Méthformine et vieillissement moléculaire dans le prédiabète

Méthodologie de recherche et mesures des résultats :

1. Histoire clinique et examen : Histoire clinique et tension artérielle.
2. Indice de masse corporelle : L'IMC sera calculé en utilisant la formule poids (kg) / taille (m²).
3. Évaluation anthropométrique : Toutes les circonférences (taille, hanche, mi-cuisse, mi-bras et cou) et les plis cutanés (biceps, triceps, axillaire antérieur, sous-scapulaire, supra-iliaque, thoracique latéral et cuisse) seront mesurés. Toutes les mesures seront répétées trois fois dans les mêmes conditions et au même endroit.

4. Composition corporelle : La composition corporelle sera mesurée par impédance bioélectrique multifréquence (MF-BIA ; InBody 770, Cerritos, CA, États-Unis) Visite 2 (Jour 90) Visite 3 (Jour 180) Vérification de l'observance Inscription des sujets prédiabétiques (IMC > 25 kg/m²) (n = 112) Examens : Glycémie à jeun, intolérance au glucose (2 h après charge orale de glucose (75 g)) et HbA1c Groupe I : Groupe Metformine (n = 56) Groupe II : Groupe Placebo (n = 56) Analyse finale Mesures identiques à la visite 1 Examens de base : Profils cliniques et diététiques, tension artérielle, évaluations anthropométriques [indice de masse corporelle, circonférences (taille, hanche, mi-cuisse, mi-bras et cou) et plis cutanés (biceps, triceps, sous-scapulaire, supra-iliaque, cuisse, thoracique latéral et mollet)], graisse corporelle, force musculaire de préhension, profil glycémique et lipidique, autres paramètres métaboliques, insuline sérique à jeun, peptide C et HOMA-IR, longueur des télomères des leucocytes et activité télomérase et expression génique des gènes SIRT1, mTOR, p53, p66Shc.

   Randomisation : Visite 1 (Jour 0) Dépistage Régime et exercice (période de rodage de deux semaines) 5

5. Force musculaire de préhension : La force de préhension sera mesurée à l'aide d'un dynamomètre manuel analogique Jamar, les participants étant assis, le coude près du corps et fléchi à angle droit, et le poignet en position neutre, la poignée du dynamomètre en position II et avec un support placé sous le dynamomètre.
6. Mesures biochimiques : L'échantillon de sang sera prélevé après un jeûne nocturne de 12 heures, le sujet ayant suivi un régime normal les trois jours précédents. Une HGPO de 75 g sera réalisée. Les échantillons de sang seront analysés pour les éléments suivants : glycémie, A1C, lipides, insuline à jeun, peptide C, évaluation du modèle d'homéostasie (HOMA) - résistance à l'insuline (IR) et HOMA-Bêta (β%) et taux de glucagon sérique.
7. Isolement et quantification de l'ADN : L'ADN sera séparé des cellules mononucléées du sang périphérique à l'aide du kit d'extraction d'ADN QIAamp (Qiagen, Hilden, Allemagne) et sera stocké à -20 °C pour de futures expériences. Après l'isolement de l'ADN, les échantillons d'ADN seront quantifiés et dilués à 50 ng/μL. La concentration et la qualité de l'ADN seront mesurées à l'aide d'un nanodrop (Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, États-Unis) et les échantillons inclus dans l'analyse auront tous un rapport d'absorbance A260/A280 > 1,8. h) Mesure de la longueur des télomères des leucocytes : La LTL sera analysée par une technique basée sur la réaction en chaîne par polymérase quantitative (qPCR) qui compare le nombre de copies de la séquence répétée des télomères (T) à celui d'un gène de référence à copie unique (S). La longueur des télomères pour chaque échantillon sera estimée en utilisant le rapport télomère/gène à copie unique (rapport T/S) avec le calcul de ΔCt [Ct (télomère) / Ct (gène unique)]. Le rapport T/S pour chaque échantillon (x) sera normalisé par rapport au rapport T/S moyen de l'échantillon de référence [2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt], qui sera utilisé pour la courbe standard, à la fois comme échantillon de référence et comme échantillon de validation.

i) Expression génique par PCR en temps réel : L'ARN total sera extrait à l'aide d'un kit RNeasy Mini (QIAGEN), l'ADNc sera synthétisé avec un kit de synthèse d'ADNc iScript (Bio-Rad, États-Unis). Le test Q-PCR sera réalisé dans un thermocycleur (iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA). Les amorces pour Sirt1, p66Shc, p53 et mTOR seront conçues à partir de séquences issues de la base de données GenBank en utilisant Primer 3 (Whitehead Institute, Massachusetts, États-Unis) et le logiciel Oligo d'Operon (Operon, Californie, États-Unis), achetées auprès d'Eurofins MWG (Ebersberg, Allemagne). La méthode comparative du cycle seuil (ΔΔCq), qui compare les différences dans les valeurs du cycle seuil entre les groupes, sera utilisée pour obtenir le changement relatif d'expression génique.