De behandeling van geavanceerde longkanker met Dribbles-antigeen door activering van T-cellen te richten

Kwaadaardige tumoren zijn de belangrijkste doodsoorzaak bij mensen geworden, en de nummer één doodsoorzaak bij kwaadaardige tumoren is longkanker. Intensivering van de milieuvervuiling gaat gepaard met een toename van de incidentie van longkanker en de hoge mortaliteit, wat het ergste is dat het overlevingspercentage na 5 jaar slechts ongeveer 15% is, goed voor de eerste plaats in de kwaadaardige tumoren. Uitbuiting van nieuwe antitumortechnologie en -producten komt om de groeiende aandacht van de regeringen en het bedrijfsleven te stoppen vanwege het ondoeltreffend beteugelen van de bedreiging van tumoren voor het leven en de gezondheid van mensen met conventionele drie behandelingen (chirurgie, radiotherapie en chemotherapie). Biologische en immunotherapie werd in 2013 door het tijdschrift Science uitgeroepen tot een van de tien grote doorbraken en wordt beschouwd als een nieuwe ontwikkelingsrichting voor de behandeling van kanker in de 21e eeuw.

De bestaande immuunbehandeling omvat voornamelijk: adoptieve immuuntherapie, tumorvaccintherapie, immuuncheckpoint-antilichaamtherapie en andere aanvullende therapieën, en de adoptieve immunotherapie werd onderzocht en ontwikkeld als de meest volwassen behandeling onder deze therapieën. De adoptieve immunotherapie is in veel eenheden uitgevoerd, voornamelijk de autologe DC - CIK-immunotherapie, die de dendritische cellen (Dendritische cellen, DC) en Cytokine-geïnduceerde killer-cellen (Cytokine-geïnduceerde killer, CIK) immunotherapie wordt genoemd. Het principe van deze technologie is: het scheiden van monocyten en lymfocyten van menselijk perifeer bloed, vervolgens aangevuld en geactiveerd door een verscheidenheid aan cytokines in vitro (bijv. IFN - gamma, IL - 1, IL - 2, anti - CD3 mAb) tot een gemengde lymfocyt met antigeenpresentatie en breedspectrumfunctie voor het doden van tumorcellen. De versterkende geactiveerde DC-CIK intraveneus terug naar patiënten, waardoor actieve stoffen zoals CIK-cellen, perforine en graan-enzym B aan tumorcellen worden afgegeven na combinatie met de tumorcellen in het lichaam, die de tumorcellen oplost. Ondertussen de afscheiding van een variëteit van cytokines, zoals IL - 2, IFN - gamma en TNF alfa, verbetert de immuunfunctie van het lichaam en geeft de rol van antitumorfunctie.

Bestaand literatuurrapport en onze eerdere studie in biologisch behandelcentrum toonden aan dat goede veiligheid, kleine bijwerkingen en goede tolerantie voor de overgrote meerderheid van de patiënten. Uit het huidige rapport blijkt dat de DC-CIK-technologie een goed genezend effect heeft, voornamelijk op leukemie, lymfoom, eierstokkanker, maagkanker, enz., behalve longkanker. tumorspecifieke T-celrespons. Hoe de effectiviteit van het gepresenteerde longkankerantigeen kan worden verbeterd en een sterkere tumorspecifieke T-celrespons kan worden gestimuleerd, moet worden aangepakt om het curatieve effect van de longkankerimmunotherapie te verbeteren.

In de afgelopen jaren heeft checkpoint-antilichaamtherapie een doorbraak bereikt in tumorimmunotherapie, waaronder CTLA-4, PD-1 en PD-L1. een aantal klinische studies onthulden de therapie van PD - 1 en PD - L1 antilichaam voor gevorderde NSCLC, vooral bij longplaveiselcarcinoom heeft een goed behandelingseffect, en het objectieve responspercentage van de ziekte bereikt 10-23%. Autologe DC/CIK-therapie wordt op grote schaal toegepast in de huishouding en heeft een goede beveiliging die door veel klinische praktijken is bewezen. Aangezien het ontbreken van effectief tumorantigeen, is er geen grote gerandomiseerde, dubbelblinde studie die de functie ervan bevestigt bij het verlengen van de overleving van de patiënt en het voorkomen van tumorprogressie tot nu toe. Sommige ziekenhuizen gebruikten de tumorcellysis-oplossing of single-molecule protein peptide/DC united CIK-technologie, wat betekent dat tumorcellysis of single-molecule protein peptide tegelijkertijd als een tumorantigeen voor DC-eenheid met in vitro geïnduceerde CIK moet worden geladen. alleen voor CIK-therapie kan de eenheidstherapie niet alleen de tumor niet-specifiek beschadigen, maar ook het lichaam ertoe aanzetten een tumorspecifieke immuunrespons te produceren. De meeste tumorantigenen in de lysis van tumorcellen zijn echter langlevende eiwitten die niet effectief kunnen worden ingenomen door DC, leidend tot beperkt effectief antigeen gepresenteerd door DC aan T-lymfocyt. Bovendien kan het longevity-eiwit van het tumorantigeen lange tijd bestaan ​​​​in de natuurlijke groei van tumorcellen en kan het door de patiënten worden herkend voor zijn eigen organisatie, daarom remt immuuntolerantie de immuunrespons die het effect van het doden van de tumor beïnvloedt. Eiwitpolypeptide met een enkel molecuul wekt alleen een specifieke immuunrespons op tegen een enkel of enkele tumorantigenen, niet tegen het gemuteerde tumorantigenen, wat resulteert in ontsnapping van de tumor. We moeten nieuwe celbehandelingen ontwikkelen omdat autologe DC/CIK-therapie geen effectieve immuunrespons kan produceren, om een ​​nieuwe alternatieve kandidaat te bieden om in de toekomst checkpoint-antilichaamtherapie te verenigen.

Onlangs heeft het team van Dr. Hu Hong - Ming een innovatieve strategie voor de behandeling van kanker voorgesteld: het gebruik van autofagie om tumorantigeen op te vangen voor de bereiding van een tumorvaccin. In deze strategie veroorzaakt de blokkerende proteasoomactiviteit van in vitro gekweekte tumorcellen die zijn behandeld met Bortezomib (proteasoomremmers) verrijking van kortlevende eiwitten (SLiP's) en verkeerd gevouwen eiwitten (DRiP's) in autofagosoom, DRibbles-bloedlichaampje genoemd. Tumorvaccin gemaakt van het verzamelen van deze DRibbles-bloedlichaampjes, ook bekend als het DRibble-vaccin. Onze vroege studies hebben gesuggereerd dat de DRibble-tumorvaccins krachtiger zijn dan het tumorcelvaccin, omdat het hele tumorcelvaccin geen gemakkelijk afgebroken korte- levende eiwitten die niet efficiënt aan DC kunnen worden gepresenteerd. Deze kortlevende eiwitten voorkomen dat ze worden afgebroken door het proteasoom in het DRibble-vaccin en worden verpakt in autofagosoomblaasjes met een dubbele membraanstructuur. Deze blaasjes bevatten endogene risicosignaleringsmoleculen (zoals HSP90, HMGB1, enz.) en kunnen effectief de aangeboren immuunrespons activeren. Daarom kan DC, wanneer het samen met het DRibble-vaccin wordt gekweekt, het DRibble-vaccin effectief opnemen en tumorgerelateerd antigeen presenteren aan het DC-oppervlak, in combinatie met MHC-moleculen om T-cellen te activeren, wat resulteert in de immuunrespons. Vergeleken met het hele longkankervaccin, kunnen DRibble-longkankervaccins een breder scala aan tumor-geassocieerde antigeen bieden, waardoor het lichaam niet langer de tolerantie behoudt voor een gebrek aan kruispresentatie, wat een sterke immuunrespons kan veroorzaken. Het team van Dr. Hu Hong Ming heeft ook ontdekt dat allogene Dribble een even effectieve immuunrespons kan induceren als autologe tumorcellen met DRibble-vaccin en tumorregressie. Het resultaat is bevestigd in meerdere tumormodellen. Vanwege het ontbreken van klassieke MHC-moleculen, kunnen DRibble-vaccineiwitten snel worden afgebroken door DC, en het allogene DRibble-vaccin zou geen nadelige effecten veroorzaken vanwege de inductie van allograft-immuunrespons, waardoor de veiligheid en werkzaamheid behouden blijven.

DRibble-oppervlak heeft een groot aantal doelmoleculaire liganden van DC, direct gecombineerd met xDC-cellen met CLEC9A met hoge expressie op het oppervlak. xDC-cellen kunnen op efficiënte wijze presenterend antigeen naar DC kruisen, en kunnen dus de efficiëntie van het presenteren van DRibble-antigeen verbeteren. Trouwens, de immuunrespons die door DRibble wordt opgewekt, heeft een immuungeheugen en identificeert een breed scala aan tumorspecifieke antigeen, het zal de regeneratie van tumorcellen versterken en tumorontsnapping voorkomen wanneer het opnieuw wordt gestimuleerd. Door Providence kankercentra in de Verenigde Staten voor bijna 10 jaar onderzoek , is de veiligheid van de DRibble volledig gevalideerd door Ⅰ/Ⅱ klinische onderzoeken.

Op basis van de bovenstaande onderzoeksbasis wil ons project het volgende onderzoek uitvoeren: 1. Het curatieve effect en de invloed van de algehele overleving van NSCLC-patiënten in een laat stadium na ontvangst van een nieuw DRibble-vaccin, en vergeleken met de bestaande DC / CIK-therapie-effectiviteit, 2. Verder onderzoek naar het mechanisme van de effecten van Dribble-vaccintherapie op menselijke longkankercellen, systeemanalyse en evalueer het klinische genezende effect en de promotiewaarde.

Onderzoeksobjecten: deze studie is bedoeld om ⅢA/ⅢB/Ⅳ periode niet-kleincellige longkanker zonder radicale prostatectomie (ongeveer 60% van het totale aantal), patiënten die 2-6 kuren chemotherapie hebben ondergaan, wel of niet te accepteren bestralingstherapie en stadium van ziektebestrijding. Geselecteerde patiënten werden willekeurig verdeeld in nieuwe immunotherapie en conventionele DC/CIK-behandelingsgroep.

Therapeutisch schema: Deze proef met het allogene DRibble-vaccin wordt gecombineerd met alleen DC/CIK of DC/CIK voor de behandeling van stadium IIIA of B NSCLC. Er worden twee armen bestudeerd. 30 patiënten worden gerandomiseerd naar arm 1 en 2.

Arm1: DRibble-vaccin met DC/CIK (de experimentele groep) Arm2: DC/CIK (de controlegroep) Methoden en procedures

1. Goedkeuring ziekenhuisethiekcommissie.
2. Werven van de juiste patiënten volgens de inclusiecriteria en exclusiecriteria.
3. Onderteken de geïnformeerde toestemming van de patiënt
4. De bereiding van DRibble-longkankervaccins
5. Verzameling van bloedmonsters: verzamel perifeer bloed van 10 ml patiënten, scheid PBMC zoals vóór behandelingsreferentiemonsters.
6. Dag 1: Dribble-groep begeleid door echografie bij patiënten met lieslymfeklieren onder het vaccin van DRibble injecteren, de controlegroep geen injecties
7. Dag 8: verzamel 50 ml perifeer bloed en scheid monocyten en lymfocyten
8. Versterking van de amplificatie van immuuncellen (biologisch behandelingscentrum): met behulp van activering van CD3-antilichamen bevordert IL - 2 de proliferatie van lymfocyten voor de dodende cellen; GM-CSF induceert differentiatie van mononucleaire cellen voor DC, gezamenlijke immuunbehandelingsgroep voor DRibble-vaccin co-cultuur met DC-cellen voor 24u in Dribble unit met DC/CIK groep.
9. Identificatie van de immuuncel (klinisch laboratorium, biologisch behandelingscentrum): aantal cellen tellen, celactiviteit, de oppervlaktemarkers.
10. Detectie van microbiële immuuncellen (klinisch laboratorium, biologisch behandelingscentrum): bacteriën, mycoplasma en endotoxine.
11. 20-22 dagen: immuuncellen terug naar patiënten: fysiologische zoutoplossing wascellen, veneuze terugkeer na suspensie, binnen een periode van behandeling door meerdere keren.
12. 55 dagen: verzamel 10 ml perifeer bloed, na de scheiding van PBMC in vitro geïnduceerd tot DC, cocultiveer met DRibble en subcutane injectie op de 60e dag.
13. Dag 75: verzamel 10 ml perifeer bloed, scheid PBMC en detecteer T-cel immuunresponsvermogen.

Systeemevaluatie het therapeutische effect en de promotiewaarde van Dribble: 1.De klinische evaluatie van het curatieve effect: vergelijking van de experimentele groep en de controlegroep van progressievrije overleving en algehele overleving, overlevingscurve tekenen en statistisch analyseren. 2. Evaluatie van de immuunrespons van DRibble, waarbij de eerste keer dat perifeer bloed wordt afgenomen wordt vergeleken met het behandelde perifere bloed en de follow-upfase, gedetecteerde immuunfunctie van testen, voornamelijk hieronder opgenomen: in vitro testniveau van DRibble-specifieke T-cellen in het perifere bloed voor en na de behandeling, om duidelijk te maken dat het antigeen een specifieke immuunrespons veroorzaakte; de specifieke T-cellen in vitro kweken, herkenningsexperiment uitvoeren en patiënten autologe tumor (indien succesvol gescheiden) en meerdere opgebouwde stammen longkankercellen geïsoleerd van patiënten in vitro, om duidelijk te maken dat de specifieke T-cellen gegenereerd door de experimentele groep veel konden herkennen stammen van longkankercellen, betekent dat allogene DRibble-specifieke T-cellen kunnen reageren op tumorcellen van verschillende patiënten. 3. Veiligheidsevaluatie-indexen: bijwerking (roodheid en zwelling, pijn, huiduitslag, jeuk, enz. Allergische reacties); De bloedtestindex is in overeenstemming met de norm (routinematig bloed, lever- en nierfunctie, elektrolyt, enz.); De kwaliteit van leven (gewicht en BMI, eiwitgehalte in het bloed, fysieke krachtgraad, psychologische, emotionele evaluatie, enz.).