Leczenie zaawansowanego raka płuc antygenem Dribbles poprzez ukierunkowaną aktywację komórek T

Nowotwór złośliwy stał się główną przyczyną śmierci ludzi, a zabójcą numer jeden wśród nowotworów złośliwych jest rak płuc. Nasilające się zanieczyszczenie środowiska wiąże się ze wzrostem zachorowalności na raka płuc i wysoką śmiertelnością, co najgorsze, że 5-letnie przeżycie wynosi tylko około 15%, co stanowi pierwsze miejsce w nowotworach złośliwych, Nadchodzi eksploatacja nowych technologii i produktów przeciwnowotworowych zatrzymać rosnącą uwagę rządów i biznesu z powodu nieskutecznego ograniczania zagrożenia nowotworami dla życia i zdrowia ludzi za pomocą konwencjonalnych trzech metod leczenia (chirurgii, radioterapii i chemioterapii). Biologia i immunoterapia została uznana przez magazyn Science za jeden z dziesięciu wielkich przełomów 2013 roku i uznana za nowy kierunek rozwoju leczenia nowotworów w XXI wieku.

Istniejące leczenie immunologiczne obejmuje głównie: immunoterapię adoptywną, terapię szczepionką przeciwnowotworową, immunoterapię przeciwciałami i inne terapie pomocnicze, a immunoterapia adoptywna została zbadana i opracowana jako najbardziej dojrzała terapia wśród tych terapii. Immunoterapia adopcyjna prowadzona w wielu jednostkach to przede wszystkim autologiczna immunoterapia DC - CIK, która nazywana jest immunoterapią komórek dendrytycznych (Dendritic cells, DC) i cytokiny indukowanych komórkami zabójczymi (Cytokine Induced Killer, CIK). Zasada tej technologii polega na: rozdzielaniu monocytów i limfocytów ludzkiej krwi obwodowej, następnie wzmacnianiu ich i aktywowaniu różnymi cytokinami in vitro (np. IFN-gamma, IL-1, IL-2, mAb anty-CD3) mieszany limfocyt z prezentacją antygenu i funkcją zabijania komórek nowotworowych o szerokim spektrum działania. Wzmacniający aktywowany DC-CIK dożylny z powrotem do pacjentów, uwalniający substancje czynne, takie jak perforyna komórek CIK i enzym zbożowy B do komórek nowotworowych po połączeniu z komórkami nowotworowymi w organizmie, który rozpuszcza komórki nowotworowe. Tymczasem wydzielanie różnych cytokin, takich jak IL - 2, IFN - gamma i TNF alfa, poprawia funkcje odpornościowe organizmu oraz pełni rolę przeciwnowotworową.

Istniejący raport literaturowy i nasze poprzednie badanie w centrum leczenia biologicznego wykazały, że dobre bezpieczeństwo, niewielkie skutki uboczne i dobra tolerancja dla zdecydowanej większości pacjentów. W działaniu leczniczym, obecny raport ujawnia, że ​​technologia DC-CIK ma dobre działanie lecznicze na białaczkę, chłoniaka, raka jajnika, raka żołądka itp., Z wyjątkiem raka płuc. Może to być spowodowane złożonym antygenem nowotworowym raka płuc lub słabym specyficzna dla nowotworu odpowiedź limfocytów T. Jak poprawić skuteczność prezentowanego antygenu raka płuc i stymulować silniejszą odpowiedź limfocytów T specyficzną dla nowotworu, należy zająć się poprawą efektu leczniczego immunoterapii raka płuc.

W ostatnich latach terapia przeciwciałami punktów kontrolnych dokonała przełomu w immunoterapii nowotworów, w tym CTLA-4, PD-1 i PD-L1. szereg badań klinicznych wykazało, że terapia przeciwciałami PD - 1 i PD - L1 w zaawansowanym NSCLC, zwłaszcza w raku płaskonabłonkowym płuca, ma dobre efekty terapeutyczne, a odsetek obiektywnych odpowiedzi na chorobę osiąga 10-23%. Autologiczna terapia DC/CIK została szeroko przeprowadzona w warunkach domowych i ma dobre bezpieczeństwo potwierdzone przez wiele praktyk klinicznych. Ze względu na brak skutecznego antygenu nowotworowego nie ma dużych randomizowanych, podwójnie ślepych badań potwierdzających jego funkcję w wydłużaniu przeżycia pacjentów i jak dotąd zapobiegać postępowi nowotworu. Niektóre szpitale przyjęły roztwór do lizy komórek nowotworowych lub technologię jednocząsteczkowego peptydu białkowego/DC united CIK, co oznacza załadowanie lizy komórek nowotworowych lub jednocząsteczkowego peptydu białkowego jako antygenu nowotworowego do połączenia DC z indukowanym in vitro CIK w tym samym czasie. W porównaniu w porównaniu z samą terapią CIK, terapia jednostkowa może nie tylko niespecyficznie uszkadzać guz, ale także indukować organizm do wytwarzania swoistej dla nowotworu odpowiedzi immunologicznej. Jednak większość antygenów nowotworowych zawartych w lizie komórek nowotworowych to białka długowieczności, które nie mogą być skutecznie przyjmowane przez DC, co prowadzi do ograniczonej skuteczności antygenu prezentowanego przez DC limfocytom T. Ponadto białko długowieczności antygenu nowotworowego może istnieć przez długi czas w naturalnym wzroście komórek nowotworowych i może być rozpoznawane przez pacjentów dla własnej organizacji, dlatego tolerancja immunologiczna hamuje odpowiedź immunologiczną wpływającą na efekt zabijania guza. Jednocząsteczkowy polipeptyd białkowy indukuje tylko specyficzną odpowiedź immunologiczną na pojedynczy lub kilka antygenów nowotworowych, a nie na zmutowany antygen nowotworowy, co skutkuje ucieczką guza. Musimy opracować nowe terapie komórkowe, ponieważ autologiczna terapia DC/CIK nie może wytworzyć skutecznej odpowiedzi immunologicznej, aby zapewnić nowego alternatywnego kandydata do zjednoczenia terapii przeciwciałami punktu kontrolnego w przyszłości.

Niedawno zespół dr Hu Hong-Ming przedstawił innowacyjną strategię leczenia raka: wykorzystanie roli autofagii do wychwytywania antygenu nowotworowego w celu przygotowania szczepionki przeciwnowotworowej. W tej strategii blokowanie aktywności proteasomu hodowanych in vitro komórek nowotworowych poddanych działaniu bortezomibu (inhibitorów proteasomu) powoduje wzbogacenie krótkożyciowych białek (SLiP) i nieprawidłowo sfałdowanych białek (DRiP) w autofagosomie, zwanym ciałkiem DRibbles. Szczepionka przeciwnowotworowa powstała z zebrania preparatu ciałek DRibble, znanego również jako szczepionka DRibble. Nasze wczesne badania sugerują, że szczepionki przeciwnowotworowe DRibble są silniejsze niż szczepionka z komórkami nowotworowymi, ponieważ cała szczepionka z komórek nowotworowych nie zawiera łatwo rozkładających się krótko- żywe białka, które nie mogą być wydajnie prezentowane DC. Te krótkotrwałe białka unikają degradacji przez proteasom w szczepionce DRibble i pakowania do pęcherzyków autofagosomu o strukturze podwójnej błony. Pęcherzyki te zawierają endogenne cząsteczki sygnalizujące ryzyko (takie jak HSP90, HMGB1 itp.), które mogą skutecznie wyzwalać wrodzoną odpowiedź immunologiczną. Dlatego też, podczas wspólnej hodowli ze szczepionką DRibble, DC może skutecznie przyjmować szczepionkę DRibble i prezentować antygen związany z nowotworem na powierzchni DC, łącząc się z cząsteczkami MHC w celu aktywacji komórek T, co skutkuje odpowiedzią immunologiczną. W porównaniu ze szczepionką na raka płuc, szczepionki DRibble na raka płuc mogą zapewnić szerszy zakres antygenów związanych z nowotworem, sprawiając, że organizm nie zachowuje już tolerancji na brak prezentacji krzyżowej, co może powodować silną odpowiedź immunologiczną. Zespół dr Hu Hong Minga odkrył również, że allogeniczny Dribble może wywoływać równie skuteczną odpowiedź immunologiczną w porównaniu ze szczepionką DRibble autologicznymi komórkami nowotworowymi i regresją guza, wynik został potwierdzony w wielu modelach nowotworów. Ze względu na brak klasycznych cząsteczek MHC, białka szczepionki DRibble mogą być szybko degradowane przez DC, a allogeniczna szczepionka DRibble nie wywołałaby niepożądanych skutków ze względu na indukcję odpowiedzi immunologicznej alloprzeszczepu, przy zachowaniu bezpieczeństwa i skuteczności.

Powierzchnia DRibble ma dużą liczbę docelowych ligandów molekularnych DC, bezpośrednio łączących się z komórkami xDC o wysokiej ekspresji CLEC9A na powierzchni. Komórki xDC mogą skutecznie krzyżować obecny antygen z DC, co może poprawić skuteczność prezentacji antygenu DRibble. Poza tym odpowiedź immunologiczna indukowana przez DRibble ma pamięć immunologiczną i identyfikuje szeroką gamę antygenów specyficznych dla nowotworu, wzmocni hamowanie regeneracji komórek nowotworowych i zapobiegnie ucieczce guza po ponownej stymulacji. Przez ośrodki onkologiczne Providence w Stanach Zjednoczonych przez prawie 10 lat badań , bezpieczeństwo DRibble zostało w pełni potwierdzone przez Ⅰ/Ⅱ badań klinicznych.

W oparciu o powyższe podstawy badawcze, nasz projekt zamierza przeprowadzić następujące badania: 1. Efekt leczniczy i wpływ całkowitego przeżycia pacjentów z późnym stadium NSCLC po otrzymaniu nowej szczepionki DRibble i porównanie z istniejącą skutecznością terapii DC/CIK, 2. Dalsze badania mechanizmu wpływu szczepionki Dribble na ludzkie komórki raka płuca, analiza systemowa i ocena klinicznego efektu leczniczego i wartości promocyjnej.

Obiekt badań: badanie to ma na celu objęcie okresem ⅢA/ⅢB/Ⅳ niedrobnokomórkowego raka płuca bez prostatektomii radykalnej (około 60% ogółu), pacjentów, którzy otrzymali 2-6 cykli chemioterapii, zaakceptowali lub nie przyjęli radioterapii oraz etap kontroli choroby. Wybranych pacjentów podzielono losowo na grupę nowej immunoterapii i konwencjonalnej DC/CIK.

Harmonogram terapeutyczny: Ta próba allogenicznej szczepionki DRibble łączy się z samym DC/CIK lub DC/CIK w leczeniu NSCLC w stadium IIIA lub B. Badane będą dwa ramiona. 30 pacjentów zostanie losowo przydzielonych do ramion 1 i 2.

Ramię 1: Szczepionka DRibble z DC/CIK (grupa eksperymentalna) Ramię 2: DC/CIK (grupa kontrolna) Metody i procedury

1. Zgoda szpitalnej komisji etyki.
2. Rekrutacja odpowiednich pacjentów zgodnie z kryteriami włączenia i wykluczenia.
3. Podpisz świadomą zgodę pacjentów
4. Przygotowanie szczepionek na raka płuc DRibble
5. Pobieranie próbek krwi: pobierz 10 ml krwi obwodowej pacjentów, oddziel PBMC jak próbki referencyjne przed leczeniem.
6. Dzień 1: Grupa DRibble pod kontrolą USG u pacjentów z pachwinowymi węzłami chłonnymi po szczepieniu DRibble w zastrzyku, grupa kontrolna bez iniekcji
7. Dzień 8: pobrać 50 ml krwi obwodowej i oddzielić monocyty i limfocyty
8. Intensyfikacja amplifikacji komórek odpornościowych (centrum leczenia biologicznego): za pomocą aktywacji przeciwciał CD3, IL-2 promuje proliferację limfocytów dla komórek zabijających; GM-CSF indukuje różnicowanie komórek jednojądrzastych dla DC, wspólna grupa leczenia immunologicznego dla szczepionki DRibble, wspólna hodowla z komórkami DC dla 24h w jednostce Dribble z grupą DC/CIK.
9. Identyfikacja komórek odpornościowych (laboratorium kliniczne, ośrodek leczenia biologicznego): zliczanie liczby komórek, aktywność komórek, markery powierzchniowe.
10. Wykrywanie komórek odpornościowych drobnoustrojów (laboratorium kliniczne, centrum leczenia biologicznego): bakterii, mykoplazm i endotoksyn.
11. 20-22 dni: komórki odpornościowe z powrotem do pacjentów: płukanie komórek solą fizjologiczną, powrót żylny po zawieszeniu, w okresie leczenia kilkakrotnie.
12. 55 dni: pobrać 10 ml krwi obwodowej, po oddzieleniu PBMC indukowanych in vitro do DC, hodować razem z DRibble i wstrzyknąć podskórnie w 60 dniu.
13. Dzień 75: pobrać 10 ml krwi obwodowej, oddzielić PBMC i wykryć zdolność odpowiedzi immunologicznej limfocytów T.

Systemowa ocena efektu terapeutycznego i wartości promocyjnej Dribble: 1. Kliniczna ocena efektu leczniczego: porównanie grupy eksperymentalnej i kontrolnej przeżycia wolnego od progresji i przeżycia całkowitego, wykreślenie krzywej przeżycia i analiza statystyczna. 2. ocena odpowiedzi immunologicznej DRibble, porównanie krwi obwodowej pobranej po raz pierwszy z krwią obwodową leczoną i etap kontrolny, funkcja immunologiczna wykryta w testach obejmowała głównie poniżej: testowy poziom limfocytów T swoistych dla DRibble we krwi obwodowej przed i po leczenie, w celu wyjaśnienia, że ​​antygen wywołał specyficzną odpowiedź immunologiczną; hodowanie specyficznych limfocytów T in vitro, przeprowadzanie eksperymentu rozpoznawania autologicznego guza pacjentów (w przypadku pomyślnego oddzielenia) i wielu zbudowanych szczepów komórki raka płuc wyizolowane od pacjentów in vitro, w celu wyjaśnienia, że ​​specyficzne limfocyty T generowane przez grupę eksperymentalną mogą rozpoznawać wiele szczepów komórek raka płuc, co oznacza, że ​​allogeniczne limfocyty T swoiste dla DRibble mogą reagować na komórki nowotworowe różnych pacjentów. 3. Wskaźniki oceny bezpieczeństwa: reakcja niepożądana (zaczerwienienie i obrzęk, ból, wysypka skórna, swędzenie itp. Reakcje alergiczne); Wskaźnik badania krwi jest zgodny ze standardem (rutynowa czynność krwi, wątroby i nerek, elektrolit itp.); Jakość życia (waga i BMI, poziom białka we krwi, stopień siły fizycznej, ocena psychologiczna, emocjonalna itp.).