과민성 대장 증후군의 공초점 내시경 유틸리티(p-CLE)

병리생리학은 복잡하고 다원적이며 완전히 알려지지 않았습니다. 장 장벽 기능 장애 및 소장 및 대장의 점막 염증이 보고되었습니다. myenteric plexus의 염증 및 신경 변성의 증거는 IBS 환자의 전층 장 생검 샘플에서 발견되었습니다.

IBS 환자는 장 상피 간격의 밀도가 상당히 높은 것으로 나타났습니다. 증가된 상피 세포 돌출에 대한 대용 마커인 IBS 환자의 장에서 상승된 상피 간극은 관찰된 장 투과성 변화의 원인일 수 있으며 점막 염증을 유발할 수 있습니다.

공초점 레이저 내시경(CLE)은 장 점막의 변화를 시각화할 수 있는 새로운 내시경 이미징 도구입니다. 정맥 주사 플루오레세인을 사용하면 미크론 규모의 생체 내 고해상도 실시간 이미징이 가능하여 진행 중인 내시경 검사 중에 세포 세부 사항을 시각화할 수 있습니다. 이 기술은 상피 간극 및 기타 염증 징후를 식별하고 정량화하는 데 사용할 수 있습니다.

이 연구의 목적은 pCLE를 사용하여 IBS 환자에서 이전에 입증된 미세한 염증의 존재를 평가하는 것입니다. 정확한 염증 부위를 결정하면 보다 정확한 방법으로 직접 생검을 할 수 있습니다. 이러한 유형의 체계는 미래에 이러한 환자를 증상(변비, 설사 또는 혼합 우세 IBS)뿐만 아니라 염증 정도에 따라 분류할 수 있게 합니다. 이 환자들에게는 치료에 대한 반응을 평가하기 위한 Gold Standard 테스트가 없습니다. pCLE를 사용하여 미세한 염증 부위를 식별할 수 있으므로 염증 정도를 모니터링 매개변수로 사용할 수 있습니다. 아마도 CLE는 치료 및 다양한 유형의 치료에 대한 반응을 평가하고, IBS 환자의 하위 유형 간의 차이를 결정하고, 완화, 재발 및 예후를 평가하는 데 사용될 수 있습니다. 또한 병인의 잠재적인 기전을 밝히고 질병의 진단을 위한 내시경적 기준이 될 수 있다.

본 연구는 IBS 환자에서 pCLE를 이용하여 대장 미세 염증을 평가한 최초의 연구이다.

연구 설계: 이것은 관찰 및 분석 횡단면, 모집단 기반 설문 조사 연구로, 전향적 사례 수집, 비무작위 및 단순 맹검으로 Tertiary Academic Center에서 수행됩니다.

설정: 에콰도르 소화기 질환 연구소(IECED), OmniHospital Academic Tertiary Center. 2015년 10월부터 2016년 3월까지의 환자를 포함합니다. 환자는 위장병학 단위(IECED)에서 모집됩니다. 연구 프로토콜 및 동의서는 IRB(Institutional Review Board)의 승인을 받았으며 헬싱키 선언에 따라 수행됩니다. 환자는 정보에 입각한 동의서에 서명하고 헌법 데이터(성별, 연령, 동반 질환, 약물 치료)를 포함하는 설문지에 답변합니다. IBS 그룹의 환자는 증상에 따라 우세 설사(IBS-D), 우세 변비(IBS-C) 또는 혼합형(IBS-M)으로 분류됩니다. 내시경 소견은 데이터베이스에 기록됩니다.

내시경 기술: 모든 대장내시경은 환자가 폴리에틸렌 글리콜 전해질 세척 용액을 사용하여 표준 장 준비를 마친 후에 수행됩니다. 초기에 상피를 손상시키지 않도록 세심한 주의를 기울여 Pentax 스코프(Pentax EC-387CILK, Tokyo, Japan)를 사용하여 일상적인 백색광 대장내시경 검사를 IBS 및 건강한 대조군 환자에서 수행할 것입니다. 보스턴 장 준비 척도 및 염증 변화가 기록됩니다.

철회하는 동안, 의원성 점막 손상의 징후가 없는 경우 각 분절의 한 지점에서 pCLE를 사용하여 결장의 모든 부분(맹장, 우측 결장, 횡행, 좌측 결장, 구불 결장 및 직장)을 무작위로 평가합니다. 잔류 대변 조각으로 인한 이미지 인공물이 포함되지 않도록 물로 점막을 조심스럽게 씻으십시오. CLE 평가를 시작하기 전에 10% 플루오레세인 5ml를 정맥 주사합니다. Fluorescein은 혈관을 염색하고 좋은 조직 구조를 제공하지만 핵은 염색되지 않고 어두운 반점으로 나타납니다. 최적의 콘트라스트는 주사 후 처음 10분 이내에 얻어지지만 30-60분 동안 더 좋은 품질의 이미지를 얻을 수 있습니다.

현재 공초점 레이저 내시경(CLE)은 CLE 프로브(pCLE)를 사용하여 수행됩니다. pCLE에 사용되는 공초점 현미경은 처리되지 않은 생체 내 조직의 현미경 이미지를 캡처합니다. 현미경은 정의된 파장의 집중된 레이저 광을 사용하고 공초점 조리개를 통과시킵니다. 그런 다음 이미지가 2차원으로 재구성됩니다. pCLE(Cellvizio by Mauna Kea Technologies, Paris, France)의 경우 레이저 스캐닝 장치와 광원이 모두 신체 외부에 있습니다. 레이저 빔은 유연한 공초점 미니 프로브를 통해 전송되며 원위 렌즈는 10,000개 이상의 광섬유 다발을 통해 레이저 빔을 순차적으로 스캔합니다. 공초점 미니프로브는 0.9mm에서 2.5mm 범위의 직경으로 유연합니다.

연구에서 pCLE ColoFlex 탐침이 사용될 것입니다(Cellvizio; Mauna Kea Technology, Paris, France). 프로브는 기존 내시경의 액세서리 채널을 통과합니다. 이미지 속도는 이미징 깊이가 20μm인 1024×1024 픽셀에서 0.08초/프레임입니다. 공초점 이미지는 내시경 중에 먼저 분석됩니다. 그런 다음 시술 후 이미지를 디지털로 저장하고 검토하여 더 높은 배율(약 10000배)로 세부 사항을 확대하고 특수 설계된 소프트웨어 패키지(Cellvizio Viewer)를 사용하여 이미지 보정 및 안정화가 가능합니다.

pCLE 평가 직후 및 다음 결장 분절로 진행하기 전에 평가된 점막 부위에서 표적 생검을 수행합니다. 출혈은 이미지 품질을 손상시킬 수 있으므로 트라우마를 피하기 위해 탐침을 조직과 부드럽게 접촉하도록 배치하고 점막 생검 전 영역에서 pCLE 이미징을 완료합니다. pCLE를 수행하는 내시경 의사는 환자의 상태에 대해 눈이 멀게 되고 이후 이미지는 내시경 분야에서 2년 이상의 경험을 가진 두 명의 서로 다른 사람에 의해 맹목적으로 상세하게 분석됩니다.

IBS 환자에서 CLE를 사용하여 결장 염증의 분류를 검증한 연구는 없습니다. 궤양성 대장염(UC)에서 결장 점막의 염증은 이전에 CLE를 사용하여 설명되었습니다. Kiesslichet al. crypt 구조, 세포 침윤 및 혈관 구조를 결합한 CLE에 의한 염증 활동의 3등급 분류에 대해 보고했습니다. 그럼에도 불구하고 세포 침윤의 평가는 CLE로 세포 유형을 구별하는 데 어려움이 있기 때문에 의문이 제기되었습니다. 창 칭 리, 외. 3가지 CLE 매개변수를 사용하여 UC 환자의 염증을 평가했습니다: 4등급 선와 구조 분류, 플루오레신 누출 및 미세혈관 변경 한편, pCLE에 대한 마이애미 분류는 다음을 사용하여 대장염을 정의합니다: 선와 융합 및 왜곡, 밝은 상피, 확장되고 눈에 띄는 분지 혈관. 본 연구에서 CLE 염증에 사용되는 매개변수는 다음과 같습니다. 내강으로 플루오레세인의. 정상 결장 점막의 CLE 영상에서 소와의 내강에는 플루오레세인이 없고 소와의 어두운 중심으로 나타납니다. 그러나 염증이 있는 점막에서는 플루오레세인이 음와 내강으로 누출됩니다. 따라서 내강은 주변 상피보다 밝습니다. 2.4 등급 음와 구조 분류: 유형 A와 B는 각각 정상 염증과 만성 염증으로 간주되며 유형 C와 D는 급성 염증을 나타냅니다. A형: 소낭의 규칙적인 배열과 크기. 유형 B: 음낭의 불규칙한 배열, 음낭 사이의 공간이 커짐. C형: B형에 비해 음낭 개구부 확장, 음낭의 더 불규칙한 배열, 음낭 사이의 공간 확대. D형: 음낭 파괴 및/또는 음낭 농양. 3. 확장되고 눈에 띄는 분기 혈관

관찰자 간 및 관찰자 간 합의: 모든 결장 세그먼트의 CLE 사진 및 비디오를 포함하는 데이터 세트는 결과를 확인하거나 확인하지 않을 맹검 내시경 검사자 3명에게 제공됩니다. 관찰자 간 및 관찰자 내 재현성은 세 명의 조사자 간의 정지 이미지와 비디오 비교를 기반으로 측정됩니다. 관찰자 내 일치를 평가하기 위해 각 조사자는 이미지를 두 번 평가하고 답변을 비교합니다. 관찰자 간 합의를 평가하기 위해 세 명의 조사관 간의 모든 답변을 비교합니다. 일반적으로 CLE의 학습 곡선은 짧고 관찰자 간 또는 관찰자 간 합의가 양호합니다.

통계 분석: 범주형 변수는 Chi-square o Fisher Test를 사용하고 연속 변수는 Mann-Whitney Test를 사용하여 사례군과 대조군 간의 기준선 특성을 비교합니다. 진단 효능은 민감성, 특이성 및 정확성을 고려하여 측정됩니다. 모든 통계 분석은 SPSS 소프트웨어 제품군 v.22를 사용하여 수행됩니다.