T細胞の活性化を標的としたDribbles抗原による進行性肺癌の治療

悪性腫瘍はヒトの主な死因となっており、悪性腫瘍の最大の死因は肺がんです。 環境汚染の激化は、肺がんの発生率の上昇と高い死亡率をもたらし、最悪の場合、5 年生存率はわずか 15% 程度であり、悪性腫瘍の第 1 位を占めています。従来の 3 つの治療法 (手術、放射線療法、化学療法) では、人々の生命と健康に対する腫瘍の脅威を効果的に抑制していないため、政府や企業の注目を集める必要があります。 生物学的および免疫療法は、2013 年に Science 誌によって 10 の大きなブレークスルーの 1 つに選ばれ、21 世紀のがん治療の新しい開発方向と見なされました。

既存の免疫治療には主に養子免疫療法、腫瘍ワクチン療法、免疫チェックポイント抗体療法などの補助療法があり、養子免疫療法はこれらの治療法の中で最も成熟した治療法として研究開発されてきました。 養子免疫療法は多くのユニットで実施されてきましたが、主に自家 DC - CIK 免疫療法であり、樹状細胞 (Dendritic cells, DC) およびサイトカイン誘導キラー細胞 (Cytokine Induced Killer, CIK) 免疫療法と呼ばれています。 この技術の原理は、ヒト末梢血の単球とリンパ球を分離し、in vitro でさまざまなサイトカイン (IFN - ガンマ、IL - 1、IL - 2、抗 CD3 mAb など) によって増強および活性化することです。抗原提示および腫瘍細胞を殺す広範囲の機能を持つ混合リンパ球。 増幅された活性化DC-CIKは患者に静脈内投与され、体内の腫瘍細胞と結合した後、CIK細胞のパーフォリンや粒子酵素Bなどの活性物質が腫瘍細胞に放出され、腫瘍細胞が溶解します。 IL - 2、IFN - ガンマ、TNF アルファなどのサイトカインは、体の免疫機能を改善し、抗腫瘍機能の役割を果たします。

既存の文献報告と生物学的治療センターでの以前の研究では、大多数の患者にとって安全性が高く、副作用が少なく、耐性が良好であることが示されました. 治癒効果において、現在の報告は、DC-CIK 技術が白血病、リンパ腫、卵巣癌、胃癌などに対して良好な治療効果を有することを明らかにしていますが、肺癌を除きます。腫瘍特異的T細胞応答。 提示された肺癌抗原の有効性を改善し、より強い腫瘍特異的 T 細胞応答を刺激する方法は、肺癌免疫療法の治癒効果を改善する上で取り組む必要があります。

CTLA-4、PD-1、PD-L1をはじめとする近年、チェックポイント抗体療法が腫瘍免疫療法にブレークスルーをもたらしています。多くの臨床研究により、進行性NSCLC、特に肺扁平上皮癌に対するPD-1およびPD-L1抗体の治療は良好な治療効果があり、疾患の客観的奏効率は10-23%に達することが明らかになりました。 自家 DC/CIK 療法は国内で広く実施されており、多くの臨床実践によって証明された優れた安全性があります。これまでのところ、腫瘍の進行を防ぎます。 一部の病院では、腫瘍細胞溶解液または単一分子タンパク質ペプチド/DC 結合 CIK 技術を採用しています。これは、腫瘍細胞溶解液または単一分子タンパク質ペプチドを腫瘍抗原として DC にロードし、in vitro 誘導 CIK と同時に結合することを意味します。 CIK 療法単独では、ユニット療法は非特異的に腫瘍に損傷を与えるだけでなく、体に腫瘍特異的免疫応答を生成するように誘導することもできます。しかし、腫瘍細胞溶解に含まれる腫瘍抗原のほとんどは、効果的に摂取することができない長寿タンパク質です。 DCは、DCによってTリンパ球に提示される限定された有効な抗原につながります。 さらに、腫瘍抗原長寿タンパク質は、腫瘍細胞の自然な成長に長期間存在することができ、患者がそれ自体の組織を認識することができるため、免疫寛容は腫瘍を殺す効果に影響を与える免疫応答を阻害します。 単一分子タンパク質ポリペプチドは、突然変異した腫瘍抗原ではなく、単一または少数の腫瘍抗原に対して特異的な免疫応答のみを誘導し、腫瘍の回避をもたらす。 自己 DC/CIK 療法は有効な免疫応答を生み出すことができないため、将来的にチェックポイント抗体療法を統合するための新しい代替候補を提供するために、新しい細胞治療を開発する必要があります。

最近、Hu Hong-Ming 博士のチームは革新的な癌治療戦略を提唱しました。それは、オートファジーの役割を利用して腫瘍抗原を捕捉し、腫瘍ワクチンを調製することです。 この戦略では、ボルテゾミブ (プロテアソーム阻害剤) を処理した in vitro 培養腫瘍細胞のプロテアソーム活性をブロックすることで、DRibbles 小体と呼ばれるオートファゴソームで短命タンパク質 (SLiP) とミスフォールドタンパク質 (DRiP) が濃縮されます。 DRibble ワクチンとしても知られている、これらの DRibbles 小体製剤を集めて作られた腫瘍ワクチンです。私たちの初期の研究では、DRibble 腫瘍ワクチンは腫瘍細胞ワクチンよりも強力であることが示唆されました。 DCに効率的に交差提示できない生きたタンパク質。 これらの短命のタンパク質は、DRibble ワクチンのプロテアソームによる分解を回避し、二重膜構造を持つオートファゴソーム小胞にパッケージ化されます。 これらの小胞には、内因性のリスクシグナル伝達分子 (HSP90、HMGB1 など) が含まれており、先天性免疫応答を効果的に引き起こすことができます。 したがって、1 回の DRibble ワクチンと共培養すると、DC は DRibble ワクチンを効果的に取り込み、腫瘍関連抗原を DC 表面に提示し、MHC 分子と結合して T 細胞を活性化し、免疫応答をもたらします。 全肺がんワクチンと比較して、DRibble 肺がんワクチンは、より広い範囲の腫瘍関連抗原を提供でき、体が交差提示の欠如に対する耐性を維持できなくなり、強い免疫応答を引き起こす可能性があります。 Hu Hong Ming 博士のチームは、同種 Dribble が、自家腫瘍細胞の DRibble ワクチンおよび腫瘍退縮と比較して、同等に効果的な免疫応答を誘導できることも発見しました。この結果は、複数の腫瘍モデルで確認されています。 古典的なMHC分子がないため、DRibbleワクチンタンパク質はDCによって急速に分解される可能性があり、同種DRibbleワクチンは同種移植片免疫応答の誘導による悪影響を誘発せず、安全性と有効性が残ります.

DRibble 表面には多数の DC の標的分子リガンドがあり、表面に高発現の CLEC9A を持つ xDC 細胞と直接結合します。 ｘＤＣ細胞は、提示抗原をＤＣに効率的に交差させることができるため、ＤＲｉｂｂｌｅ抗原の提示効率を改善することができる。 さらに、DRibble によって誘導される免疫応答は、免疫記憶を持ち、さまざまな腫瘍特異抗原を識別し、腫瘍細胞の再生を増幅し、再び刺激されたときに腫瘍の逃避を防ぎます。 DRibble の安全性は、I/II 臨床試験によって十分に検証されています。

以上の研究基盤に基づき、本プロジェクトでは以下の研究を行うことを目的とする。 新しい DRibble ワクチンを接種した後の後期 NSCLC 患者の治癒効果と全生存率の影響を、既存の DC/CIK 療法の有効性と比較し、 2. ヒト肺癌細胞に対する Dribble ワクチン療法の効果のメカニズムをさらに研究し、システム分析を行い、臨床治療効果と促進価値を評価します。

研究対象：この研究は、根治的前立腺切除術を伴わないⅢA/ⅢB/Ⅳ期非小細胞肺癌（全数の約60％）、2～6コースの化学療法を受けた患者、放射線療法を受け入れるか受け入れない患者、および疾病管理段階。 選択された患者は、新しい免疫療法群と従来の DC/CIK 治療群に無作為に分けられました。

治療スケジュール: 同種DRibbleワクチンのこの試験は、ステージIIIAまたはBのNSCLCの治療のために、DC/CIKまたはDC/CIK単独と結合します。 2つの腕が研究されます。 30 人の患者がアーム 1 と 2 に無作為に割り付けられます。

Arm1: DC/CIKによるDRibbleワクチン(実験群) Arm2: DC/CIK(対照群) 方法と手順

1. 病院倫理委員会の承認。
2. 選択基準と除外基準に従って、適切な患者を再募集します。
3. 患者のインフォームドコンセントに署名する
4. DRibble 肺癌ワクチンの調製
5. 血液サンプルの収集: 10ml の患者の末梢血を収集し、治療前と同様に PBMC を分離します。
6. 1日目:DRibble注射のワクチン接種下の鼠径リンパ節を有する患者における超音波誘導によるDRibble群、対照群は注射なし
7. Day8: 末梢血 50 ml を採取し、単球とリンパ球を分離する
8. 免疫細胞増幅の強化 (生物学的治療センター) : CD3 抗体の活性化を使用して、IL - 2 は細胞を殺すためにリンパ球の増殖を促進します; GM-CSF は DC の単核細胞分化を誘導し、DRibble ワクチンへの共同免疫治療グループは DC 細胞と共培養しますDC/CIKグループのドリブルユニットで24時間。
9. 免疫細胞の同定 (臨床検査室、生物治療センター) : 細胞数、細胞活性、表面マーカーのカウント。
10. 免疫細胞微生物の検出 (臨床検査室、生物治療センター) : バクテリア、マイコプラズマ、エンドトキシン。
11. 20-22 日: 免疫細胞を患者に戻す: 細胞を生理食塩水で洗浄し、懸濁後に静脈を戻し、治療期間内に数回。
12. 55 日: 10 ml の末梢血を採取し、in vitro で DC に誘導された PBMC を分離した後、DRibble と共培養し、60 日目に皮下注射します。
13. ７５日目：１０ｍｌの末梢血を採取し、ＰＢＭＣを分離し、Ｔ細胞免疫応答能力を検出する。

ドリブルの治療効果と促進値のシステム評価： 1.治療効果の臨床評価：実験群と対照群の無増悪生存率と全生存率を比較し、生存曲線を描き、統計的に分析する。 2. DRibble 免疫応答を評価し、初回に採取した末梢血を処理した末梢血と比較し、フォローアップ段階で、主に以下に含まれる検査で検出された免疫機能: 前後の末梢血中の DRibble 特異的 T 細胞のインビトロ検査レベル抗原が特定の免疫応答を生成したことを明らかにするための治療。特定の T 細胞を in vitro で培養し、認識実験を行い、患者の自家腫瘍 (分離に成功した場合) および in vitro で患者から分離された複数の構築された肺癌細胞株を、実験群によって生成された特定の T 細胞が多くを認識できることを明らかにするために、肺癌細胞株は、同種DRibble特異的T細胞が異なる患者の腫瘍細胞に応答できることを意味します。 3.安全性評価指標：副作用（赤み・腫れ・痛み・かぶれ・かゆみ等・アレルギー反応）；血液検査指標は基準値（日常の血液、肝腎機能、電解質等）に準じます。生活の質（体重とBMI、血中タンパク質レベル、体力グレード、心理的、感情的評価など）。