Die Behandlung von fortgeschrittenem Lungenkrebs mit Dribbles-Antigen durch gezielte Aktivierung von T-Zellen

Bösartiger Tumor ist zur Haupttodesursache beim Menschen geworden, und die Todesursache Nummer eins bei bösartigen Tumoren ist Lungenkrebs. Die zunehmende Umweltverschmutzung geht mit einem Anstieg des Auftretens von Lungenkrebs und der hohen Sterblichkeit einher, was das Schlimmste ist, dass die 5-Jahres-Überlebensrate nur etwa 15% beträgt, was den ersten Platz bei den bösartigen Tumoren ausmacht, die für neuartige Antitumor-Technologien und -Produkte genutzt werden die wachsende Aufmerksamkeit der Regierungen und Unternehmen wegen der unwirksamen Eindämmung der Tumorbedrohung für das Leben und die Gesundheit der Menschen durch herkömmliche drei Behandlungen (Operation, Strahlentherapie und Chemotherapie) zu fesseln. Die Bio- und Immuntherapie wurde 2013 von der Zeitschrift Science zu einem der zehn großen Durchbrüche gewählt und gilt als neue Entwicklungsrichtung für die Krebsbehandlung im 21. Jahrhundert.

Die bestehende Immunbehandlung umfasst hauptsächlich: adoptive Immuntherapie, Tumorvakzintherapie, Immun-Checkpoint-Antikörpertherapie und andere Hilfstherapien, und die adoptive Immuntherapie wurde erforscht und entwickelt, außerdem ist sie die ausgereifteste Behandlung unter diesen Therapien. Die adoptive Immuntherapie, die in vielen Einheiten durchgeführt wurde, ist in erster Linie die autologe DC-CIK-Immuntherapie, die als dendritische Zellen (Dendritische Zellen, DC) und Cytokin-induzierte Killerzellen (Cytokine Induced Killer, CIK) Immuntherapie bezeichnet wird. Das Prinzip dieser Technologie ist: Abtrennung von Monozyten und Lymphozyten aus menschlichem peripherem Blut, dann augmentiert und aktiviert durch eine Vielzahl von Zytokinen in vitro (z. B. IFN-Gamma, IL-1, IL-2, Anti-CD3-mAb) zu a gemischter Lymphozyt mit Antigen-präsentierender und Breitspektrum-Funktion zum Abtöten von Tumorzellen. Die verstärkte aktivierte DC-CIK intravenös zurück zu den Patienten, die Freisetzung von Wirkstoffen wie CIK-Zellen Perforin und Getreideenzym B an Tumorzellen nach der Vereinigung mit den Tumorzellen im Körper, die die Tumorzellen auflösen. Inzwischen die Sekretion einer Vielzahl von Zytokinen, wie IL-2, IFN-Gamma und TNF-Alpha, verbessert die Immunfunktion des Körpers und gibt die Rolle der Anti-Tumor-Funktion.

Bestehende Literaturberichte und unsere frühere Studie in einem biologischen Behandlungszentrum zeigten, dass eine gute Sicherheit, geringe Nebenwirkungen und eine gute Verträglichkeit für die überwiegende Mehrheit der Patienten gegeben sind. In Bezug auf die heilende Wirkung zeigt der aktuelle Bericht, dass die DC-CIK-Technologie eine gute heilende Wirkung auf Leukämie, Lymphom, Eierstockkrebs, Magenkrebs usw. hat, mit Ausnahme von Lungenkrebs. Sie könnte aufgrund des komplexen Lungenkrebs-Tumorantigens oder schwach sein tumorspezifische T-Zellantwort. Um die Wirksamkeit des vorgestellten Lungenkrebs-Antigens zu verbessern und eine stärkere tumorspezifische T-Zell-Antwort zu stimulieren, muss bei der Verbesserung der heilenden Wirkung der Lungenkrebs-Immuntherapie angegangen werden.

In den letzten Jahren hat die Checkpoint-Antikörpertherapie einen Durchbruch in der Tumorimmuntherapie erzielt, darunter CTLA-4, PD-1 und PD-L1. Eine Reihe von klinischen Studien ergab, dass die Therapie mit PD-1- und PD-L1-Antikörpern bei fortgeschrittenem NSCLC, insbesondere bei Plattenepithelkarzinomen der Lunge, eine gute Behandlungswirkung hat und die objektive Ansprechrate der Krankheit 10-23% erreicht. Die autologe DC/CIK-Therapie ist im Inland weit verbreitet und hat eine gute Sicherheit, die durch viele klinische Praxis bewiesen wurde. Da es an wirksamem Tumorantigen mangelt, gibt es keine großen randomisierten, doppelblinden Studien, die ihre Funktion bei der Verlängerung des Überlebens von Patienten bestätigen Tumorprogression bisher verhindert. Einige Krankenhäuser haben die Tumorzelllyselösung oder Einzelmolekül-Proteinpeptid/DC-vereinigte CIK-Technologie übernommen, was bedeutet, dass Tumorzelllyse oder Einzelmolekül-Proteinpeptid als Tumorantigen auf DC-Einheit mit in vitro induziertem CIK gleichzeitig geladen werden.Im Vergleich Zur alleinigen CIK-Therapie kann die Einheitstherapie den Tumor nicht nur unspezifisch schädigen, sondern den Körper auch dazu anregen, eine tumorspezifische Immunantwort hervorzurufen. Die meisten der in der Tumorzelllyse enthaltenen Tumorantigene sind jedoch Langlebigkeitsproteine, die nicht effektiv aufgenommen werden können DC, was zu einem begrenzt wirksamen Antigen führt, das T-Lymphozyten von DC präsentiert wird. Darüber hinaus kann das Tumorantigen-Langlebigkeitsprotein für lange Zeit im natürlichen Wachstum von Tumorzellen existieren und von den Patienten für seine eigene Organisation erkannt werden, daher hemmt die Immuntoleranz die Immunantwort, die die Wirkung des Abtötens des Tumors beeinflusst. Einzelmolekül-Proteinpolypeptid induziert nur eine spezifische Immunantwort auf ein einzelnes oder wenige Tumorantigene, nicht auf das mutierte Tumorantigen, was zum Entweichen des Tumors führt. Wir müssen neue Zellbehandlungen entwickeln, da die autologe DC/CIK-Therapie keine wirksame Immunantwort hervorrufen kann, um einen neuen alternativen Kandidaten für die künftige kombinierte Checkpoint-Antikörpertherapie bereitzustellen.

Kürzlich hat das Team von Dr. Hu Hong - Ming eine innovative Krebsbehandlungsstrategie vorgestellt: die Verwendung der Autophagie-Rolle, um Tumorantigene für die Herstellung von Tumorimpfstoffen einzufangen. Bei dieser Strategie bewirkt die Blockierung der Proteasom-Aktivität von in vitro kultivierten Tumorzellen, die mit Bortezomib (Proteasom-Inhibitoren) behandelt wurden, eine Anreicherung von kurzlebigem Protein (SLiPs) und fehlgefalteten Proteinen (DRiPs) im Autophagosom, genannt DRibbles-Körperchen. Tumorimpfstoff, der aus dem Sammeln dieser DRibble-Körperchenpräparate hergestellt wird und auch als DRibble-Impfstoff bekannt ist. Unsere frühen Studien haben gezeigt, dass die DRibble-Tumorimpfstoffe stärker sind als der Tumorzellimpfstoff, da der gesamte lebende Proteine, die DC nicht effizient über Kreuz präsentiert werden können. Diese kurzlebigen Proteine ​​werden nicht durch das Proteasom im DRibble-Impfstoff abgebaut und in Autophagosomen-Vesikel mit Doppelmembranstruktur verpackt. Diese Vesikel enthalten endogene Risikosignalmoleküle (wie HSP90, HMGB1 usw.), die die angeborene Immunantwort wirksam auslösen können. Daher können DC, wenn sie mit einem einmaligen DRibble-Impfstoff kokultiviert werden, DRibble-Impfstoff effektiv aufnehmen und tumorbezogenes Antigen auf der DC-Oberfläche präsentieren, wobei sie sich mit MHC-Molekülen verbinden, um T-Zellen zu aktivieren, was zu einer Immunantwort führt. Verglichen mit dem Impfstoff gegen Lungenkrebs kann der DRibble-Impfstoff gegen Lungenkrebs ein breiteres Spektrum an Tumor-assoziierten Antigenen bereitstellen, wodurch der Körper die Toleranz für fehlende Kreuze nicht mehr aufrechterhält, was zu einer starken Immunantwort führen kann. Das Team von Dr. Hu Hong Ming hat auch herausgefunden, dass allogenes Dribble eine ebenso wirksame Immunantwort im Vergleich zu autologem Tumorzellen-DRibble-Impfstoff und Tumorregression induzieren kann, das Ergebnis wurde in mehreren Tumormodellen bestätigt. Aufgrund des Fehlens klassischer MHC-Moleküle können die Proteine ​​des DRibble-Impfstoffs schnell durch DC abgebaut werden, und der allogene DRibble-Impfstoff würde aufgrund der Induktion einer Allotransplantat-Immunantwort keine Nebenwirkungen hervorrufen, wobei seine Sicherheit und Wirksamkeit erhalten bleiben.

Die DRibble-Oberfläche verfügt über eine große Anzahl von molekularen Zielliganden von DC, die direkt mit xDC-Zellen mit hoher Expression von CLEC9A auf der Oberfläche kombiniert werden. xDC-Zellen können das präsentierte Antigen effizient mit DC kreuzen und somit die Effizienz der Präsentation des DRibble-Antigens verbessern. Außerdem hat DRibble eine durch DRibble induzierte Immunantwort, hat ein Immungedächtnis und identifiziert eine Vielzahl tumorspezifischer Antigene. Es verstärkt die Abwehr von Tumorzellenregeneration und verhindert das Austreten von Tumoren, wenn es erneut stimuliert wird. Von Providence-Krebszentren in den Vereinigten Staaten für fast 10 Jahre Forschung , die Sicherheit des DRibble wurde durch Ⅰ/Ⅱ klinischer Studien vollständig validiert.

Basierend auf der oben genannten Forschungsgrundlage beabsichtigt unser Projekt, die folgenden Forschungsarbeiten durchzuführen: 1. Die heilende Wirkung und der Einfluss des Gesamtüberlebens von NSCLC-Patienten im Spätstadium nach Erhalt des neuen DRibble-Impfstoffs und verglichen mit der Wirksamkeit der bestehenden DC/CIK-Therapie, 2. Weitere Untersuchung des Mechanismus der Auswirkungen der Dribble-Impfstofftherapie auf menschliche Lungenkrebszellen, Systemanalyse und Bewertung der klinischen Heilwirkung und des Förderwerts.

Forschungsobjekte: Diese Studie beabsichtigt, nicht-kleinzelligen Lungenkrebs im Zeitraum ⅢA/ⅢB/Ⅳ ohne radikale Prostatektomie (etwa 60 % der Gesamtzahl), Patienten einzuschließen, die 2-6 Zyklen Chemotherapie erhalten haben, Strahlentherapie akzeptieren oder nicht akzeptieren und Stadium der Krankheitskontrolle. Ausgewählte Patienten wurden nach dem Zufallsprinzip in eine neue Immuntherapie- und eine konventionelle DC/CIK-Behandlungsgruppe eingeteilt.

Therapeutischer Zeitplan: Diese Studie mit allogenem DRibble-Impfstoff wird mit DC/CIK oder DC/CIK allein zur Behandlung von NSCLC im Stadium IIIA oder B kombiniert. Es werden zwei Arme untersucht. 30 Patienten werden randomisiert Arm 1 und 2 zugewiesen.

Arm1: DRibble-Impfstoff mit DC/CIK (Die experimentelle Gruppe) Arm2: DC/CIK (Die Kontrollgruppe) Methoden und Verfahren

1. Zustimmung der Ethikkommission des Krankenhauses.
2. Rekrutierung der geeigneten Patienten gemäß den Ein- und Ausschlusskriterien.
3. Unterschreiben Sie die Einverständniserklärung des Patienten
4. Die Herstellung von DRibble-Lungenkrebsimpfstoffen
5. Blutprobenentnahme: Entnahme von 10 ml peripherem Blut des Patienten, getrennte PBMC wie vor der Behandlung Referenzproben.
6. Tag 1: DRibble-Gruppe, geführt durch Ultraschall bei Patienten mit inguinalen Lymphknoten unter dem Impfstoff von inject DRibble, die Kontrollgruppe keine Injektionen
7. Tag 8: Entnahme von 50 ml peripherem Blut und Trennung von Monozyten und Lymphozyten
8. Intensivierung der Amplifikation von Immunzellen (biologisches Behandlungszentrum): Durch die Aktivierung von CD3-Antikörpern fördert IL-2 die Lymphozytenproliferation für die Tötungszellen; GM-CSF induziert die Differenzierung mononukleärer Zellen für DC, gemeinsame Immunbehandlungsgruppe für die Kokultur von DRibble-Impfstoffen mit DC-Zellen 24h in Dribbling-Einheit mit DC/CIK-Gruppe.
9. Identifizierung von Immunzellen (klinisches Labor, biologisches Behandlungszentrum): Zählen der Zellzahl, Zellaktivität, der Oberflächenmarker.
10. Nachweis von mikrobiellen Immunzellen (klinisches Labor, biologisches Behandlungszentrum): Bakterien, Mykoplasmen und Endotoxin.
11. 20-22 Tage: Immunzellen zurück zum Patienten: physiologische Kochsalzlösung Waschzellen, venöser Rückfluss nach Suspendierung, innerhalb einer Behandlungsdauer mehrmals.
12. 55 Tage: Sammeln von 10 ml peripherem Blut, nach der Trennung von in vitro induzierten PBMC zu DC, Kokultivierung mit DRibble und subkutaner Injektion am 60. Tag.
13. Tag 75: Sammeln von 10 ml peripherem Blut, Trennen von PBMC und Nachweis der T-Zell-Immunantwortfähigkeit.

Systembewertung der therapeutischen Wirkung und des Förderungswerts von Dribble: 1. Die klinische Bewertung der heilenden Wirkung: Vergleich der experimentellen Gruppe und der Kontrollgruppe des progressionsfreien Überlebens und des Gesamtüberlebens, Zeichnen der Überlebenskurve und statistisch analysiert. 2. Bewertung der DRibble-Immunantwort, Vergleich des erstmalig gesammelten peripheren Blutes mit dem behandelten peripheren Blut und Nachbeobachtungsphase, nachgewiesene Immunfunktion der Tests, die hauptsächlich unten aufgeführt sind: In-vitro-Tests, Niveau der DRibble-spezifischen T-Zellen im peripheren Blut vor und nach die Behandlung, um die Antigen-produzierte spezifische Immunantwort deutlich zu machen; Kultivieren der spezifischen T-Zellen in vitro, Durchführung eines Erkennungsexperiments und autologer Tumorpatienten (falls erfolgreich getrennt) und mehrere gebaute Stämme von Lungenkrebszellen, die von Patienten in vitro isoliert wurden, um deutlich zu machen, dass die von der Versuchsgruppe erzeugten spezifischen T-Zellen viele erkennen konnten Stämme von Lungenkrebszellen, bedeutet, dass allogene DRibble-spezifische T-Zellen auf Tumorzellen verschiedener Patienten reagieren können. 3. Sicherheitsbewertungsindizes: Nebenwirkungen (Rötung und Schwellung, Schmerzen, Hautausschläge, Juckreiz usw. Allergische Reaktionen); Der Bluttestindex entspricht dem Standard (Routineblut, Leber- und Nierenfunktion, Elektrolyt usw.); Die Lebensqualität (Gewicht und BMI, Blutproteinspiegel, körperliche Stärke, psychologische, emotionale Bewertung usw.).