メトホルミンと糖尿病前症における分子的加齢

研究方法とアウトカム指標：

1. 臨床経歴と検査：臨床経歴および血圧。
2. 体格指数（BMI）：BMIは、体重（kg）／身長（m2）の式を用いて算出されます。
3. 人体計測評価：すべての周囲長（ウエスト、ヒップ、大腿中央、上腕中央、首）および皮下脂肪厚（上腕二頭筋、上腕三頭筋、前腋窩、肩甲骨下、腸骨稜上、側胸部、大腿）の測定を行います。すべての測定は、同じ位置と条件下で3回繰り返されます。

4. 体組成：体組成は、多周波生体電気インピーダンス法（MF-BIA; InBody 770, Cerritos, CA, USA）を用いて測定されます。 訪問2（90日目） 訪問3（180日目） 遵守状況確認 糖尿病前症被験者（BMI＞25kg/m2）の登録（n=112） 検査：空腹時血糖、耐糖能異常（75g経口ブドウ糖負荷後2時間値）、HbA1c グループI：メトホルミン群（n=56） グループII：プラセボ群（n=56） 最終分析 測定項目は訪問1と同様 ベースライン検査：臨床・食事プロファイル、血圧、人体計測評価［体格指数、周囲長（ウエスト、ヒップ、大腿中央、上腕中央、首）、皮下脂肪厚（上腕二頭筋、上腕三頭筋、肩甲骨下、腸骨稜上、大腿、側胸部、下腿）］、体脂肪、握力、血糖・脂質プロファイルその他の代謝パラメータ、空腹時血清インスリン、C-ペプチドおよびHOMA-IR、白血球テロメラーゼ長およびテロメラーゼ活性、ならびにSIRT1、mTOR、p53、p66Shc遺伝子の発現解析。

   無作為割り付け： 訪問1（0日目） スクリーニング 食事および運動（2週間の導入期間） 5

5. 握力：握力は、Jamarアナログ握力計を用いて測定されます。被験者は座位で、肘を体側につけ90度に屈曲し、手首は中間位とし、握力計のハンドル位置II、握力計の下に支持を設けて測定します。
6. 生化学的測定：血液サンプルは12時間の絶食後（前3日間は通常食摂取）に採取されます。75g経口ブドウ糖負荷試験（OGTT）を実施します。血液サンプルは以下の項目について分析されます：血糖、A1C、脂質、空腹時インスリン、C-ペプチド、ホメオスタシスモデル評価（HOMA）-インスリン抵抗性（IR）、HOMA-β（β%）および血清グルカゴンレベル。
7. DNA抽出および定量：DNAは、QIAamp DNA抽出キット（Qiagen, Hilden, Germany）を用いて末梢血単核細胞から分離され、-20℃で将来の実験のために保存されます。DNA抽出後、DNAサンプルは定量され、50 ng/μLに希釈されます。DNAの濃度と品質は、ナノドロップ（Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, USA）を用いて測定され、分析に含まれるサンプルはすべて吸光度比A260/A280＞1.8とします。h) 白血球テロメア長の測定：LTLは、テロメア反復配列コピー数（T）と基準となる単一コピー遺伝子コピー数（S）を比較する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）ベースの技術を用いて解析されます。各サンプルのテロメア長は、テロメア対単一コピー遺伝子比（T/S比）を用いて推定され、ΔCt［Ct（テロメア）/Ct（単一遺伝子）］の計算を行います。各サンプル（x）のT/S比は、基準サンプルの平均T/S比に正規化されます［2-（ΔCtx - ΔCtr）= 2-ΔΔCt］。この基準サンプルは、標準曲線の作成において、参照サンプルおよび検証サンプルの両方として使用されます。

i) リアルタイムPCRによる遺伝子発現解析：全RNAは、RNeasy Mini Kit（QIAGEN）を用いて抽出され、cDNAはiScript cDNA合成キット（Bio-Rad, USA）を用いて合成されます。Q-PCRアッセイは、サーマルサイクラー（iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA）で実施されます。Sirt1、p66Shc、p53、およびmTORのプライマーは、GenBankデータベースに由来する配列から、Primer 3（Whitehead Institute, Massachusetts, USA）およびOperon's Oligoソフトウェア（Operon, California, USA）を用いて設計し、Eurofins MWG（Ebersberg, Germany）から購入します。比較しきい値サイクル法（ΔΔCq）を用いて、群間のしきい値サイクル値の差を比較し、遺伝子発現の相対的変化倍率を求めます。