Il trattamento del cancro del polmone avanzato con l'antigene gocciola mirando all'attivazione delle cellule T

Il tumore maligno è diventato la principale causa di morte negli esseri umani e il killer numero uno nel tumore maligno è il cancro ai polmoni. L'intensificazione dell'inquinamento ambientale deriva dall'aumento dell'incidenza del cancro ai polmoni e dall'elevata mortalità, qual è il peggio che il tasso di sopravvivenza a 5 anni è solo del 15% circa, rappresentando il primo posto nei tumori maligni, lo sfruttamento di nuove tecnologie e prodotti antitumorali arriva arrestare la crescente attenzione dei governi e delle imprese a causa dell'inefficace riduzione della minaccia del tumore alla vita e alla salute delle persone sui tre trattamenti convenzionali (chirurgia, radioterapia e chemioterapia). Il biologico e l'immunoterapia sono stati votati come uno dei dieci grandi progressi nel 2013 dalla rivista Science e considerati come una nuova direzione di sviluppo per il trattamento del cancro nel 21 ° secolo.

Il trattamento immunitario esistente comprende principalmente: l'immunoterapia adottiva, la terapia vaccinale antitumorale, la terapia anticorpale del checkpoint immunitario e altre terapie ausiliarie, e l'immunoterapia adottiva è stata studiata e sviluppata in precedenza, oltre al trattamento più maturo tra queste terapie. L'immunoterapia adottiva è stata effettuata in molte unità principalmente è l'immunoterapia autologa DC - CIK, che ha chiamato le cellule dendritiche (cellule dendritiche, DC) e le cellule killer indotte dalle citochine (Cytokine Induced Killer, CIK). Il principio di questa tecnologia è: separazione di monociti e linfociti di sangue periferico umano, poi potenziati e attivati ​​da una varietà di citochine in vitro (ad es. IFN - gamma, IL - 1, IL - 2, anti - CD3 mAb) in un linfocita misto con presentazione dell'antigene e funzione ad ampio spettro di uccidere le cellule tumorali. L'amplificazione DC-CIK attivata per via endovenosa torna ai pazienti, rilasciando sostanze attive come la perforina delle cellule CIK e l'enzima B del grano alle cellule tumorali dopo la combinazione con le cellule tumorali nel corpo, che dissolve le cellule tumorali. Nel frattempo la secrezione di una varietà di citochine, come IL - 2, IFN - gamma e TNF alfa, migliora la funzione immunitaria del corpo e conferisce il ruolo della funzione antitumorale.

Il rapporto della letteratura esistente e il nostro precedente studio nel centro di trattamento biologico hanno dimostrato che buona sicurezza, piccoli effetti collaterali e buona tolleranza per la stragrande maggioranza dei pazienti. Nell'effetto curativo, l'attuale rapporto rivela che la tecnologia DC-CIK ha un buon effetto curativo su leucemia, linfoma, cancro alle ovaie, cancro allo stomaco, ecc., Ad eccezione del cancro ai polmoni. Potrebbe a causa del complesso antigene tumorale del cancro ai polmoni o debole risposta delle cellule T tumorali specifiche. Come migliorare l'efficacia dell'antigene del cancro del polmone presentato e stimolare una risposta delle cellule T specifica del tumore più forte deve essere affrontato per migliorare l'effetto curativo dell'immunoterapia del cancro del polmone.

Negli ultimi anni la terapia con anticorpi del punto di controllo ha fatto un passo avanti nell'immunoterapia del tumore, tra cui CTLA-4, PD - 1 e PD - L1. numerosi studi clinici hanno rivelato che la terapia con anticorpi PD-1 e PD-L1 per il NSCLC avanzato, in particolare nel carcinoma polmonare squamoso, ha un buon effetto terapeutico e il tasso di risposta obiettiva della malattia raggiunge il 10-23%. La terapia DC/CIK autologa è stata ampiamente effettuata in ambito domestico e ha una buona sicurezza dimostrata da molte pratiche cliniche. Poiché la mancanza di antigene tumorale efficace, non ci sono grandi studi randomizzati in doppio cieco che confermano la sua funzione nell'estendere la sopravvivenza del paziente e prevenire finora la progressione del tumore. Alcuni ospedali hanno adottato la soluzione di lisi delle cellule tumorali o la tecnologia CIK unita di peptide proteico a singola molecola/DC, il che significa caricare la lisi delle cellule tumorali o il peptide proteico a singola molecola come antigene tumorale per unire DC con CIK indotto in vitro allo stesso tempo. Rispetto alla sola terapia CIK, la terapia unitaria può non solo danneggiare in modo non specifico il tumore, ma anche indurre il corpo a produrre una risposta immunitaria specifica del tumore. DC, che porta a un antigene efficace limitato presentato dalla DC al linfocita T. Inoltre, la proteina della longevità dell'antigene tumorale può esistere a lungo nella crescita naturale delle cellule tumorali e può essere riconosciuta dai pazienti per la propria organizzazione, quindi la tolleranza immunitaria inibisce la risposta immunitaria influenzando l'effetto di uccidere il tumore. Il polipeptide proteico a singola molecola induce solo una risposta immunitaria specifica a un singolo o pochi antigeni tumorali, non all'antigene tumorale mutato, con conseguente fuga del tumore. Abbiamo bisogno di sviluppare nuovi trattamenti cellulari perché la terapia DC/CIK autologa non può produrre una risposta immunitaria efficace, per fornire un nuovo candidato alternativo per unire la terapia anticorpale checkpoint in futuro.

Recentemente, il team del dottor Hu Hong-Ming ha presentato una strategia innovativa per il trattamento del cancro: l'utilizzo del ruolo dell'autofagia per catturare l'antigene tumorale per la preparazione del vaccino antitumorale. In questa strategia, l'attività bloccante del proteasoma delle cellule tumorali coltivate in vitro trattate con Bortezomib (inibitori del proteasoma) provoca l'arricchimento delle proteine ​​​​di breve durata (SLiP) e delle proteine ​​​​mal ripiegate (DRiP) nell'autofagosoma, chiamato corpuscolo DRibbles. Vaccino antitumorale prodotto dalla raccolta di questa preparazione di corpuscoli DRibbles come, noto anche come vaccino DRibble. I nostri primi studi hanno suggerito che i vaccini antitumorali DRibble sono più potenti del vaccino contro le cellule tumorali, perché l'intero vaccino contro le cellule tumorali non contiene breve- proteine ​​​​vissute che non possono essere presentate in modo incrociato alla DC in modo efficiente. Queste proteine ​​​​di breve durata evitano di essere degradate dal proteasoma nel vaccino DRibble e confezionate in vescicole autofagosomi con struttura a doppia membrana. Queste vescicole contengono molecole endogene di segnalazione del rischio (come HSP90, HMGB1, ecc.), in grado di innescare efficacemente la risposta immunitaria congenita. Pertanto, quando si co-coltiva con una volta il vaccino DRibble, DC può effettivamente assumere il vaccino DRibble e presentare l'antigene correlato al tumore sulla superficie DC, combinandosi con molecole MHC per attivare le cellule T, con conseguente risposta immunitaria. Rispetto al vaccino contro il cancro del polmone intero, i vaccini contro il cancro del polmone DRibble possono fornire una gamma più ampia di antigeni associati al tumore, fare in modo che il corpo non mantenga più la tolleranza per la mancanza di croce presentata, che può causare una forte risposta immunitaria. Il team del dottor Hu Hong Ming ha anche scoperto che il Dribble allogenico può indurre una risposta immunitaria altrettanto efficace rispetto al vaccino DRibble con cellule tumorali autologhe e alla regressione del tumore, il risultato è stato confermato in più modelli tumorali. A causa della mancanza delle classiche molecole MHC, le proteine ​​del vaccino DRibble possono essere rapidamente degradate dalle DC e il vaccino DRibble allogenico non indurrebbe effetti avversi a causa dell'induzione della risposta immunitaria dell'allotrapianto, rimanendo la sua sicurezza ed efficacia.

La superficie DRibble ha un gran numero di ligandi molecolari bersaglio di DC, si combinano direttamente con cellule xDC con CLEC9A ad alta espressione sulla superficie. Le cellule xDC possono attraversare in modo efficiente l'antigene presente in DC, quindi possono migliorare l'efficienza della presentazione dell'antigene DRibble. Inoltre, la risposta immunitaria indotta da DRibble ha una memoria immunitaria e identifica un'ampia varietà di antigeni specifici del tumore, amplificherà la riproduzione contro la rigenerazione delle cellule tumorali e preverrà la fuga del tumore quando stimolata di nuovo. Dai centri oncologici di Providence negli Stati Uniti per quasi 10 anni di ricerca , la sicurezza di DRibble è stata pienamente convalidata da Ⅰ/Ⅱ studi clinici.

Sulla base della suddetta base di ricerca, il nostro progetto intende svolgere le seguenti ricerche: 1. L'effetto curativo e l'influenza della sopravvivenza globale dei pazienti con NSCLC in stadio avanzato dopo aver ricevuto il nuovo vaccino DRibble e rispetto all'efficacia della terapia DC / CIK esistente, 2. Studiare ulteriormente il meccanismo degli effetti della terapia del vaccino Dribble sulle cellule tumorali del polmone umano, analisi del sistema e valutare l'effetto curativo clinico e il valore di promozione.

Obiettivi della ricerca: questo studio intende includere il carcinoma polmonare non a piccole cellule del periodo ⅢA/ⅢB/Ⅳ senza prostatectomia radicale (circa il 60% del numero totale), i pazienti che hanno ricevuto 2-6 cicli di chemioterapia, accettano o non accettano la radioterapia e fase di controllo della malattia. I pazienti selezionati sono stati divisi casualmente in una nuova immunoterapia e un gruppo di trattamento DC/CIK convenzionale.

Programma terapeutico: questo studio del vaccino allogenico DRibble si unisce a DC/CIK o DC/CIK da solo per il trattamento del NSCLC in stadio IIIA o B. Verranno studiati due bracci. 30 pazienti saranno randomizzati al braccio 1 e 2.

Arm1: vaccino DRibble con DC/CIK(Il gruppo sperimentale) Arm2: DC/CIK(Il gruppo di controllo) Metodi e procedure

1. Approvazione del comitato etico dell'ospedale.
2. Reclutare i pazienti appropriati in base ai criteri di inclusione e ai criteri di esclusione.
3. Firmare il consenso informato del paziente
4. La preparazione dei vaccini contro il cancro del polmone DRibble
5. Raccolta di campioni di sangue: raccolta di 10 ml di sangue periferico dei pazienti, PBMC separati come campioni di riferimento prima del trattamento.
6. Giorno 1: gruppo DRibble guidato dall'ecografia in pazienti con linfonodi inguinali sotto il vaccino dell'iniezione DRibble, il gruppo di controllo senza iniezioni
7. Day8: raccogliere 50 ml di sangue periferico e separare monociti e linfociti
8. Intensifica l'amplificazione delle cellule immunitarie (centro di trattamento biologico): utilizzando l'attivazione degli anticorpi CD3, IL - 2 promuove la proliferazione dei linfociti per le cellule di uccisione; GM-CSF induce la differenziazione delle cellule mononucleari per DC, gruppo di trattamento immunitario congiunto alla co-coltura del vaccino DRibble con cellule DC per 24h in unità Dribble con gruppo DC/CIK.
9. Identificazione delle cellule immunitarie (laboratorio clinico, centro di trattamento biologico): conteggio del numero di cellule, attività cellulare, marcatori di superficie.
10. Rilevazione delle cellule immunitarie microbiche (laboratorio clinico, centro di trattamento biologico): batteri, micoplasmi ed endotossine.
11. 20-22 giorni: ritorno delle cellule immunitarie ai pazienti: lavaggio fisiologico delle cellule con soluzione fisiologica, ritorno venoso dopo la sospensione, entro un periodo di trattamento di più volte.
12. 55 giorni: prelevare 10 ml di sangue periferico, dopo la separazione delle PBMC indotte in vitro a DC, cocoltivare con DRibble ed iniezione sottocutanea al 60° giorno.
13. Giorno 75: raccogliere 10 ml di sangue periferico, separare le PBMC e rilevare la capacità di risposta immunitaria delle cellule T.

Valutazione del sistema l'effetto terapeutico e il valore di promozione di Dribble: 1.La valutazione clinica dell'effetto curativo: confrontando il gruppo sperimentale e il gruppo di controllo della sopravvivenza libera da progressione e della sopravvivenza globale, disegnando la curva di sopravvivenza e analizzati statisticamente. 2. valutare la risposta immunitaria di DRibble, confrontando il sangue periferico raccolto per la prima volta con il sangue periferico trattato e la fase di follow-up, la funzione immunitaria rilevata dei test include principalmente di seguito: test in vitro livello di cellule T specifiche di DRibble nel sangue periferico prima e dopo il trattamento, al fine di chiarire la risposta immunitaria specifica prodotta dall'antigene; coltivando le cellule T specifiche in vitro, eseguendo l'esperimento di riconoscimento e il tumore autologo dei pazienti (se separato con successo) e le cellule tumorali del polmone multiple costruite isolate dai pazienti in vitro, al fine di chiarire le cellule T specifiche generate dal gruppo sperimentale potrebbero riconoscere molti ceppi di cellule tumorali del polmone, significa che le cellule T specifiche DRibble allogeniche possono rispondere a diverse cellule tumorali del paziente. 3. Indici di valutazione della sicurezza: reazione avversa (arrossamento e gonfiore, dolore, eruzioni cutanee, prurito, ecc. Reazioni allergiche); L'indice del test del sangue è conforme allo standard (sangue di routine, funzionalità epatica e renale, elettrolita, ecc.); La qualità della vita (peso e indice di massa corporea, livello di proteine ​​nel sangue, grado di forza fisica, valutazione psicologica, emotiva, ecc.).