Vurdering af serum- og vævsniveauer af kulde-inducerbart RNA-bindende protein hos patienter med Lichen Planus

Formålet med denne undersøgelse er:

• Vurdering af serum- og vævsniveauer af CIRP hos patienter med LP.
• At sammenligne serum- og vævsniveauer af CIRP hos patienter med LP og raske kontroller.

• At sammenligne CIRP-niveauer i henhold til LP-sværhedsgrad. En tværsnitsundersøgelse vil blive udført på 40 patienter med LP og 40 alders- og kønsmatchede raske kontroller. Diagnose af LP vil være klinisk og vil blive bekræftet ved dermoskopi.

  • Metoder til undersøgelsen:

    1. Evaluering af CIRP udtryk:

       Hver deltager i denne undersøgelse vil blive udsat for både blodprøvetagning og hudbiopsi i samme session, hvorefter hver prøve vil blive behandlet separat og blindt på klinisk patologi og histologisk afdeling som følger:

• Blodprøvetagning:

Der vil blive taget tre ml venøs blodprøve fra hver af de to undersøgte grupper i et frit antikoagulantrør, hvilket gør det muligt at koagulere blodet. Efter 30 minutter efter at have forladt røret ved stuetemperatur indtil koagulering, vil prøverne blive centrifugeret (ved 3000 rpm i 15 minutter), og det resulterende serum vil blive opbevaret ved -80c indtil testning (22). Serum CIRP-niveauer vil blive målt ved hjælp af et enzym-linked immunosorbent assay analyse (ELISA) kit.

• Hudbiopsier: Der tages én hudbiopsi med 3 mm punch fra hver patient og kontrol. Disse biopsier vil blive taget under lokalbedøvelse fra LP-læsioner og de samme områder matchet i kontrol. Alle biopsier indsendes til Histologisk Afdeling, Sohag Det Medicinske Fakultet. De vil blive fikseret i 10 % neutral bufret formalin, dehydreret i stigende kvaliteter af ethanol efterfulgt af nedsænkning i xylen og derefter imprægneret i paraffin. Der vil blive taget flere 5 mikron (5um) tykke sektioner fra hver blok. Et objektglas vil blive farvet med hæmatoxylin og eosin (H&E) til rutinemæssig histopatologisk undersøgelse. Andre sektioner vil blive monteret på positivt ladede objektglas og opbevaret ved stuetemperatur for at blive farvet immunhistokemisk.

1. Histopatologisk vurdering af H&E-farvede snit:

   Sektioner farvet med H&E vil blive evalueret under lysmikroskop for at bekræfte diagnosen LP og for at vurdere epidermale og dermale ændringer.

2. Immunhistokemisk (IHC) farvningsprocedure Metoden, der anvendes til immunfarvning, vil være streptavidin-biotin amplificeret system. Paraffinindlejrede vævssnit vil blive afparaffineret i xylen, rehydreret i en gradueret serie af ethanol og inkuberet med 3 % hydrogenperoxid. Objektglassene vil blive skyllet i fosfat-bufret saltvand (PBS) og derefter udsat for varmeinduceret epitopudvinding i citratbufferopløsning (Ph 6) i 20 minutter. Efter afkøling vil objektglassene blive inkuberet natten over ved stuetemperatur med muse monoklonalt anti-CIRP-antistof (0,1 ml koncentreret og fortyndet med PBS i en fortynding 1:75). Påvisning af immunreaktivitet vil blive udført ved hjælp af det universelle mærkede Streptavidin-Biotin-system, peberrodsperoxidase. Til sidst vil reaktionen blive visualiseret med et passende substrat/kromogen (diaminobenzidin) reagens. Farvningsproceduren vil omfatte de negative kontroller opnået ved substitution af primære antistoffer med fosfatbufret saltvand (16).
3. Fortolkning af CIRP-immunfarvning:

CIRP-immunfarvningen vil blive vurderet separat og blindt i LP-læsioner og kontroltilfælde. Epidermale og dermale celler vil blive tildelt positive ved tilstedeværelsen af ​​brunlig farve påvist ved DAB-reaktion enten i cytoplasmaet eller kerner i ≥ 1 farvede celler (25).