Metformina e Invecchiamento Molecolare nel Prediabete

Metodologia della ricerca e misure dei risultati:

1. Anamnesi ed Esame Clinico: Anamnesi clinica e pressione sanguigna.
2. Indice di Massa Corporea: L'IMC sarà calcolato utilizzando la formula peso (Kg)/altezza (m2).
3. Valutazione Antropometrica: Saranno rilevate tutte le circonferenze (vita, fianchi, coscia media, braccio medio e collo) e le pliche cutanee (bicipiti, tricipiti, ascellare anteriore, sottoscapolare, soprailiaca, toracica laterale e coscia). Tutte le misurazioni saranno ripetute tre volte nella stessa posizione e nelle stesse condizioni.

4. Composizione Corporea: La composizione corporea sarà misurata tramite bioimpedenziometria multifrequenza (MF-BIA; InBody 770, Cerritos, CA, USA) Visita-2 (Giorno 90) Visita-3 (Giorno 180) Controllo della compliance Arruolamento di soggetti con prediabete (IMC>25kg/m2) (n=112) Indagini: Glicemia a digiuno, IGT (2h dopo carico orale di glucosio (75g) e HBA1c Gruppo-I: Gruppo Metformina (n=56) Gruppo-II: Gruppo Placebo (n=56) Analisi Finale Misurazioni come nella visita 1 Indagini basali: Profili clinici e dietetici, pressione sanguigna, valutazioni antropometriche [indice di massa corporea, circonferenze (vita, fianchi, coscia media, braccio medio e collo) e pliche cutanee (bicipiti, tricipiti, sottoscapolare, soprailiaca, coscia, toracica laterale e polpaccio)], grasso corporeo, forza muscolare della presa manuale, profilo glicemico e lipidico altri parametri metabolici, insulina sierica a digiuno, C-peptide e HOMA-IR, lunghezza dei telomeri dei leucociti e attività telomerasica ed espressione genica dei geni SIRT1, mTOR, p53, p66Shc.

   Randomizzazione: Visita 1 (Giorno 0) Screening Dieta ed esercizio (run-in di due settimane) 5

5. Forza Muscolare della Presa Manuale: La forza della presa sarà misurata utilizzando un dinamometro manuale analogico Jamar con i partecipanti seduti, il gomito al fianco e flesso ad angolo retto, e il polso in posizione neutra, la posizione II dell'impugnatura del dinamometro e la fornitura di supporto sotto il dinamometro.
6. Misurazioni Biochimiche: Il campione di sangue sarà prelevato dopo un digiuno notturno di 12 ore, il soggetto avrà seguito una dieta normale nei tre giorni precedenti. Sarà eseguito un OGTT da 75 g. I campioni di sangue saranno analizzati per: glicemia, A1C, lipidi, insulina a digiuno, C-peptide, Valutazione del Modello di Omeostasi (HOMA)- Resistenza all'Insulina (IR), e HOMA- Beta (ß%) e livelli sierici di glucagone.
7. Isolamento e Quantificazione del DNA: Il DNA sarà separato dalle cellule mononucleate del sangue periferico utilizzando il kit di estrazione del DNA QIAamp (Qiagen, Hilden, Germania) e sarà conservato a -20°C per futuri esperimenti. Dopo l'isolamento del DNA, i campioni di DNA saranno quantificati e diluiti a 50 ng/μL. La concentrazione e la qualità del DNA saranno misurate utilizzando un nanodrop (Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, USA) e i campioni saranno inclusi per l'analisi tutti avranno un rapporto di densità ottica A260/A280 > 1.8. h) Misurazione della Lunghezza dei Telomeri dei Leucociti: LTL sarà analizzata con una tecnica basata sulla reazione a catena della polimerasi quantitativa (qPCR) che confronta il numero di copie della sequenza ripetuta del telomero (T) con il numero di copie di un gene singolo di riferimento (S). La lunghezza dei telomeri per ciascun campione sarà stimata utilizzando il rapporto telomero/gene singolo (rapporto T/S) con il calcolo di ΔCt [Ct (telomero)/Ct(gene singolo)]. Il rapporto T/S per ogni campione (x) sarà normalizzato rispetto al rapporto T/S medio del campione di riferimento [2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt], che sarà utilizzato per la curva standard, sia come campione di riferimento che come campione di validazione.

i) Espressione genica mediante PCR in tempo reale: L'RNA totale sarà estratto utilizzando un kit RNeasy Mini Kit, (QIAGEN) Il cDNA sarà sintetizzato con un kit di sintesi del cDNA iScript (Bio-Rad, USA). Il saggio Q-PCR sarà eseguito in un Thermal Cycler (iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA). I primer per Sirt1, p66Shc, p53 e mTOR saranno progettati a partire da sequenze derivate dal database GenBank utilizzando Primer 3 (Whitehead Institute, Massachusetts, USA) e il software Oligo di Operon (Operon, California, USA), acquistati da Eurofins MWG (Ebersberg, Germania). Il metodo del ciclo di soglia comparativo (ΔΔCq), che confronta le differenze nei valori del ciclo di soglia tra i gruppi, sarà utilizzato per ottenere la variazione relativa in fold dell'espressione genica.