Metformina e Envelhecimento Molecular na Pré-Diabetes

Metodologia da investigação e medidas de resultados:

1. História Clínica e Exame: História clínica e pressão arterial.
2. Índice de Massa Corporal: O IMC será calculado utilizando a fórmula peso (Kg)/altura (m2).
3. Avaliação Antropométrica: Serão realizadas todas as medições de circunferências (cintura, anca, meio da coxa, meio do braço e pescoço) e pregas cutâneas (bicípite, tricípite, axilar anterior, subescapular, suprailíaca, torácica lateral e coxa). Todas as medições serão repetidas três vezes na mesma posição e condições.

4. Composição Corporal: A composição corporal será medida através de bioimpedância multifrequência (MF-BIA; InBody 770, Cerritos, CA, EUA) Visita-2 (Dia 90) Visita-3 (Dia 180) Verificação da adesão Inscrição de sujeitos com pré-diabetes (IMC>25kg/m2) (n=112) Investigações: Glicemia em jejum, TTG (2h pós-carga oral de glucose (75g) e HBA1c Grupo-I: Grupo Metformina (n=56) Grupo-II: Grupo Placebo (n=56) Análise Final Medições iguais às da visita 1 Investigações iniciais: Perfis clínico e dietético, pressão arterial, avaliações antropométricas [índice de massa corporal, circunferências (cintura, anca, meio da coxa, meio do braço e pescoço) e pregas cutâneas (bicípite, tricípite, subescapular, suprailíaca, coxa, torácica lateral e barriga da perna)], gordura corporal, força muscular de preensão manual, perfil glicémico e lipídico outros parâmetros metabólicos, insulina sérica em jejum, péptido C e HOMA-IR, comprimento dos telómeros dos leucócitos e atividade da telomerase e expressão génica dos genes SIRT1, mTOR, p53, p66Shc.

   Randomização: Visita 1 (Dia 0) Rastreio Dieta e exercício (período de preparação de duas semanas) 5

5. Força Muscular de Preensão Manual: A força de preensão será medida utilizando um Dinamómetro Manual Analógico Jamar com os participantes sentados, o cotovelo ao lado do corpo e fletido em ângulo reto, e posição neutra do pulso, posição II do punho do dinamómetro e fornecimento de suporte por baixo do dinamómetro.
6. Medidas Bioquímicas: A amostra de sangue será colhida após um jejum noturno de 12 horas, o sujeito tendo feito uma dieta normal nos três dias anteriores. Será realizada uma PTGO de 75 g. As amostras de sangue serão analisadas para o seguinte; glicemia, A1C, lípidos, insulina em jejum, péptido C, Modelo de Avaliação da Homeostase (HOMA)- Resistência à Insulina (RI), e HOMA- Beta (ß%) e níveis séricos de glucagon.
7. Isolamento e Quantificação de ADN: O ADN será separado de células mononucleares do sangue periférico utilizando o kit de extração de ADN QIAamp (Qiagen, Hilden, Alemanha) e será armazenado a -20ºC para experiências futuras. Após o isolamento do ADN, as amostras de ADN serão quantificadas e diluídas para 50 ng/μL. A concentração e qualidade do ADN serão ambas medidas utilizando um nanodrop (Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, EUA) e as amostras incluídas para análise terão todas uma razão de densidade ótica A 260/A280> 1,8. h) Medição do Comprimento dos Telómeros dos Leucócitos: O CTL será analisado com uma técnica baseada em reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) que compara o número de cópias da sequência repetitiva do telómero (T) ao número de cópias de um gene de cópia única de referência (S). O comprimento do telómero para cada amostra será estimado utilizando a razão telómero para gene de cópia única (razão T/S) com o cálculo de ΔCt [Ct (telómero)/Ct(gene único)]. A razão T/S para cada amostra (x) será normalizada para a razão T/S média da amostra de referência [2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt], que será utilizada para a curva padrão, tanto como amostra de referência como como amostra de validação.

i) Expressão génica por PCR em tempo real: O ARN total será extraído utilizando um kit RNeasy Mini Kit, (QIAGEN) ADNc e sintetizado com um kit de síntese de ADNc iScript (Bio-Rad, EUA). O ensaio de Q-PCR será realizado num Termociclador (iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA). Os primers para Sirt1, p66Shc, p53 e mTOR serão desenhados a partir de sequências derivadas da base de dados GenBank utilizando o Primer 3 (Whitehead Institute, Massachusetts, EUA) e o software Oligo da Operon (Operon, Califórnia, EUA), adquiridos da Eurofins MWG (Ebersberg, Alemanha). O método do ciclo limiar comparativo (ΔΔCq), que compara diferenças nos valores do ciclo limiar entre grupos, será utilizado para obter a alteração relativa em dobra da expressão génica.