El tratamiento del cáncer de pulmón avanzado con antígeno Dribbles mediante la activación de células T

El tumor maligno se ha convertido en la principal causa de muerte en humanos, y el asesino número uno en tumores malignos es el cáncer de pulmón. La intensificación de la contaminación ambiental viene con el aumento de la incidencia del cáncer de pulmón y la alta mortalidad, lo peor es que la tasa de supervivencia a 5 años es solo del 15 %, lo que representa el primer lugar en los tumores malignos. La explotación de nuevos productos y tecnología antitumoral viene para captar la creciente atención de los gobiernos y las empresas debido a la ineficacia de frenar la amenaza de los tumores para la vida y la salud de las personas en los tres tratamientos convencionales (cirugía, radioterapia y quimioterapia). La biología y la inmunoterapia fueron votadas como uno de los diez grandes avances en 2013 por la revista Science y consideradas como una nueva dirección de desarrollo para el tratamiento del cáncer en el siglo XXI.

El tratamiento inmunitario existente incluye principalmente: terapia inmunitaria adoptiva, terapia con vacunas contra tumores, terapia con anticuerpos de punto de control inmunitario y otras terapias auxiliares, y la inmunoterapia adoptiva fue investigada y desarrollada anteriormente, además del tratamiento más maduro entre estas terapias. La inmunoterapia adoptiva que se ha llevado a cabo en muchas unidades es principalmente la inmunoterapia autóloga DC - CIK, que se denominó inmunoterapia con células dendríticas (Células dendríticas, DC) y células asesinas inducidas por citoquinas (Cytokine Induced Killer, CIK). El principio de esta tecnología es: la separación de monocitos y linfocitos de sangre periférica humana, luego aumentados y activados por una variedad de citoquinas in vitro (por ejemplo, IFN - gamma, IL - 1, IL - 2, mAb anti - CD3) a un linfocito mixto con presentación de antígeno y función de amplio espectro para matar células tumorales. El DC-CIK activado por vía intravenosa vuelve a los pacientes, liberando sustancias activas como perforina de células CIK y enzima B de grano a las células tumorales después de combinarse con las células tumorales en el cuerpo, lo que disuelve las células tumorales. Mientras tanto, la secreción de una variedad de citoquinas, como IL - 2, IFN - gamma y TNF alfa, mejora la función inmunológica del cuerpo y le da el papel de función antitumoral.

El informe de la literatura existente y nuestro estudio previo en el centro de tratamiento biológico mostraron que la gran mayoría de los pacientes tienen buena seguridad, efectos secundarios pequeños y buena tolerancia. En efecto curativo, el informe actual revela que la tecnología DC-CIK tiene un buen efecto curativo principalmente en la leucemia, el linfoma, el cáncer de ovario, el cáncer de estómago, etc., excepto el cáncer de pulmón. Podría debido al complejo antígeno tumoral del cáncer de pulmón, o débil Respuesta de células T específicas de tumor. Es necesario abordar cómo mejorar la eficacia del antígeno de cáncer de pulmón presentado y estimular una respuesta de células T específica de tumor más fuerte para mejorar el efecto curativo de la inmunoterapia de cáncer de pulmón.

En los últimos años, la terapia con anticuerpos de punto de control ha supuesto un gran avance en la inmunoterapia tumoral, incluidos CTLA-4, PD-1 y PD-L1. una serie de estudios clínicos revelaron que la terapia con anticuerpos PD - 1 y PD - L1 para el NSCLC avanzado, especialmente en el carcinoma escamoso de pulmón, tiene un buen efecto de tratamiento y la tasa de respuesta objetiva de la enfermedad alcanza el 10-23%. La terapia DC/CIK autóloga se ha llevado a cabo ampliamente en el hogar y tiene una buena seguridad demostrada por muchas prácticas clínicas. Debido a la falta de antígeno tumoral eficaz, no hay grandes estudios aleatorizados y doble ciego que confirmen su función para prolongar la supervivencia del paciente y previniendo la progresión del tumor hasta ahora. Algunos hospitales adoptaron la solución de lisis de células tumorales o la tecnología CIK unida de péptido de proteína de molécula única/DC, lo que significa cargar la lisis de células tumorales o el péptido de proteína de molécula única como antígeno tumoral para unir DC con CIK inducido in vitro al mismo tiempo. Cuando se compara a la terapia CIK sola, la terapia unitaria no solo puede dañar el tumor de manera no específica, sino que también puede inducir al cuerpo a producir una respuesta inmune específica del tumor. Sin embargo, la mayoría de los antígenos tumorales contenidos en la lisis de células tumorales son proteínas de longevidad que no pueden DC, lo que lleva a un antígeno efectivo limitado presentado por DC a los linfocitos T. Además, la proteína de longevidad del antígeno tumoral puede existir durante mucho tiempo en el crecimiento natural de las células tumorales y puede ser reconocida por los pacientes por su propia organización, por lo tanto, la tolerancia inmunitaria inhibe la respuesta inmunitaria que afecta el efecto de matar el tumor. El polipéptido de proteína de una sola molécula solo induce una respuesta inmune específica a un solo antígeno tumoral o a unos pocos, no al antígeno tumoral mutado, lo que resulta en el escape del tumor. Necesitamos desarrollar nuevos tratamientos celulares debido a que la terapia DC/CIK autóloga no puede producir una respuesta inmune efectiva, para proporcionar un nuevo candidato alternativo para unir la terapia de anticuerpos de punto de control en el futuro.

Recientemente, el equipo del Dr. Hu Hong - Ming presentó una innovadora estrategia de tratamiento del cáncer: el uso de la función de autofagia para capturar el antígeno tumoral para la preparación de una vacuna tumoral. En esta estrategia, el bloqueo de la actividad del proteasoma de células tumorales cultivadas in vitro tratadas con bortezomib (inhibidores del proteasoma) provoca el enriquecimiento de proteínas de vida corta (SLiP) y proteínas mal plegadas (DRiP) en el autofagosoma, llamado corpúsculo DRibbles. Vacuna tumoral hecha a partir de la recolección de esta preparación de corpúsculos DRibble, también conocida como vacuna DRibble. Nuestros primeros estudios han sugerido que las vacunas tumorales DRibble son más poderosas que la vacuna de células tumorales, porque la vacuna de células tumorales completas no contiene compuestos cortos fácilmente degradables. Proteínas vivas que no se pueden presentar de forma cruzada a DC de manera eficiente. Estas proteínas de vida corta evitan ser degradadas por el proteasoma en la vacuna DRibble y empaquetadas en vesículas de autofagosoma con estructura de doble membrana. Estas vesículas contienen moléculas de señalización de riesgo endógenas (como HSP90, HMGB1, etc.), que pueden desencadenar eficazmente la respuesta inmunitaria congénita. Por lo tanto, cuando se co-cultiva con una vacuna DRibble, DC puede tomar efectivamente la vacuna DRibble y presentar el antígeno relacionado con el tumor a la superficie DC, combinándose con moléculas MHC para activar las células T, lo que resulta en la respuesta inmune. En comparación con la vacuna completa contra el cáncer de pulmón, las vacunas DRibble contra el cáncer de pulmón pueden proporcionar una gama más amplia de antígenos asociados a tumores, lo que hace que el cuerpo ya no mantenga la tolerancia por la falta de presentación cruzada, lo que puede causar una fuerte respuesta inmune. El equipo del Dr. Hu Hong Ming también descubrió que Dribble alogénico puede inducir una respuesta inmune igualmente efectiva en comparación con las células tumorales autólogas. La vacuna DRibble y la regresión tumoral, el resultado se ha confirmado en múltiples modelos de tumores. Debido a la falta de moléculas MHC clásicas, las proteínas de la vacuna DRibble pueden degradarse rápidamente por DC, y la vacuna DRibble alogénica no induciría efectos adversos debido a la inducción de la respuesta inmune del aloinjerto, manteniendo su seguridad y eficacia.

La superficie DRibble tiene una gran cantidad de ligandos moleculares objetivo de DC, se combinan directamente con células xDC con CLEC9A de alta expresión en la superficie. Las células xDC pueden cruzar de manera eficiente el antígeno presente a DC, por lo que pueden mejorar la eficiencia de la presentación del antígeno DRibble. Además, la respuesta inmunitaria inducida por DRibble tiene memoria inmunitaria e identifica una amplia variedad de antígenos específicos de tumores, amplificará la reacción contra la regeneración de células tumorales y evitará que el tumor escape cuando se vuelva a estimular. Por los centros de cáncer de Providence en los Estados Unidos durante casi 10 años de investigación. , la seguridad de DRibble ha sido completamente validada por Ⅰ/Ⅱ ensayos clínicos.

Con base en la base de investigación anterior, nuestro proyecto pretende llevar a cabo la siguiente investigación: 1. El efecto curativo y la influencia de la supervivencia general de los pacientes con NSCLC en etapa tardía después de recibir la nueva vacuna DRibble, y en comparación con la eficacia de la terapia DC/CIK existente, 2. Estudiar más a fondo el mecanismo de los efectos de la terapia con la vacuna Dribble en las células de cáncer de pulmón humano. análisis del sistema y evaluar el efecto curativo clínico y el valor de la promoción.

Objetos de investigación: este estudio tiene la intención de incluir cáncer de pulmón de células no pequeñas del período ⅢA/ⅢB/Ⅳ sin prostatectomía radical (alrededor del 60 % del número total), pacientes que recibieron de 2 a 6 ciclos de quimioterapia, aceptan o no la radioterapia y etapa de control de la enfermedad. Los pacientes seleccionados se dividieron aleatoriamente en inmunoterapia nueva y grupo de tratamiento DC/CIK convencional.

Calendario terapéutico: este ensayo de la vacuna DRibble alogénica se combina con DC/CIK o DC/CIK solo para el tratamiento del NSCLC en estadio IIIA o B. Se estudiarán dos brazos. 30 pacientes serán aleatorizados a los brazos 1 y 2.

Brazo 1: vacuna DRibble con DC/CIK (el grupo experimental) Brazo 2: DC/CIK (el grupo de control) Métodos y procedimientos

1. Aprobación del comité de ética del hospital.
2. Reclutar a los pacientes adecuados según los criterios de inclusión y los criterios de exclusión.
3. Firmar el consentimiento informado de los pacientes
4. La preparación de vacunas contra el cáncer de pulmón DRibble
5. Recolección de muestras de sangre: recolecte 10 ml de sangre periférica de pacientes, separe las PBMC como antes de las muestras de referencia del tratamiento.
6. Día 1: grupo DRibble guiado por ultrasonido en pacientes con ganglios linfáticos inguinales bajo la vacuna de inyectar DRibble, el grupo control sin inyecciones
7. Día 8: recoger 50 ml de sangre periférica y separar monocitos y linfocitos
8. Intensificar la amplificación de las células inmunitarias (centro de tratamiento biológico): utilizando la activación de anticuerpos CD3, IL-2 promueve la proliferación de linfocitos para las células destructoras; GM-CSF induce la diferenciación de células mononucleares para DC, grupo de tratamiento inmunitario conjunto para el cocultivo de la vacuna DRibble con células DC para 24h en unidad Drible con grupo DC/CIK.
9. Identificación de células inmunitarias (laboratorio clínico, centro de tratamiento biológico): recuento del número de células, actividad celular, marcadores de superficie.
10. Detección de células inmunes microbianas (laboratorio clínico, centro de tratamiento biológico): bacterias, micoplasmas y endotoxinas.
11. 20-22 días: células inmunitarias de vuelta a los pacientes: células de lavado de solución salina fisiológica, retorno venoso después de la suspensión, dentro de un período de tratamiento varias veces.
12. 55 días: recolectar 10 ml de sangre periférica, luego de la separación de PBMC in vitro inducidas a DC, cocultivar con DRibble e inyección subcutánea a los 60 días.
13. Día 75: recoger 10 ml de sangre periférica, separar las PBMC y detectar la capacidad de respuesta inmunitaria de las células T.

Evaluación del sistema del efecto terapéutico y el valor de promoción de Dribble: 1. La evaluación clínica del efecto curativo: comparando el grupo experimental y el grupo de control de supervivencia libre de progresión y supervivencia general, dibujando la curva de supervivencia y analizado estadísticamente. 2. evaluación de la respuesta inmunitaria de DRibble, comparación de la sangre periférica recolectada por primera vez con la sangre periférica tratada y etapa de seguimiento, función inmunitaria detectada de las pruebas incluidas principalmente a continuación: nivel de prueba in vitro de células T específicas de DRibble en la sangre periférica antes y después el tratamiento, con el fin de aclarar la respuesta inmune específica producida por el antígeno; Cultivar las células T específicas in vitro, llevar a cabo un experimento de reconocimiento y tumores autólogos de pacientes (si se separan con éxito) y células de cáncer de pulmón de múltiples cepas construidas aisladas de pacientes in vitro, para aclarar que las células T específicas generadas por el grupo experimental podrían reconocer muchas cepas de células de cáncer de pulmón, significa que las células T alogénicas específicas de DRibble pueden responder a las células tumorales de diferentes pacientes. 3. Índices de evaluación de seguridad: reacción adversa (enrojecimiento e hinchazón, dolor, erupciones cutáneas, picazón, etc. Reacciones alérgicas); el índice de análisis de sangre está de acuerdo con el estándar (sangre de rutina, función hepática y renal, electrolitos, etc.); La calidad de vida (Peso e IMC, nivel de proteínas en sangre, grado de fuerza física, evaluación psicológica, emocional, etc).