Metformin a molekulární stárnutí v prediabetu

Metodologie výzkumu a výsledné ukazatele:

1. Klinická anamnéza a vyšetření: Klinická anamnéza a krevní tlak.
2. Index tělesné hmotnosti: BMI bude vypočítán pomocí vzorce hmotnost (kg)/výška (m2).
3. Antropometrické hodnocení: Budou měřeny všechny obvody (pas, boky, střed stehna, střed paže a krk) a kožní řasy (biceps, triceps, přední axilární, subskapulární, suprailiakální, laterální hrudní a stehno). Všechna měření budou opakována třikrát za stejných podmínek a na stejném místě.

4. Složení těla: Složení těla bude měřeno pomocí vícefrekvenční bioelektrické impedance (MF-BIA; InBody 770, Cerritos, CA, USA) Návštěva-2 (Den 90) Návštěva-3 (Den 180) Kontrola dodržování Zařazení osob s prediabetem (BMI>25 kg/m2) (n=112) Vyšetření: Glykémie nalačno, IGT (2 hodiny po perorální glukózové zátěži (75 g) a HbA1c Skupina I: Skupina metforminu (n=56) Skupina II: Placebo skupina (n=56) Závěrečná analýza Měření stejná jako při návštěvě 1 Výchozí vyšetření: Klinické a dietní profily, krevní tlak, antropometrická hodnocení [index tělesné hmotnosti, obvody (pas, boky, střed stehna, střed paže a krk) a kožní řasy (biceps, triceps, subskapulární, suprailiakální, stehno, laterální hrudní a lýtko)], tělesný tuk, svalová síla stisku ruky, glykemický a lipidový profil, další metabolické parametry, inzulin nalačno v séru, C-peptid a HOMA-IR, délka telomer leukocytů a aktivita telomerázy a genová exprese genů SIRT1, mTOR, p53, p66Shc.

   Randomizace: Návštěva 1 (Den 0) Screening Dieta a cvičení (dvoutýdenní přípravné období) 5

5. Svalová síla stisku ruky: Síla stisku bude měřena pomocí analogového ručního dynamometru Jamar s účastníky v sedě, s loktem u těla a ohnutým do pravého úhlu, s neutrální polohou zápěstí, polohou rukojeti dynamometru II a s podporou pod dynamometrem.
6. Biochemická měření: Vzorek krve bude odebrán po 12hodinovém nočním půstu, subjekt měl normální stravu předchozí tři dny. Bude proveden 75g OGTT. Vzorky krve budou analyzovány na následující; glykémie, A1C, lipidy, inzulin nalačno, C-peptid, Homeostasis Model Assessment (HOMA)- Insulin Resistance (IR), a HOMA- Beta (ß%) a hladiny glukagonu v séru.
7. Izolace a kvantifikace DNA: DNA bude izolována z periferních mononukleárních buněk krve pomocí sady QIAamp DNA extraction kit (Qiagen, Hilden, Německo) a bude skladována při -20°C pro budoucí experimenty. Po izolaci DNA budou vzorky DNA kvantifikovány a naředěny na 50 ng/μL. Koncentrace a kvalita DNA budou měřeny pomocí nanodropu (Nanodrop Technologies, Wilmington, NC, USA) a pro analýzu budou zařazeny vzorky, které budou mít optický hustotní poměr A 260/A280 > 1,8. h) Měření délky telomer leukocytů: Délka telomer leukocytů bude analyzována pomocí kvantitativní polymerázové řetězové reakce (qPCR), která porovnává počet kopií telomerové repetitivní sekvence (T) s počtem kopií referenčního jednokopiového genu (S). Délka telomer pro každý vzorek bude odhadnuta pomocí poměru telomera k jednokopiovému genu (T/S poměr) s výpočtem ΔCt [Ct (telomera)/Ct (jednokopiový gen)]. T/S poměr pro každý vzorek (x) bude normalizován na průměrný T/S poměr referenčního vzorku [2-(ΔCtx-ΔCtr) = 2-ΔΔCt], který bude použit pro standardní křivku, a to jak jako referenční vzorek, tak jako validační vzorek.

i) Genová exprese pomocí real-time PCR: Celková RNA bude extrahována pomocí sady RNeasy Mini Kit (QIAGEN), cDNA bude syntetizována pomocí sady iScript cDNA synthesis kit (Bio-Rad, USA). Q-PCR analýza bude provedena v termocykleru (iCycler iQ5, Bio-Rad, Hercules, CA). Primery pro Sirt1, p66Shc, p53 a mTOR budou navrženy ze sekvencí odvozených z databáze GenBank pomocí softwaru Primer 3 (Whitehead Institute, Massachusetts, USA) a Operon's Oligo software (Operon, California, USA), zakoupeny od společnosti Eurofins MWG (Ebersberg, Německo). Pro získání relativní změny genové exprese ve formě násobku bude použita metoda komparativního prahového cyklu (ΔΔCq), která porovnává rozdíly v hodnotách prahového cyklu mezi skupinami.