Az előrehaladott tüdőrák kezelése csöpögött antigénnel a T-sejtek aktiválásának megcélzásával

A rosszindulatú daganatok váltak a vezető halálokokká az emberekben, és a rosszindulatú daganatok első számú gyilkosa a tüdőrák. A környezetszennyezés fokozódása a tüdőrák előfordulásának növekedésével és a magas halálozással jár, ami a legrosszabb, hogy az 5 éves túlélési arány mindössze 15%, ami az első helyet foglalja el a rosszindulatú daganatok között. a kormányok és a vállalkozások növekvő figyelmének megfékezése az emberek életét és egészségét fenyegető daganatos veszélyek hatástalan megfékezése miatt a hagyományos három kezeléssel (sebészet, sugárterápia és kemoterápia). A biológiai és immunterápiát 2013-ban a Science magazin a tíz nagy áttörés egyikének választotta, és a rákkezelés új fejlesztési irányának tekintette a 21. században.

A meglévő immunterápia főként az örökbefogadó immunterápiát, a tumorvakcinás terápiát, az immunkontroll-ellenanyag terápiát és egyéb kiegészítő terápiákat foglalja magában, valamint az adoptív immunterápia kutatása és fejlesztése a terápiák közül a legkiforrottabb kezelésként történt. Az adoptív immunterápia számos egységben történt, elsősorban az autológ DC - CIK immunterápia, amelyet dendritikus sejtek (Dendritic sejtek, DC) és citokin indukált gyilkos sejtek (Cytokin Induced Killer, CIK) immunterápiának neveztek. Ennek a technológiának az alapelve: a humán perifériás vér monocitáinak és limfocitáinak szétválasztása, majd in vitro különféle citokinekkel (pl. IFN-gamma, IL-1, IL-2, anti-CD3 mAb) ugmentálódik és aktiválódik. vegyes limfocita antigénprezentáló és széles spektrumú daganatsejtek elpusztító funkciójával. Az amplifikáló aktivált DC-CIK intravénásan visszajuttatja a betegeket, hatóanyagokat, például CIK sejteket perforint, gabona B-t szabadít fel a daganatsejtekbe, miután a szervezetben lévő daganatos sejtekkel egyesül, ami feloldja a daganatos sejteket. A citokinek, mint az IL-2, az IFN-gamma és a TNF-alfa, javítja a szervezet immunműködését, és a daganatellenes funkció szerepét adja.

A meglévő szakirodalmi jelentés és a biológiai kezelőközpontban végzett korábbi tanulmányunk azt mutatta, hogy a betegek túlnyomó többsége számára jó biztonság, csekély mellékhatások és jó tolerancia. A jelenlegi jelentés szerint a DC-CIK technológiának jó gyógyító hatása van leukémiára, limfómára, petefészekrákra, gyomorrákra stb., kivéve a tüdőrákot. Lehet, hogy a tüdőrák összetett antigénje miatt, vagy gyenge. tumorspecifikus T-sejtes válasz. A tüdőrák immunterápia gyógyító hatásának javítása során foglalkozni kell a bemutatott tüdőrák-antigén hatékonyságának javításával és az erősebb tumorspecifikus T-sejtes válasz stimulálásával.

Az elmúlt években az ellenőrzőpontos antitestterápia áttörést ért el a tumorimmunterápiában, beleértve a CTLA-4-et, a PD-1-et és a PD-L1-et. számos klinikai vizsgálat kimutatta, hogy a PD - 1 és PD - L1 antitest terápiája előrehaladott NSCLC esetén, különösen tüdőlaphámrák esetén jó kezelési hatású, és a betegség objektív válaszaránya eléri a 10-23%-ot. Az autológ DC/CIK terápiát széles körben alkalmazzák a hazai környezetben, és számos klinikai gyakorlat igazolja a biztonságot. A hatékony tumorantigén hiánya miatt nincs nagy randomizált, kettős vak vizsgálat, amely megerősítené a betegek túlélési és túlélési idejének meghosszabbításában betöltött szerepét. a daganat progressziójának eddigi megakadályozása. Egyes kórházak a tumorsejt-lízis oldatot vagy az egymolekulájú fehérjepeptid/DC egyesített CIK technológiát alkalmazták, ami azt jelenti, hogy a tumorsejt-lízist vagy az egymolekulás fehérjepeptidet tumorantigénként a DC-vel egyidejűleg egyesítik az in vitro indukált CIK-kel. A CIK-terápia önmagában az egységterápia nemcsak nem specifikusan károsítja a daganatot, hanem arra is készteti a szervezetet, hogy daganatspecifikus immunválaszt termeljen. A tumorsejtek lízisében található tumorantigének többsége azonban hosszú életű fehérje, amelyet nem lehet hatékonyan bevinni DC, ami korlátozott hatékony antigénhez vezet, amelyet a DC a T-limfocitáknak mutat be. Ezen túlmenően a tumorantigén longevity protein hosszú ideig létezhet a tumorsejtek természetes növekedésében, és a páciensek saját szerveződéséről ismerhetik fel, ezért az immuntolerancia gátolja a daganatpusztító hatást befolyásoló immunválaszt. Az egymolekulájú fehérjepolipeptid csak egyetlen vagy néhány tumorantigénre indukál specifikus immunválaszt, nem a mutált tumorantigénre, ami a daganat kiszökését eredményezi. Új sejtkezeléseket kell kidolgoznunk, mivel az autológ DC/CIK terápia nem tud hatékony immunválaszt kiváltani, új alternatív jelöltet biztosítunk az ellenőrzőpontos antitestterápia egyesítésére a jövőben.

Dr. Hu Hong-Ming csapata a közelmúltban egy innovatív rákkezelési stratégiát terjesztett elő: az autofágia szerepének felhasználását a tumorantigén rögzítésére tumorvakcina elkészítéséhez. Ebben a stratégiában a bortezomibbal (proteaszóma inhibitorok) kezelt in vitro tenyésztett tumorsejtek blokkoló proteaszóma aktivitása a rövid élettartamú fehérjék (SLiP-ek) és a hibásan hajtogatott fehérjék (DRiP-ek) feldúsulását okozza az autofagoszómában, az úgynevezett DRibbles-test. Ezeknek a DRibble sejttestkészítményeknek a gyűjtésével készült tumorvakcina, más néven DRibble vakcina. Korai tanulmányaink azt sugallták, hogy a DRibble tumorvakcinák erősebbek, mint a tumorsejt-vakcinák, mivel a teljes tumorsejt-vakcina nem tartalmaz könnyen lebomló rövid- élő fehérjék, amelyeket nem lehet hatékonyan DC-vel prezentálni. Ezek a rövid életű fehérjék elkerülik, hogy a DRibble vakcinában lévő proteaszóma lebontsák őket, és kettős membránszerkezetű autofagoszóma vezikulákba csomagolják őket. Ezek a vezikulák endogén kockázatjelző molekulákat tartalmaznak (például HSP90, HMGB1 stb.), amelyek hatékonyan kiválthatják a veleszületett immunválaszt. Ezért, amikor az egyszeri DRibble vakcinával együtt tenyésztjük, a DC hatékonyan képes bevinni a DRibble vakcinát, és tumorral kapcsolatos antigént prezentálni a DC felületére, kombinálva az MHC molekulákkal a T-sejtek aktiválásához, ami immunválaszt eredményez. Összehasonlítva a teljes tüdőrák elleni vakcinával, a DRibble tüdőrák elleni védőoltások a daganathoz kapcsolódó antigén szélesebb skáláját biztosítják, így a szervezet nem tartja meg a toleranciát a keresztezés hiányára, ami erős immunválaszt válthat ki. Dr. Hu Hong Ming csapata azt is megállapította, hogy az allogén Dribble ugyanolyan hatékony immunválaszt válthat ki, mint az autológ tumorsejtek DRibble vakcinája és a tumor regressziója, az eredményt több tumormodell is megerősítette. A klasszikus MHC-molekulák hiánya miatt a DRibble-vakcina fehérjéket DC gyorsan lebonthatja, és az allogén DRibble vakcina nem vált ki káros hatásokat az allograft immunválasz kiváltása miatt, a biztonság és a hatékonyság fennmaradása mellett.

A DRibble felületén nagyszámú DC célmolekuláris liganduma van, amelyek közvetlenül kapcsolódnak xDC sejtekhez, amelyek felületén magas a CLEC9A expressziója. Az xDC sejtek hatékonyan keresztezhetik a prezentáló antigént a DC-vel, így javíthatják a DRibble antigén bemutatásának hatékonyságát. Emellett a DRibble által kiváltott immunválasz immunmemóriával rendelkezik, és a tumorspecifikus antigének széles skáláját azonosítja, felerősíti a tumorsejtek regenerálódását, és megakadályozza a tumor kiszabadulását, ha ismét stimulálják. A Providence rákkutató központok az Egyesült Államokban közel 10 éves kutatása során , a DRibble biztonságosságát Ⅰ/Ⅱ klinikai vizsgálatok teljes mértékben igazolták.

A fenti kutatási alapok alapján projektünk az alábbi kutatásokat kívánja végezni: 1. Az új DRibble vakcina beadása után a késői stádiumú NSCLC betegek gyógyító hatása és általános túlélése, valamint a meglévő DC/CIK terápia hatékonyságával összehasonlítva, 2. A Dribble vakcina terápiás hatásainak mechanizmusának további tanulmányozása humán tüdőráksejteken, rendszerelemzés, valamint a klinikai gyógyító hatás és promóciós érték értékelése.

Kutatási célok: a vizsgálat célja a ⅢA/ⅢB/Ⅳ periódusú nem-kissejtes tüdőrák radikális prosztatektómia nélkül (az összlétszám kb. 60%-a), olyan betegek, akik 2-6 kemoterápiás kúrát kaptak, elfogadják vagy nem fogadják el a sugárkezelést és betegségkontroll szakasz. A kiválasztott betegeket véletlenszerűen új immunterápiás és hagyományos DC/CIK kezelési csoportokra osztották.

Terápiás ütemezés: A IIIA vagy B stádiumú NSCLC kezelésére az allogén DRibble vakcina ezen kísérlete DC/CIK-kel vagy DC/CIK-kel önmagában kombinálódik. Két kart vizsgálnak meg. 30 beteget randomizálnak az 1. és 2. karba.

1. kar: DRibble vakcina DC/CIK-vel (a kísérleti csoport) 2. kar: DC/CIK (a kontrollcsoport) Módszerek és eljárások

1. Kórházi etikai bizottság jóváhagyása.
2. A megfelelő betegek toborzása a felvételi és kizárási kritériumok szerint.
3. Írja alá a betegek tájékoztatáson alapuló beleegyezését
4. A DRibble tüdőrák elleni vakcinák elkészítése
5. Vérminták gyűjtése: 10 ml páciens perifériás véréből, külön PBMC-ből, mint a kezelés előtti referenciamintákból.
6. 1. nap: DRibble csoport ultrahanggal vezérelve lágyéki nyirokcsomókkal rendelkező betegeknél a DRibble injekciós vakcina alatt, a kontrollcsoport nem kapott injekciót
7. 8. nap: vegyünk 50 ml perifériás vért, és válasszuk el a monocitákat és a limfocitákat
8. Az immunsejtek amplifikációjának fokozása (biológiai kezelőközpont): a CD3 antitestek aktiválásával az IL-2 elősegíti a limfociták szaporodását az elpusztító sejtek számára; A GM-CSF mononukleáris sejtek differenciálódását indukálja DC-hez, közös immunkezelő csoport DRibble vakcina DC sejtekkel való együtttenyésztéséhez 24 óra Dribble egységben DC/CIK csoporttal.
9. Az immunsejt azonosítása (klinikai laboratórium, biológiai kezelőközpont): sejtszám, sejtaktivitás, felszíni markerek számlálása.
10. Immunsejtek mikrobiális kimutatása (klinikai laboratórium, biológiai kezelőközpont): baktériumok, mikoplazma és endotoxin.
11. 20-22 nap: immunsejtek vissza a betegekhez: fiziológiás sóoldatmosó sejtek, szuszpenzió után vénás visszaáramlás, kezelési időn belül többször.
12. 55 nap: 10 ml perifériás vért gyűjtünk, a DC-re indukált PBMC in vitro elválasztása után, DRibble-lel és szubkután injekcióval együtt tenyésztjük a 60. napon.
13. 75. nap: vegyünk 10 ml perifériás vért, különítsük el a PBMC-t és detektáljuk a T-sejtes immunválasz képességét.

A Dribble terápiás hatásának és promóciós értékének rendszerértékelése: 1. A gyógyító hatás klinikai értékelése: a progressziómentes túlélés és a teljes túlélés kísérleti és kontrollcsoportjának összehasonlítása, túlélési görbe rajzolása, statisztikai elemzés. 2. a DRibble immunválasz értékelése, az első alkalommal vett perifériás vér összehasonlítása a kezelt perifériás vérrel és a követési stádium, a vizsgálatok során kimutatott immunfunkció, amely főként az alábbiakat tartalmazza: DRibble-specifikus T-sejtek in vitro tesztelése a perifériás vérben előtte és utána a kezelés az antigén által termelt specifikus immunválasz egyértelművé tétele érdekében; a specifikus T-sejtek in vitro tenyésztése, felismerési kísérlet elvégzése és a betegek autológ daganata (ha sikeresen elválasztva) és több törzsből származó tüdőráksejtek in vitro izolálása, annak érdekében, hogy egyértelművé tegyük a kísérleti csoport által generált specifikus T-sejteket tüdőrák sejttörzsek, azt jelenti, hogy az allogén DRibble-specifikus T-sejtek képesek reagálni a különböző páciens tumorsejtjeire. 3. Biztonsági értékelési indexek: mellékhatás (pír és duzzanat, fájdalom, bőrkiütések, viszketés stb. Allergiás reakciók); A vérvizsgálati index megfelel a szabványnak (Rutin vér, máj- és vesefunkció, elektrolit stb.); Az életminőség (súly és BMI, vérfehérje szint, fizikai erőfokozat, pszichológiai, érzelmi értékelés stb.).