Pitkälle edenneen keuhkosyövän hoito tihkusantigeenillä kohdistamalla T-solujen aktivointi

Pahanlaatuisesta kasvaimesta on tullut ihmisten yleisin kuolinsyy, ja pahanlaatuisten kasvainten tappaja numero yksi on keuhkosyöpä. Voimistuva ympäristön saastuminen liittyy keuhkosyövän ilmaantuvuuden ja korkean kuolleisuuden lisääntymiseen, mikä on pahinta, että viiden vuoden eloonjäämisaste on vain noin 15%, mikä muodostaa ensimmäisen sijan pahanlaatuisissa kasvaimissa. pysäyttää hallitusten ja yritysten kasvava huomio, koska ihmisten elämään ja terveyteen kohdistuvaa kasvainuhkaa on tehottomasti hillitty kolmella perinteisellä hoidolla (leikkaus, sädehoito ja kemoterapia). Science-lehti valitsi biologisen ja immunoterapian yhdeksi kymmenestä suuresta läpimurtosta vuonna 2013, ja sitä pidettiin uutena kehityssuuntana syövän hoidossa 2000-luvulla.

Nykyinen immuunihoito sisältää pääasiassa: adoptiivista immuunihoitoa, kasvainrokotehoitoa, immuunitarkistuspiste-vasta-ainehoitoa ja muuta apuhoitoa, ja adoptiivista immunoterapiaa on tutkittu ja kehitetty näiden hoitomuotojen lisäksi kypsimmäksi hoidoksi. Adoptio-immunoterapia on toteutettu monissa yksiköissä ensisijaisesti autologisena DC-CIK-immunoterapiana, jota kutsuttiin dendriittisoluiksi (Dendritic solut, DC) ja Cytokine Induced Killer -soluiksi (Cytokine Induced Killer, CIK) immunoterapiaksi. Tämän tekniikan periaate on: ihmisen ääreisveren monosyyttien ja lymfosyyttien erottaminen, sitten ugmentoituminen ja useiden sytokiinien aktivoiminen in vitro (esim. IFN-gamma, IL-1, IL-2, anti-CD3-mAb) sekoitettu lymfosyytti, jossa on antigeenia esittelevä ja laajakirjoinen kasvainsolujen tappamistoiminto. Vahvistava aktivoitu DC-CIK suonensisäisesti takaisin potilaille vapauttaen aktiivisia aineita, kuten CIK-soluja perforiinia ja viljaentsyymiä B kasvainsoluihin yhdistymisen jälkeen kasvainsolujen kanssa kehossa, mikä liuottaa kasvainsoluja. Sillä välin erittyy erilaisia sytokiinien, kuten IL-2, IFN-gamma ja TNF-alfa, lisääminen parantaa elimistön immuunitoimintaa ja antaa tuumorinvastaisen toiminnan roolin.

Nykyinen kirjallisuusraportti ja edellinen tutkimuksemme biologisessa hoitokeskuksessa osoittivat, että suurin osa potilaista on hyvä turvallisuus, pienet sivuvaikutukset ja hyvä sietokyky. Nykyinen raportti paljastaa, että DC-CIK-teknologialla on parantava vaikutus leukemiaan, lymfoomaan, munasarjasyöpään, mahasyöpään jne. lukuun ottamatta keuhkosyöpää. Se voi johtua monimutkaisesta keuhkosyövän kasvainantigeenista tai heikosta kasvainspesifinen T-soluvaste. Keuhkosyövän immunoterapian parantavan vaikutuksen parantamisessa on tarkasteltava, miten esillä olevan keuhkosyövän antigeenin tehokkuutta voidaan parantaa ja vahvistaa kasvainspesifistä T-soluvastetta.

Viime vuosina tarkistuspisteen vasta-ainehoidolla on ollut läpimurto kasvainimmunoterapiassa, mukaan lukien CTLA-4, PD - 1 ja PD - L1. useat kliiniset tutkimukset paljastivat PD-1- ja PD-L1-vasta-aineen hoidossa edenneen NSCLC:n hoidossa, erityisesti keuhkojen levyepiteelikarsinoomassa on hyvä hoitovaikutus ja taudin objektiivinen vasteprosentti saavuttaa 10-23%. Autologista DC/CIK-hoitoa on toteutettu laajalti kotitalouksissa, ja sen turvallisuus on monien kliinisten käytäntöjen osoittama. Tehokkaan kasvainantigeenin puuttuessa ei ole olemassa suuria satunnaistettuja kaksoissokkotutkimuksia, jotka vahvistavat sen tehtävää potilaiden eloonjäämisajan pidentämisessä ja estämään kasvaimen etenemistä toistaiseksi. Joissakin sairaaloissa otettiin käyttöön kasvainsolujen lyysiliuos tai yksimolekyylinen proteiinipeptidi/DC-yhdistetty CIK-tekniikka, mikä tarkoittaa kasvainsolujen hajoamisen tai yhden molekyylin proteiinipeptidin lataamista kasvainantigeeniksi DC-yhdisteeseen samanaikaisesti in vitro -indusoidun CIK:n kanssa. Pelkästään CIK-hoitoon yksikköhoito ei voi ainoastaan ​​vahingoittaa kasvainta epäspesifisesti, vaan myös saada kehon tuottamaan kasvainspesifistä immuunivastetta. Suurin osa kasvainsolujen hajoamiseen sisältyvistä kasvainantigeeneistä on kuitenkin pitkäikäisiä proteiineja, joita ei voida tehokkaasti ottaa DC, joka johtaa rajoitettuun tehokkaaseen antigeeniin, jonka DC esittää T-lymfosyytille. Lisäksi kasvainantigeenin pitkäikäisyysproteiini voi esiintyä pitkään kasvainsolujen luonnollisessa kasvussa, ja potilaat voivat tunnistaa sen omasta organisaatiostaan, joten immuunitoleranssi estää immuunivasteen, joka vaikuttaa kasvaimen tappamisvaikutukseen. Yksimolekyylinen proteiinipolypeptidi indusoi vain spesifisen immuunivasteen yhdelle tai muutamalle kasvainantigeenille, ei mutatoituneelle kasvainantigeenille, mikä johtaa kasvaimen karkaamiseen. Meidän on kehitettävä uusia soluhoitoja, koska autologinen DC/CIK-hoito ei pysty tuottamaan tehokasta immuunivastetta, jotta voidaan tarjota uusi vaihtoehtoinen ehdokas yhdistämään tarkistuspistevasta-aineterapiaa tulevaisuudessa.

Äskettäin tohtori Hu Hong - Mingin tiimi esitti innovatiivisen syövän hoitostrategian: autofagian roolin käyttö kasvainantigeenin sieppaamiseksi kasvainrokotteen valmistukseen. Tässä strategiassa Bortezomibin (proteasomi-inhibiittorien) kanssa käsiteltyjen in vitro viljeltyjen kasvainsolujen proteasomiaktiivisuus rikastaa lyhytikäisiä proteiineja (SLiP) ja väärin laskostuneita proteiineja (DRiPs) autofagosomissa, jota kutsutaan DRibbles-korpuskkeliksi. Kasvainrokote, joka on valmistettu keräämällä näitä DRibble-soluvalmisteita, joka tunnetaan myös nimellä DRibble-rokote. Varhaiset tutkimuksemme ovat osoittaneet, että DRibble-kasvainrokotteet ovat tehokkaampia kuin kasvainsolurokote, koska koko kasvainsolurokote ei sisällä helposti hajoavia lyhyt- eläviä proteiineja, joita ei voida ristiin esitellä DC:lle tehokkaasti. Nämä lyhytikäiset proteiinit välttävät hajoamisen DRibble-rokotteen proteasomin vaikutuksesta ja pakataan autofagosomivesikkeleihin, joissa on kaksoiskalvorakenne. Nämä vesikkelit sisältävät endogeenisiä riskisignaalimolekyylejä (kuten HSP90, HMGB1 jne.), jotka voivat laukaista tehokkaasti synnynnäisen immuunivasteen. Siksi, kun yhteisviljely kerran DRibble-rokotteen kanssa, DC voi tehokkaasti ottaa DRibble-rokotteen ja esittää kasvaimeen liittyvän antigeenin DC-pinnalle, yhdistyen MHC-molekyylien kanssa T-solujen aktivoimiseksi, mikä johtaa immuunivasteeseen. Verrattuna koko keuhkosyöpärokotteeseen, DRibble-keuhkosyöpärokotteet voivat tarjota laajemman valikoiman kasvaimeen liittyviä antigeenejä, jolloin keho ei enää säilytä toleranssia ristiin esiintymisen puutteelle, mikä voi aiheuttaa voimakkaan immuunivasteen. Tohtori Hu Hong Mingin tiimi on myös havainnut, että allogeeninen Dribble voi indusoida yhtä tehokkaan immuunivasteen verrattuna autologisiin kasvainsolujen DRibble-rokotteisiin ja kasvaimen regressioon, tulos on vahvistettu useissa kasvainmalleissa. Klassisten MHC-molekyylien puutteen vuoksi DC voi hajottaa DRibble-rokoteproteiinit nopeasti, eikä allogeeninen DRibble-rokote aiheuttaisi haitallisia vaikutuksia allograftin immuunivasteen indusoimisen vuoksi, mikä jää jäljelle sen turvallisuudesta ja tehokkuudesta.

DRibble-pinnalla on suuri määrä DC:n kohdemolekyyliligandeja, jotka yhdistyvät suoraan xDC-solujen kanssa, joilla on korkea CLEC9A-ekspressio pinnalla. xDC-solut voivat tehokkaasti risteyttää esittelevän antigeenin DC:hen, mikä voi parantaa DRibble-antigeenin esittämisen tehokkuutta. Lisäksi DRibblen indusoimalla immuunivasteella on immuunimuisti ja se tunnistaa laajan valikoiman kasvainspesifisiä antigeenejä, se voimistaa tuumorisolujen uusiutumista vastaan ​​ja estää kasvaimen karkaamisen, kun sitä stimuloidaan uudelleen. Providencen syöpäkeskukset Yhdysvalloissa lähes 10 vuoden tutkimuksesta. , DRibblen turvallisuus on täysin validoitu Ⅰ/Ⅱ kliinisissä tutkimuksissa.

Yllä olevan tutkimuspohjan perusteella hankkeessamme on tarkoitus tehdä seuraava tutkimus: 1. Myöhäisen vaiheen NSCLC-potilaiden parantava vaikutus ja vaikutus kokonaiseloonjäämiseen uuden DRibble-rokotteen saamisen jälkeen ja verrattuna olemassa olevaan DC/CIK-hoidon tehokkuuteen, 2. Tutki edelleen Dribble-rokotehoidon vaikutusten mekanismia ihmisen keuhkosyöpäsoluihin, järjestelmä analysoi ja arvioi kliinistä parantavaa vaikutusta ja edistämisarvoa.

Tutkimuskohteet: tähän tutkimukseen on tarkoitus sisällyttää ⅢA/ⅢB/Ⅳ-jakson ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ilman radikaalia eturauhasen poistoa (noin 60 % kokonaismäärästä), potilaat, jotka ovat saaneet 2-6 kemoterapiajaksoa, hyväksyvät tai eivät hyväksy sädehoitoa ja taudin torjuntavaihe. Valitut potilaat jaettiin satunnaisesti uuteen immunoterapia- ja tavanomaiseen DC/CIK-hoitoryhmään.

Terapeuttinen aikataulu: Tässä allogeenisen DRibble-rokotteen kokeessa yhdistetään DC/CIK tai DC/CIK yksinään vaiheen IIIA tai B NSCLC:n hoitoon. Kaksi kättä tutkitaan. 30 potilasta satunnaistetaan haaroihin 1 ja 2.

Käsivarsi 1: DRibble-rokote DC/CIK:llä (koeryhmä) Arm2: DC/CIK (kontrolliryhmä) Menetelmät ja toimenpiteet

1. Sairaalan eettisen komitean hyväksyntä.
2. Sopivien potilaiden rekrytointi mukaanotto- ja poissulkemiskriteerien mukaan.
3. Allekirjoita potilaiden tietoinen suostumus
4. DRibble-keuhkosyöpärokotteiden valmistus
5. Verinäytteiden kerääminen: kerätään 10 ml potilaiden ääreisverta, erotetaan PBMC kuten ennen hoitoa vertailunäytteet.
6. Päivä 1: Ultraäänellä ohjattu DRibble-ryhmä potilailla, joilla on nivusimusolmukkeita injektoidun DRibble-rokotteen alla, kontrolliryhmä ei injektioita
7. Päivä 8: Kerää 50 ml ääreisverta ja erota monosyytit ja lymfosyytit
8. Tehosta immuunisolujen monistumista (biologinen hoitokeskus): CD3-vasta-aineiden aktivoinnin avulla IL-2 edistää lymfosyyttien lisääntymistä tappavien solujen osalta; GM-CSF indusoi mononukleaaristen solujen erilaistumista DC:lle, yhteinen immuunihoitoryhmä DRibble-rokotteen yhteisviljelyyn DC-solujen kanssa 24h Dribble-yksikössä DC/CIK-ryhmän kanssa.
9. Immuunisolun tunnistaminen (kliininen laboratorio, biologinen hoitokeskus): solujen lukumäärän, soluaktiivisuuden, pintamarkkerien laskenta.
10. Immuunisolujen mikrobien havaitseminen (kliininen laboratorio, biologinen hoitokeskus): bakteerit, mykoplasma ja endotoksiini.
11. 20-22 päivää: immuunisolut takaisin potilaille: fysiologinen suolaliuos pesusolut, laskimopalautus suspension jälkeen, hoidon aikana useita kertoja.
12. 55 päivää: kerätään 10 ml ääreisverta sen jälkeen, kun DC:hen indusoitu PBMC on erotettu in vitro, viljellään yhdessä DRibblen kanssa ja ihonalainen injektio 60. päivänä.
13. Päivä 75: Kerää 10 ml ääreisverta, erota PBMC ja havaitse T-solujen immuunivastekyky.

Järjestelmän arviointi Dribblen terapeuttisesta vaikutuksesta ja edistämisarvosta: 1. Parantavan vaikutuksen kliininen arviointi: etenemisvapaan eloonjäämisen ja kokonaiseloonjäämisen koeryhmän ja kontrolliryhmän vertaaminen, eloonjäämiskäyrän piirtäminen ja tilastollinen analysointi. 2. DRibble-immuunivasteen arvioiminen, ensimmäistä kertaa kerätyn ääreisveren vertaaminen käsiteltyyn ääreisvereen ja seurantavaihe, testauksessa havaittu immuunitoiminto, joka sisältyi pääasiassa alla: DRibble-spesifisten T-solujen in vitro -testaustaso ääreisveressä ennen ja jälkeen hoito antigeenin tuottaman spesifisen immuunivasteen selventämiseksi; viljellään spesifisiä T-soluja in vitro, suoritetaan tunnistuskoe ja potilaiden autologinen kasvain (jos se on onnistunut erotettua) ja useita muodostuneita kantoja keuhkosyöpäsoluja, jotka on eristetty potilaista in vitro, jotta koeryhmän tuottamat spesifiset T-solut voisivat tunnistaa monia Keuhkosyöpäsolukannat tarkoittaa allogeenisiä DRibble-spesifisiä T-soluja, jotka voivat reagoida eri potilaan kasvainsoluihin. 3. Turvallisuusarviointiindeksit: haittavaikutus (punoitus ja turvotus, kipu, ihottumat, kutina jne. Allergiset reaktiot);Verikoeindeksi on standardin mukainen (rutiininomainen veri, maksan ja munuaisten toiminta, elektrolyytti jne.); Elämänlaatu (paino ja BMI, veren proteiinitaso, fyysinen vahvuus, psykologinen, emotionaalinen arviointi jne.).