Behandling av avansert lungekreft med dribblingsantigen ved å målrette aktivering av T-celler

Ondartet svulst har blitt den ledende dødsårsaken hos mennesker, og dødsfall nummer én i ondartet svulst er lungekreft. Økende miljøforurensning kommer med økende forekomst av lungekreft og høy dødelighet, hva er det verste at 5-års overlevelsesraten bare er rundt 15 %, og står for førsteplassen i de ondartede svulstene. Utnyttelse av ny antitumorteknologi og -produkter kommer å arrestere den økende oppmerksomheten fra regjeringer og bedrifter på grunn av den ueffektive demping av svulstrusselen mot folks liv og helse ved konvensjonelle tre behandlinger (kirurgi, strålebehandling og kjemoterapi). Biologisk og immunterapi ble kåret til et av de ti store gjennombruddet i 2013 av magasinet Science, og betraktet som en ny utviklingsretning for kreftbehandling i det 21. århundre.

Den eksisterende immunbehandlingen inkluderer hovedsakelig: adoptiv immunterapi, tumorvaksineterapi, immunkontrollpunkt-antistoffterapi og annen hjelpeterapi, og adoptiv immunterapi ble forsket på og utviklet tidligere i tillegg til den mest modne behandlingen blant disse terapiene. Adoptiv immunterapi har blitt utført i mange enheter, primært er den autologe DC - CIK immunterapi, som kalles dendritiske celler (Dendritiske celler, DC) og Cytokin Induced Killer celler (Cytokine Induced Killer, CIK) immunterapi. Prinsippet for denne teknologien er: separering av monocytter og lymfocytter av humant perifert blod, deretter ugmentert og aktivert av en rekke cytokiner in vitro (f.eks. IFN - gamma, IL - 1, IL - 2, anti - CD3 mAb) til en blandet lymfocytt med antigenpresenterende og bredspektret funksjon for å drepe tumorceller. Den forsterkende aktiverte DC-CIK intravenøs tilbake til pasienter, frigjøring av aktive stoffer som CIK-celler perforin og kornenzym B til tumorceller etter kombinert med tumorcellene i kroppen, som løser opp tumorcellene.I mellomtiden utskilles en rekke av cytokiner, som IL - 2, IFN - gamma og TNF alfa, forbedrer kroppens immunfunksjon, og gir rollen som antitumorfunksjon.

Eksisterende litteraturrapport og vår tidligere studie i biologisk behandlingssenter viste at god sikkerhet, små bivirkninger og god toleranse for de aller fleste pasienter. I kurativ effekt avslører den nåværende rapporten at DC-CIK-teknologi har en god helbredende effekt på leukemi, lymfom, eggstokkreft, magekreft, etc., bortsett fra lungekreft. Det kan på grunn av det komplekse lungekrefttumorantigenet, eller svakt tumorspesifikk T-cellerespons. Hvordan man kan forbedre effektiviteten til det presenterte lungekreftantigenet og stimulere sterkere tumorspesifikke T-cellerespons må tas opp for å forbedre den helbredende effekten av lungekreftimmunterapien.

De siste årene har sjekkpunktantistoffterapi et gjennombrudd innen tumorimmunterapi, inkludert CTLA-4, PD - 1 og PD - L1. en rekke kliniske studier avdekket terapi av PD - 1 og PD - L1 antistoff for avansert NSCLC, spesielt i lunge plateepitelkarsinom har god behandlingseffekt, og den objektive sykdomsresponsraten oppnår 10-23%. Autolog DC/CIK-terapi har blitt utført i stor utstrekning i hjemmet, og har en god sikkerhet bevist av mange kliniske praksiser. Siden mangelen på effektivt tumorantigen er det ingen store randomiserte, dobbeltblinde studier som bekrefter dens funksjon i å forlenge pasientens overlevelse og forhindret tumorprogresjon så langt. Noen sykehus tok i bruk tumorcellelyseløsningen eller enkeltmolekylproteinpeptid/DC united CIK-teknologi, som betyr å laste tumorcellelyse eller enkeltmolekylproteinpeptid som et tumorantigen til DC forenes med in vitro-indusert CIK på samme tid. til CIK-terapi alene kan enhetsterapien ikke bare skade svulsten uspesifikke, men også få kroppen til å produsere svulstspesifikk immunrespons. Imidlertid er de fleste av tumorantigenene i svulstcellelyset langtidsprotein som ikke effektivt kan tas opp av DC, som fører til begrenset effektivt antigen presentert av DC til T-lymfocytt. I tillegg kan tumorantigenets levetidsprotein eksistere i lang tid i den naturlige veksten av tumorceller, og kan gjenkjennes av pasientene for sin egen organisasjon, derfor hemmer immuntoleranse immunresponsen som påvirker effekten av å drepe tumor. Enkeltmolekylproteinpolypeptid induserer bare spesifikk immunrespons mot et enkelt eller noen få tumorantigen, ikke det muterte tumorantigenet, noe som resulterer i rømming av tumor. Vi må utvikle nye cellebehandlinger fordi autolog DC/CIK-terapi ikke kan produsere effektiv immunrespons, for å gi en ny aiternativ kandidat til å forene sjekkpunktantistoffterapi i fremtiden.

Nylig la Dr Hu Hong - Mings team frem en innovativ kreftbehandlingsstrategi: bruk av autofagi-rolle for å fange tumorantigen for fremstilling av tumorvaksine. I denne strategien forårsaker den blokkerende proteasomaktiviteten til in vitro-dyrkede tumorceller behandlet med Bortezomib (proteasomhemmere) anrikning av kortlivede proteiner (SLiPs) og feilfoldede proteiner (DRiPs) i autofagosomet, kalt DRibbles corpuscle. Tumorvaksine laget av innsamling av disse DRibbles-korpuskelpreparatene som også kjent som DRibble-vaksinen. Våre tidlige studier har antydet at DRibble-svulstvaksinene er kraftigere enn tumorcellevaksinen, fordi hele tumorcellevaksinen ikke inneholder lett nedbrytbare kort- levde proteiner som ikke kan krysspresenteres til DC effektivt. Disse kortlivede proteinene unngår å bli degradert av proteasomet i DRibble-vaksinen, og pakket inn i autofagosomvesikler med dobbel membranstruktur. Disse vesiklene inneholder endogene risikosignalmolekyler (som HSP90, HMGB1, etc.), kan effektivt utløse den medfødte immunresponsen. Derfor, når samkultur med én gang DRibble-vaksine, kan DC effektivt ta DRibble-vaksine og presentere tumorrelatert antigen til DC-overflaten, kombinere med MHC-molekyler for å aktivere T-celler, noe som resulterer i immunresponsen. Sammenlignet med hel lungekreftvaksine, kan DRibble lungekreftvaksiner gi et bredere spekter av tumorassosiert antigen, gjøre kroppen ikke lenger holde toleransen for mangel på kryss presentert, noe som kan forårsake sterk immunrespons. Dr Hu Hong Mings team har også funnet ut at allogen Dribble kan indusere like effektiv immunrespons sammenlignet med autologe tumorceller DRibble-vaksine og tumorregresjon, resultatet har blitt bekreftet i flere tumormodeller. På grunn av mangelen på klassiske MHC-molekyler, kan DRibble-vaksineproteiner raskt degraderes av DC, og allogen DRibble-vaksine vil ikke indusere uønskede effekter på grunn av induksjon av allograft-immunrespons, og forblir dens sikkerhet og effektivitet.

DRibble-overflaten har et stort antall målmolekylære ligander av DC, direkte kombineres med xDC-celler med høyt ekspresjon CLEC9A på overflaten. xDC-celler kan effektivt krysse presentert antigen til DC, og kan dermed forbedre effektiviteten til å presentere DRibble-antigen. Dessuten, immunrespons indusert av DRibble har immunminne og identifiserer et bredt utvalg av tumorspesifikke antigener, det vil forsterke palying mot tumorcelle-regenerering og forhindre tumorflukt når stimulert igjen. Av Providence kreftsentre i USA for nesten 10 års forskning , sikkerheten til DRibble er fullstendig validert av Ⅰ/Ⅱ kliniske studier.

Basert på ovennevnte forskningsgrunnlag, har vårt prosjekt til hensikt å utføre følgende forskning: 1. Den helbredende effekten og påvirkningen av den totale overlevelsen av NSCLC-pasienter i sent stadium etter å ha mottatt ny DRibble-vaksine, og sammenlignet med den eksisterende DC/CIK-terapieffekten, 2. Undersøk videre mekanismen for effekt av Dribble-vaksineterapi på humane lungekreftceller, systemanalyse og evaluere klinisk kurativ effekt og promoteringsverdi.

Forskningsobjekter: denne studien har til hensikt å inkludere ⅢA/ⅢB/Ⅳ periode ikke-småcellet lungekreft uten radikal prostatektomi (omtrent 60 % av det totale antallet), pasienter som mottok 2-6 kurer med kjemoterapi, aksepterer eller ikke aksepterer strålebehandling og sykdomskontrollstadiet. Utvalgte pasienter ble tilfeldig delt inn i ny immunterapi og konvensjonell DC/CIK-behandlingsgruppe.

Terapeutisk tidsplan: Denne utprøvingen av allogen DRibble-vaksine kombineres med DC/CIK eller DC/CIK alene for behandling av stadium IIIA eller B NSCLC. To armer vil bli studert. 30 pasienter vil bli randomisert til arm 1 og 2.

Arm1: DRible-vaksine med DC/CIK(eksperimentgruppen) Arm2: DC/CIK(Kontrollgruppen) Metoder og prosedyrer

1. Sykehusetisk komité godkjenning.
2. Rekruttere passende pasienter i henhold til inklusjonskriteriene og eksklusjonskriteriene.
3. Signer pasientens informerte samtykke
4. Utarbeidelse av DRibble lungekreftvaksiner
5. Innsamling av blodprøver: ta opp 10 ml perifert blod fra pasienter, separat PBMC som før behandlingsreferanseprøver.
6. Dag 1: DRibble-gruppe veiledet av ultralyd hos pasienter med lyskelymfeknuter under vaksinen til injeksjon DRibble, kontrollgruppen ingen injeksjoner
7. Dag 8: Samle 50 ml perifert blod og separer monocytter og lymfocytter
8. Intensivere amplifikasjon av immunceller (biologisk behandlingssenter): ved bruk av CD3-antistoffaktivering fremmer IL-2 lymfocyttproliferasjon for de drepende cellene; GM-CSF induserer mononukleære celledifferensiering for DC, felles immunbehandlingsgruppe for å DRible vaksinesamkultur med DC-celler for 24 timer i Dribble-enhet med DC/CIK-gruppe.
9. Identifikasjon av immuncelle (klinisk laboratorium, biologisk behandlingssenter): telling av celleantall, celleaktivitet, overflatemarkørene.
10. Påvisning av immunceller mikrobielle (klinisk laboratorium, biologisk behandlingssenter): bakterier, mykoplasma og endotoksin.
11. 20-22 dager: immunceller tilbake til pasienter: fysiologiske saltvannsvaskeceller, venøs retur etter suspensjon, innen en behandlingsperiode med flere ganger.
12. 55 dager: Samle 10 ml perifert blod, etter separasjon av PBMC in vitro indusert til DC, samdyrk med DRibble og subkutan injeksjon på 60. dag.
13. Dag 75: Samle 10 ml perifert blod, separer PBMC og påvis T-cellens immunresponsevne.

Systemevaluering den terapeutiske effekten og promoteringsverdien av Dribble: 1.Den kliniske evalueringen av kurativ effekt: sammenligner den eksperimentelle gruppen og kontrollgruppen av progresjonsfri overlevelse og total overlevelse, tegning av overlevelseskurve og statistisk analysert. 2. Evaluering av DRibble-immunrespons, sammenligning av første gang innsamlet perifert blod med det behandlede perifere blodet og oppfølgingsstadiet, immunfunksjon detektert ved testing hovedsakelig inkludert nedenfor: in vitro testnivå av DRibble-spesifikke T-celler i det perifere blodet før og etter behandlingen, for å klargjøre antigenet produsert spesifikk immunrespons; dyrking av de spesifikke T-cellene in vitro, gjennomføring av gjenkjennelseseksperiment og pasientens autologe svulst (hvis vellykket separert) og flere bygde stammer lungekreftceller isolert fra pasienter in vitro, for å tydeliggjøre de spesifikke T-cellene generert av eksperimentell gruppe kan gjenkjenne mange stammer av lungekreftceller betyr at allogene DRibble-spesifikke T-celler kan reagere på forskjellige pasients tumorceller. 3. Sikkerhetsevalueringsindekser: bivirkning (rødhet og hevelse, smerte, hudutslett, kløe, etc. Allergiske reaksjoner); Blodprøveindeksen er i samsvar med standarden (Rutinemessig blod-, lever- og nyrefunksjon, elektrolytt, etc); Livskvaliteten (vekt og BMI, blodproteinnivå, fysisk styrkegrad, psykologisk, emosjonell evaluering, etc).