二甲双胍与糖尿病前期分子衰老

研究方法与结局指标：

1. 临床病史与检查：临床病史与血压。
2. 身体质量指数：BMI将使用公式体重（千克）/身高（米²）计算。
3. 人体测量评估：将测量所有围度（腰围、臀围、大腿中部围、上臂中部围和颈围）和皮褶厚度（肱二头肌、肱三头肌、腋前线、肩胛下、髂上、侧胸和大腿）。所有测量将在相同位置和条件下重复三次。

4. 身体成分：身体成分将通过多频生物电阻抗法测量（MF-BIA；InBody 770，美国加利福尼亚州塞里托斯）。访视2（第90天）访视3（第180天）依从性检查 招募糖尿病前期受试者（BMI>25千克/米²）（n=112）检查：空腹血糖、糖耐量异常（口服75克葡萄糖后2小时）和糖化血红蛋白。第一组：二甲双胍组（n=56）第二组：安慰剂组（n=56）最终分析测量同访视1基线检查：临床与饮食概况、血压、人体测量评估[身体质量指数、围度（腰围、臀围、大腿中部围、上臂中部围和颈围）和皮褶厚度（肱二头肌、肱三头肌、肩胛下、髂上、大腿、侧胸和小腿）]、体脂、握力肌肉力量、血糖与血脂谱其他代谢参数、空腹血清胰岛素、C肽和HOMA-IR、白细胞端粒酶长度与端粒酶活性以及SIRT1、mTOR、p53、p66Shc基因的基因表达。

   随机化：访视1（第0天）筛选饮食与运动（为期两周磨合期）5

5. 握力肌肉力量：握力将使用Jamar模拟手握测力计测量，参与者取坐姿，肘部贴近身体弯曲成直角，手腕保持中立位，测力计手柄置于第二位置，并在测力计下方提供支撑。
6. 生化测量：血样应在禁食12小时过夜后采集，受试者前三天正常饮食。将进行75克口服葡萄糖耐量试验。血样将分析以下项目：血糖、糖化血红蛋白、血脂、空腹胰岛素、C肽、稳态模型评估（HOMA）-胰岛素抵抗（IR）和HOMA-β（β%）以及血清胰高血糖素水平。
7. DNA分离与定量：DNA将从外周血单个核细胞中使用QIAamp DNA提取试剂盒（德国希尔登凯杰）分离，并储存于-20°C以备后续实验。DNA分离后，样品将定量并稀释至50纳克/微升。DNA浓度与质量将使用分光光度计（美国北卡罗来纳州威尔明顿Nanodrop Technologies）测量，纳入分析的样品均需满足光密度比A260/A280>1.8。h) 白细胞端粒长度测量：LTL将采用基于定量聚合酶链式反应的技术分析，该技术比较端粒重复序列拷贝数（T）与参考单拷贝基因拷贝数（S）。每个样品的端粒长度将使用端粒与单拷贝基因比率（T/S比率）估算，计算公式为ΔCt [Ct（端粒）/Ct（单基因）]。每个样品（x）的T/S比率将归一化至参考样品的平均T/S比率[2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt]，该参考样品将用于标准曲线，既作为参考样品也作为验证样品。

i) 实时荧光定量PCR基因表达分析：总RNA将使用RNeasy Mini Kit（凯杰）提取，cDNA使用iScript cDNA合成试剂盒（美国伯乐）合成。Q-PCR检测将在热循环仪（iCycler iQ5，美国加利福尼亚州赫拉克勒斯伯乐）中进行。Sirt1、p66Shc、p53和mTOR的引物将根据GenBank数据库中的序列设计，使用Primer 3（美国马萨诸塞州怀特黑德研究所）和Operon的Oligo软件（美国加利福尼亚州Operon），从Eurofins MWG（德国埃伯斯贝格）购买。将采用比较阈值循环法（ΔΔCq），通过比较组间阈值循环值的差异来获得基因表达的相对倍数变化。