Metformina y Envejecimiento Molecular en Prediabetes

Metodología de investigación y medidas de resultados:

1. Historia clínica y examen: Historia clínica y presión arterial.
2. Índice de masa corporal: El IMC se calculará mediante la fórmula peso (Kg)/altura (m2).
3. Evaluación antropométrica: Se tomarán todas las medidas de circunferencias (cintura, cadera, muslo medio, brazo medio y cuello) y pliegues cutáneos (bíceps, tríceps, axilar anterior, subescapular, suprailíaco, torácico lateral y muslo). Todas las mediciones se repetirán tres veces en la misma posición y condiciones.

4. Composición corporal: La composición corporal se medirá mediante bioimpedancia eléctrica multifrecuencia (MF-BIA; InBody 770, Cerritos, CA, EE. UU.) Visita-2 (Día 90) Visita-3 (Día 180) Verificación de cumplimiento Inscripción de sujetos con prediabetes (IMC>25kg/m2) (n=112) Investigaciones: Glucosa en ayunas, TGT (2h post-carga oral de glucosa (75g) y HbA1c Grupo-I: Grupo Metformina (n=56) Grupo-II: Grupo Placebo (n=56) Análisis final Mediciones iguales que en la visita 1 Investigaciones basales: Perfiles clínicos y dietéticos, presión arterial, evaluaciones antropométricas [índice de masa corporal, circunferencias (cintura, cadera, muslo medio, brazo medio y cuello) y pliegues cutáneos (bíceps, tríceps, subescapular, suprailíaco, muslo, torácico lateral y pantorrilla)], grasa corporal, fuerza muscular de prensión manual, perfil glucémico y lipídico otros parámetros metabólicos, insulina sérica en ayunas, péptido C y HOMA-IR, longitud de los telómeros de leucocitos y actividad de la telomerasa y expresión génica de los genes SIRT1, mTOR, p53, p66Shc.

   Aleatorización: Visita 1 (Día 0) Cribado Dieta y ejercicio (período de dos semanas) 5

5. Fuerza muscular de prensión manual: La fuerza de prensión se medirá utilizando un dinamómetro manual analógico Jamar con los participantes sentados, el codo al lado y flexionado en ángulo recto, y la muñeca en posición neutral, la posición II del mango del dinamómetro y provisión de soporte debajo del dinamómetro.
6. Mediciones bioquímicas: La muestra de sangre se extraerá después de un ayuno nocturno de 12 horas, el sujeto habiendo seguido una dieta normal los tres días anteriores. Se realizará una PTGO de 75 g. Las muestras de sangre se analizarán para lo siguiente: glucosa en sangre, A1C, lípidos, insulina en ayunas, péptido C, Evaluación del Modelo de Homeostasis (HOMA)- Resistencia a la Insulina (RI), y HOMA- Beta (ß%) y niveles de glucagón sérico.
7. Aislamiento y cuantificación de ADN: El ADN se separará de las células mononucleares de sangre periférica utilizando el kit de extracción de ADN QIAamp (Qiagen, Hilden, Alemania) y se almacenará a -20°C para experimentos futuros. Después del aislamiento del ADN, las muestras de ADN se cuantificarán y diluirán a 50 ng/μL. La concentración y calidad del ADN se medirán utilizando un nanodrop (Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, EE. UU.) y se incluirán muestras para el análisis; todas tendrán una relación de densidad óptica A 260/A280> 1.8. h) Medición de la longitud de los telómeros de leucocitos: La LTL se analizará con una técnica basada en reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) que compara el número de copias de la secuencia repetida de telómeros (T) con el número de copias de un gen de copia única de referencia (S). La longitud de los telómeros para cada muestra se estimará utilizando la relación telómero a gen de copia única (relación T/S) con el cálculo de ΔCt [Ct (telómero)/Ct(gen único)]. La relación T/S para cada muestra (x) se normalizará a la relación T/S media de la muestra de referencia [2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt], que se utilizará para la curva estándar, tanto como muestra de referencia como de validación.

i) Expresión génica por PCR en tiempo real: El ARN total se extraerá utilizando un kit RNeasy Mini (QIAGEN), el ADNc se sintetizará con un kit de síntesis de ADNc iScript (Bio-Rad, EE. UU.). El ensayo de Q-PCR se realizará en un termociclador (iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA). Los cebadores para Sirt1, p66Shc, p53 y mTOR se diseñarán a partir de secuencias derivadas de la base de datos GenBank utilizando Primer 3 (Whitehead Institute, Massachusetts, EE. UU.) y el software Oligo de Operon (Operon, California, EE. UU.), comprados a Eurofins MWG (Ebersberg, Alemania). Se utilizará el método del ciclo umbral comparativo (ΔΔCq), que compara las diferencias en los valores del ciclo umbral entre grupos, para obtener el cambio relativo en la expresión génica.