, amelyeket a kontrollban egyeztetnek. Minden biopsziát a Sohag Orvostudományi Kar Szövettani Osztályára kell benyújtani. 10%-os semleges pufferolt formalinban rögzítik, növekvő minőségű etanolban dehidratálják, majd xilolba merítik, majd paraffinnal impregnálják. Minden blokkból több 5 mikron (5 um) vastag metszetet veszünk. Egy tárgylemezt hematoxilinnel és eozinnal (H&E) festenek meg a rutin kórszövettani vizsgálathoz. A többi metszetet pozitív töltésű tárgylemezekre helyezzük, és szobahőmérsékleten tároljuk immunhisztokémiai festés céljából.

1. H&E-festett metszetek kórszövettani értékelése:

   A H&E-vel megfestett metszeteket fénymikroszkóp alatt értékelik az LP diagnózisának megerősítésére, valamint az epidermális és bőrelváltozások felmérésére.

2. Immunhisztokémiai (IHC) festési eljárás Az immunfestés módszere a streptavidin-biotin amplifikált rendszer lesz. A paraffinba ágyazott szövetmetszeteket xilolban paraffinmentesítik, fokozatos etanolban rehidratálják, és 3%-os hidrogén-peroxiddal inkubálják. A tárgylemezeket foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS) öblítik, majd 20 percig hő hatására citrát-pufferoldatban (Ph 6) végzett epitópvisszanyerésnek teszik ki. Lehűlés után a lemezeket egy éjszakán át szobahőmérsékleten inkubáljuk egér monoklonális anti-CIRP antitesttel (0,1 ml töményítjük és 1:75 hígítású PBS-sel hígítjuk). Az immunreaktivitás kimutatása az univerzális jelölésű sztreptavidin-biotin rendszerrel, a torma-peroxidázzal történik. Végül a reakciót egy megfelelő szubsztrát/kromogén (diaminobenzidin) reagenssel teszi láthatóvá. A festési eljárás magában foglalja a primer antitestek foszfáttal pufferolt sóoldattal történő helyettesítésével kapott negatív kontrollokat (16).
3. A CIRP immunfestés értelmezése:

A CIRP immunfestődést külön és vakon értékeljük LP léziós és kontroll esetekben. Az epidermális és dermális sejtek a DAB-reakcióval kimutatott barnás elszíneződés alapján lesznek pozitívak a citoplazmában vagy a sejtmagokban ≥ 1 festett sejtben (25).