T세포의 활성화를 표적으로 하는 Dribbles 항원을 이용한 진행성 폐암의 치료

악성 종양은 인간의 주요 사망 원인이 되었으며, 악성 종양의 가장 큰 사망 원인은 폐암입니다. 환경오염 심화로 폐암 발병률 증가와 높은 사망률, 최악의 경우 5년 생존율이 15% 안팎으로 악성종양 1위를 차지하는 등 새로운 항종양 기술과 제품 개발이 온다 기존의 세 가지 치료법(수술, 방사선 요법 및 화학 요법)으로 사람들의 생명과 건강에 대한 종양 위협을 비효율적으로 억제하기 때문에 정부와 기업의 점점 커지는 관심을 끌기 위해. 생물학 및 면역 요법은 2013년 Science 잡지에서 10대 혁신 중 하나로 선정되었으며 21세기 암 치료의 새로운 발전 방향으로 간주되었습니다.

기존의 면역치료는 주로 입양면역치료, 종양백신치료, 면역관문-항체치료 및 기타 보조치료를 포함하고 있으며, 양자면역치료는 전자에 더하여 연구개발되어 이들 치료법 중에서 가장 성숙한 치료법이다. 입양면역요법은 주로 수지상세포(Dendritic cells, DC)와 사이토카인유도살상세포(Cytokine Induced Killer, CIK) 면역요법으로 불리는 자가 DC-CIK 면역요법이 많은 단위에서 시행되고 있다. 이 기술의 원리는 다음과 같습니다. 인간 말초 혈액의 단핵구와 림프구를 분리한 다음 시험관 내에서 다양한 사이토카인(예: IFN - 감마, IL - 1, IL - 2, 항 - CD3 mAb)에 의해 증강되고 활성화되어 항원 제시 및 종양 세포를 죽이는 광범위한 스펙트럼 기능을 가진 혼합 림프구. 활성화된 DC-CIK를 환자에게 정맥주사하여 체내의 종양세포와 결합한 후 CIK 세포 퍼포린, 곡물 효소 B와 같은 활성 물질을 종양 세포로 방출하여 종양 세포를 용해시킵니다. IL-2, IFN-감마, TNF알파와 같은 사이토카인의 분비는 체내 면역기능을 향상시키고 항종양 기능의 역할을 부여한다.

기존 문헌 보고서와 생물학적 치료 센터에 대한 우리의 이전 연구는 대다수의 환자에게 우수한 안전성, 작은 부작용 및 우수한 내약성을 보여주었습니다. 치료 효과에서 현재 보고서는 DC-CIK 기술이 폐암을 제외한 백혈병, 림프종, 난소암, 위암 등에 좋은 치료 효과가 있음을 보여줍니다. 복잡한 폐암 종양 항원, 또는 약한 종양 특이적 T 세포 반응. 제시된 폐암 항원의 효과를 어떻게 향상시키고 더 강력한 종양 특이적 T 세포 반응을 자극하는지는 폐암 면역요법의 치료 효과를 향상시키는데 있어 다루어져야 할 필요가 있다.

최근 몇 년 동안 체크포인트 항체 요법은 CTLA-4, PD-1 및 PD-L1을 포함한 종양 면역 요법에서 획기적인 발전을 이루었습니다. 많은 임상 연구에서 진행성 NSCLC, 특히 폐 편평 암종에 대한 PD-1 및 PD-L1 항체의 치료법이 우수한 치료 효과를 나타내고 질병의 객관적 반응률이 10-23%에 달하는 것으로 나타났습니다. Autologous DC/CIK 요법은 국내에서 널리 시행되고 있으며 많은 임상에서 입증된 우수한 안전성을 가지고 있습니다. 효과적인 종양 항원이 부족하여 환자의 생존 기간 연장 및 지금까지 종양 진행을 예방했습니다. 일부 병원에서는 종양 세포 용해 용액 또는 단분자 단백질 펩티드/DC 통합 CIK 기술을 채택했는데, 이는 종양 세포 용해 또는 단일 분자 단백질 펩티드를 종양 항원으로 DC에 로드하여 체외 유도된 CIK와 동시에 결합시키는 것을 의미합니다. 비교했을 때 CIK 요법 단독으로 단위 요법은 종양을 비특이적으로 손상시킬 뿐만 아니라 신체가 종양 특이적 면역 반응을 일으키도록 유도할 수 있습니다. 그러나 종양 세포 용해에 포함된 대부분의 종양 항원은 효과적으로 섭취할 수 없는 장수 단백질입니다. DC는 T 림프구에 DC에 의해 제시된 제한된 유효 항원으로 이어집니다. 또한, 종양항원장수단백질은 종양세포의 자연적인 성장과정에서 장기간 존재할 수 있고, 환자가 자신의 조직을 인식할 수 있기 때문에 면역관용이 면역반응을 억제하여 종양을 죽이는 효과를 가져온다. 단분자 단백질 폴리펩타이드는 돌연변이 종양 항원이 아닌 단일 또는 소수의 종양 항원에 대해서만 특이적 면역 반응을 유도하여 종양을 탈출시킵니다. 우리는 자가 DC/CIK 요법이 효과적인 면역 반응을 생성할 수 없기 때문에 미래에 체크포인트 항체 요법을 통합하기 위한 새로운 대안 후보를 제공하기 위해 새로운 세포 치료법을 개발할 필요가 있습니다.

최근 Hu Hong 박사-Ming 팀은 혁신적인 암 치료 전략을 제시했습니다. 종양 백신 준비를 위해 종양 항원을 포획하기 위해 autophagy 역할을 사용하는 것입니다. 이 전략에서 Bortezomib(프로테아좀 억제제)를 처리한 체외 배양 종양 세포의 프로테아좀 활성을 차단하면 DRibbles corpuscle이라고 하는 자가포식소체에서 단명 단백질(SLiP)과 잘못 접힌 단백질(DRiP)이 풍부해집니다. DRibble 백신이라고도 알려진 이러한 DRibbles 미립자 제제를 수집하여 만든 종양 백신. 우리의 초기 연구는 전체 종양 세포 백신이 쉽게 분해되는 짧은 DC에 효율적으로 교차 제시될 수 없는 살아있는 단백질. 수명이 짧은 이 단백질은 DRibble 백신의 프로테아좀에 의해 분해되는 것을 피하고 이중 막 구조를 가진 자가포식소체 소포에 포장됩니다. 이 소포에는 내인성 위험 신호 분자(예: HSP90, HMGB1 등)가 포함되어 있어 선천성 면역 반응을 효과적으로 유발할 수 있습니다. 따라서 1회 DRibble 백신과 함께 배양하면 DC는 DRibble 백신을 효과적으로 섭취하고 DC 표면에 종양 관련 항원을 제시하고 MHC 분자와 결합하여 T 세포를 활성화시켜 면역 반응을 일으킬 수 있습니다. 전체 폐암 백신과 비교할 때, DRibble 폐암 백신은 더 넓은 범위의 종양 관련 항원을 제공할 수 있으며, 신체가 더 이상 교차 제시 부족에 대한 내성을 유지하지 못하게 하여 강력한 면역 반응을 유발할 수 있습니다. Hu Hong Ming 박사 팀은 또한 동종이계 드리블이 자가 종양 세포 드리블 백신 및 종양 퇴행과 비교하여 동등하게 효과적인 면역 반응을 유도할 수 있음을 발견했으며, 그 결과는 여러 종양 모델에서 확인되었습니다. 고전적인 MHC 분자가 없기 때문에 DRibble 백신 단백질은 DC에 의해 빠르게 분해될 수 있으며 동종이식 DRibble 백신은 동종이식 면역 반응의 유도로 인해 부작용을 유발하지 않으므로 안전성과 효능이 남아 있습니다.

DRibble 표면에는 DC의 표적 분자 리간드가 많이 있으며 표면에서 CLEC9A가 높게 발현되는 xDC 세포와 직접 결합합니다. xDC 세포는 항원을 DC에 효율적으로 교차 제시할 수 있으므로 DRibble 항원 제시의 효율성을 향상시킬 수 있습니다. 또한, DRibble에 의해 유도된 면역 반응은 면역 기억을 가지고 있으며 다양한 종양 특이 항원을 식별하여 종양 세포 재생에 대한 신호를 증폭시키고 다시 자극될 때 종양 탈출을 방지합니다. 거의 10년 동안 미국 프로비던스 암 센터에서 연구 , DRibble의 안전성은 Ⅰ/Ⅱ 임상 시험을 통해 완전히 검증되었습니다.

위의 연구 기반을 바탕으로 우리 프로젝트는 다음과 같은 연구를 수행하고자 합니다. 1. 새로운 DRibble 백신 접종 후 말기 NSCLC 환자의 치유 효과 및 전체 생존에 미치는 영향 및 기존 DC/CIK 치료 효능 비교, 2. 인간 폐암 세포에 대한 Dribble 백신 치료 효과의 메커니즘 추가 연구, 시스템 분석 및 임상 치료 효과 및 촉진 가치를 평가합니다.

연구 대상: 본 연구는 근치적 전립선 절제술을 받지 않은 ⅢA/ⅢB/Ⅳ기 비소세포폐암(전체 수의 약 60%), 2-6코스의 화학 요법을 받은 환자, 방사선 요법을 수용하거나 수용하지 않은 환자 및 질병 통제 단계. 선택된 환자는 무작위로 새로운 면역요법군과 기존의 DC/CIK 치료군으로 나뉘었다.

치료 일정: 이 동종이계 DRibble 백신 시험은 IIIA기 또는 B기 NSCLC의 치료를 위해 DC/CIK 또는 DC/CIK 단독과 통합됩니다. 두 팔이 연구됩니다. 30명의 환자가 1군과 2군으로 무작위 배정됩니다.

Arm1: DC/CIK를 사용한 DRibble 백신(실험군) Arm2: DC/CIK(대조군) 방법 및 절차

1. 병원 윤리위원회 승인.
2. 포함 기준 및 제외 기준에 따라 적절한 환자 모집.
3. 환자 동의서에 서명
4. DRibble 폐암 백신의 준비
5. 혈액 샘플 수집: 10ml 환자 말초 혈액 수집, 처리 전과 같이 별도의 PBMC 참조 표본.
6. 1일차: DRibble 주입 백신 하에서 사타구니 림프절 환자의 초음파 유도 DRibble 그룹, 주입하지 않은 대조군
7. Day8: 말초 혈액 50ml를 수집하고 단핵구와 림프구를 분리합니다.
8. 면역세포증폭강화(생물치료센터) : CD3 항체활성화를 이용하여 IL-2 살해세포에 대한 림프구 증식촉진; DC/CIK 그룹과 함께 드리블 장치에서 24시간.
9. 면역세포 동정(임상실험실, 생물치료센터) : 세포수, 세포활성도, 표면마커 등을 계수한다.
10. 면역세포 검출 미생물(임상실험실, 생물치료센터) : 박테리아, 마이코플라스마, 엔도톡신.
11. 20-22일: 면역 세포를 환자에게 되돌림: 생리 식염수 세척 세포, 정지 후 정맥 복귀, 치료 기간 내에서 여러 번.
12. 55일: 말초혈액 10ml를 채취하여 in vitro에서 DC로 유도된 PBMC를 분리한 후, 60일째에 DRibble과 피하주사로 공동배양한다.
13. 75일: 말초 혈액 10ml를 수집하고 PBMC를 분리하고 T 세포 면역 반응 능력을 검출합니다.

시스템 평가 Dribble의 치료 효과 및 촉진 가치: 1.치유 효과의 임상 평가: 무진행 생존 및 전체 생존의 실험군과 대조군을 비교하고, 생존 곡선을 그리고, 통계적으로 분석하였다. 2. DRibble 면역 반응 평가, 처음 채혈한 말초혈액과 처리한 말초혈액을 비교하고 추적 관찰한 검사에서 검출된 면역기능은 주로 하기 항목을 포함한다. 항원이 특정 면역 반응을 생성하는지 확인하기 위한 치료; 시험관 내에서 특정 T 세포를 배양하고 인식 실험을 수행하며 환자의 자가 종양(성공적으로 분리된 경우) 및 다중 구축된 변종 폐암 세포를 시험관 내에서 환자로부터 분리하여 실험 그룹에서 생성된 특정 T 세포가 많은 것을 인식할 수 있는지 확인합니다. 폐암 세포의 계통은 동종이계 DRibble 특정 T 세포가 다른 환자의 종양 세포에 반응할 수 있음을 의미합니다. 3. 안전성 평가지표 : 이상반응(발적, 부어오름, 통증, 피부발진, 가려움증 등 알레르기 반응), 혈액검사지표가 기준에 부합함(일상혈액, 간장기능, 전해질 등) 삶의 질(체중 및 BMI, 혈중 단백질 수치, 체력 등급, 심리, 정서적 평가 등)