Léčba pokročilého karcinomu plic s dribbles antigenem cílenou aktivací T-buněk

Zhoubný nádor se stal hlavní příčinou úmrtí u lidí a zabijákem číslo jedna u zhoubných nádorů je rakovina plic. Zvyšující se znečištění životního prostředí přichází s rostoucím výskytem rakoviny plic a vysokou úmrtností, což je nejhorší, že 5letá míra přežití je pouze asi 15 %, což představuje první místo v oblasti zhoubných nádorů, Přichází využívání nových protinádorových technologií a produktů zastavit rostoucí pozornost vlád a podniků kvůli neefektivnímu omezování ohrožení života a zdraví lidí nádory pomocí tří konvenčních způsobů léčby (chirurgie, radioterapie a chemoterapie). Biologická a imunoterapie byla v roce 2013 časopisem Science zvolena jako jeden z deseti velkých průlomů a považována za nový směr vývoje léčby rakoviny v 21. století.

Stávající imunitní léčba zahrnuje především: adoptivní imunoterapii, terapii vakcínou proti nádorům, terapii imunitními kontrolními body-protilátkami a další pomocnou terapii, přičemž adoptivní imunoterapie byla zkoumána a vyvinuta dříve, navíc jako nejvyspělejší léčba mezi těmito terapiemi. Adoptivní imunoterapie byla prováděna na mnoha jednotkách, především je to autologní imunoterapie DC - CIK, která se nazývá imunoterapie dendritických buněk (Dendritické buňky, DC) a cytokinem indukované zabíječské buňky (Cytokine Induced Killer, CIK). Princip této technologie spočívá v: separaci monocytů a lymfocytů lidské periferní krve, poté ugmentovaných a aktivovaných řadou cytokinů in vitro (např. IFN - gama, IL - 1, IL - 2, anti - CD3 mAb) na smíšený lymfocyt s antigenem prezentujícím a širokospektrální funkcí zabíjení nádorových buněk. Zesilující aktivovaný DC-CIK intravenózně zpět pacientům, uvolňování účinných látek, jako je perforin CIK buněk a obilný enzym B do nádorových buněk po spojení s nádorovými buňkami v těle, které nádorové buňky rozpouští. cytokinů, jako je IL - 2, IFN - gama a TNF alfa, zlepšuje imunitní funkci těla a dává roli protinádorové funkce.

Stávající literární zpráva a naše předchozí studie v centru biologické léčby ukázaly, že u velké většiny pacientů je dobrá bezpečnost, malé vedlejší účinky a dobrá tolerance. Pokud jde o léčebný účinek, současná zpráva odhaluje, že technologie DC-CIK má dobrý léčebný účinek zejména na leukémii, lymfom, rakovinu vaječníků, rakovinu žaludku atd., s výjimkou rakoviny plic. Mohlo by to být kvůli komplexnímu nádorovému antigenu rakoviny plic nebo slabé nádorově specifická T buněčná odpověď. Jak zlepšit účinnost prezentovaného antigenu rakoviny plic a stimulovat silnější nádorově specifickou T buněčnou odpověď, je třeba se zabývat zlepšením léčebného účinku imunoterapie rakoviny plic.

V posledních letech prodělala protilátková terapie kontrolních bodů průlom v nádorové imunoterapii, včetně CTLA-4, PD-1 a PD-L1. řada klinických studií prokázala, že léčba PD - 1 a PD - L1 protilátkou u pokročilého NSCLC, zejména u dlaždicového karcinomu plic, má dobrý léčebný efekt a míra objektivní odpovědi onemocnění dosahuje 10-23 %. Autologní terapie DC/CIK byla široce prováděna v domácích podmínkách a má dobrou bezpečnost ověřenou mnoha klinickými praktikami. Vzhledem k nedostatku účinného nádorového antigenu neexistují žádné velké randomizované, dvojitě zaslepené studie, které by potvrdily její funkci při prodlužování přežití pacientů a zatím brání progresi nádoru. Některé nemocnice přijaly technologii lýzy nádorových buněk nebo jednomolekulární proteinový peptid/DC united CIK, což znamená načíst lýzu nádorových buněk nebo jednomolekulární proteinový peptid jako nádorový antigen, aby se DC spojily s in vitro indukovaným CIK ve stejnou dobu. k samotné terapii CIK může jednotková terapie nejen nespecificky poškodit nádor, ale také přimět tělo k produkci nádorově specifické imunitní odpovědi. Většina nádorových antigenů obsažených v lýze nádorových buněk jsou však proteiny dlouhověkosti, které nemohou být účinně přijímány DC, což vede k omezenému účinnému antigenu prezentovanému DC T lymfocytům. Kromě toho může protein dlouhověkosti nádorového antigenu existovat po dlouhou dobu v přirozeném růstu nádorových buněk a může být pacienty rozpoznán pro jeho vlastní organizaci, proto imunitní tolerance inhibuje imunitní odpověď ovlivňující účinek zabíjení nádoru. Jednomolekulární proteinový polypeptid pouze indukuje specifickou imunitní odpověď na jeden nebo několik nádorových antigenů, nikoli na mutovaný nádorový antigen, což má za následek únik nádoru. Potřebujeme vyvinout nové buněčné léčby, protože autologní terapie DC/CIK nemůže produkovat účinnou imunitní odpověď, abychom v budoucnu poskytli nového alternativního kandidáta na sjednocení terapie kontrolními protilátkami.

Nedávno tým Dr Hu Hong - Ming navrhl inovativní strategii léčby rakoviny: využití role autofagie k zachycení nádorového antigenu pro přípravu vakcíny proti nádoru. V této strategii blokující proteazomová aktivita in vitro kultivovaných nádorových buněk zabývajících se bortezomibem (inhibitory proteazomu) způsobuje obohacení krátkotrvajícího proteinu (SLiPs) a špatně složených proteinů (DRiPs) v autofagozomu, nazývaném DRibbles corpuscle. Nádorová vakcína vyrobená ze sběru těchto preparátů DRibblesových tělísek jako, také známá jako DRibble vakcína. Naše rané studie naznačily, že vakcíny DRibble proti nádorům jsou účinnější než vakcína proti nádorovým buňkám, protože vakcína z celých nádorových buněk neobsahuje snadno degradovatelné krátké živé proteiny, které nemohou být účinně zkříženě prezentovány DC. Tyto proteiny s krátkou životností se vyhýbají degradaci proteazomem ve vakcíně DRibble a jsou zabaleny do autofagozomových vezikul s dvojitou membránovou strukturou. Tyto vezikuly obsahují endogenní rizikové signální molekuly (jako HSP90, HMGB1 atd.), mohou účinně spustit vrozenou imunitní odpověď. Proto při společné kultivaci s jednou vakcínou DRibble může DC účinně přijímat vakcínu DRibble a prezentovat antigen související s nádorem na povrchu DC, přičemž se kombinuje s molekulami MHC k aktivaci T buněk, což vede k imunitní odpovědi. Ve srovnání s celou vakcínou proti rakovině plic mohou vakcíny proti rakovině plic DRibble poskytnout širší škálu antigenů souvisejících s nádorem, díky čemuž tělo již dále netoleruje nedostatek křížení, což může způsobit silnou imunitní odpověď. Tým Dr Hu Hong Minga také zjistil, že alogenní Dribble může vyvolat stejně účinnou imunitní odpověď ve srovnání s autologními nádorovými buňkami DRibble vakcínou a regresí nádoru, výsledek byl potvrzen na mnoha modelech nádorů. Kvůli nedostatku klasických MHC molekul mohou být proteiny vakcíny DRibble rychle degradovány DC a alogenní vakcína DRibble by nevyvolávala nežádoucí účinky v důsledku indukce imunitní reakce aloštěpu, přičemž by zůstala její bezpečnost a účinnost.

Povrch DRibble má velký počet cílových molekulárních ligandů DC, které se přímo kombinují s buňkami xDC s vysokou expresí CLEC9A na povrchu. xDC buňky mohou účinně křížit přítomný antigen s DC, a tak mohou zlepšit účinnost prezentace DRibble antigenu. Kromě toho imunitní reakce vyvolaná DRibble má imunitní paměť a identifikuje širokou škálu nádorově specifických antigenů, zesílí boj proti regeneraci nádorových buněk a zabrání úniku nádoru, když je znovu stimulován. , bezpečnost DRibble byla plně ověřena Ⅰ/Ⅱ klinickými studiemi.

Na základě výše uvedeného výzkumného základu má náš projekt v úmyslu provést následující výzkum: 1. Kurativní účinek a vliv na celkové přežití pacientů v pozdním stádiu NSCLC po obdržení nové vakcíny DRibble a srovnání s účinností stávající terapie DC/CIK, 2. Dále studovat mechanismus účinků terapie vakcínou Dribble na buňky lidského karcinomu plic, systémovou analýzu a vyhodnocení klinického léčebného účinku a propagační hodnoty.

Předmět výzkumu: tato studie má za cíl zahrnout ⅢA/ⅢB/Ⅳ období nemalobuněčného karcinomu plic bez radikální prostatektomie (asi 60 % z celkového počtu), pacienty, kteří podstoupili 2-6 cyklů chemoterapie, přijali nebo nepřijali radiační terapii a fáze kontroly onemocnění. Vybraní pacienti byli náhodně rozděleni do skupiny nové imunoterapie a konvenční léčby DC/CIK.

Terapeutické schéma: Tato studie alogenní DRibble vakcíny sjednocená s DC/CIK nebo DC/CIK samotnými pro léčbu stadia IIIA nebo B NSCLC. Budou studována dvě ramena. 30 pacientů bude randomizováno do ramene 1 a 2.

Arm1: DRibble vakcína s DC/CIK (experimentální skupina) Arm2: DC/CIK (kontrolní skupina) Metody a postupy

1. Schválení etické komise nemocnice.
2. Nábor vhodných pacientů podle kritérií pro zařazení a kritérií pro vyloučení.
3. Podepište informovaný souhlas pacientů
4. Příprava vakcín proti rakovině plic DRibble
5. Odběr vzorků krve: odeberte 10 ml periferní krve pacientů, separujte PBMC jako referenční vzorky před léčbou.
6. Den 1: DRibble skupina vedená ultrazvukem u pacientů s tříselnými lymfatickými uzlinami pod vakcínou DRibble, kontrolní skupina bez injekcí
7. 8. den: odeberte 50 ml periferní krve a oddělte monocyty a lymfocyty
8. Intenzifikace amplifikace imunitních buněk (centrum biologické léčby): pomocí aktivace protilátek CD3 podporuje IL-2 proliferaci lymfocytů pro zabíjející buňky;GM-CSF indukuje diferenciaci mononukleárních buněk pro DC, společná imunitní léčebná skupina pro kokultivaci vakcíny DRibble s buňkami DC pro 24h v jednotce Dribble se skupinou DC/CIK.
9. Identifikace imunitní buňky (klinická laboratoř, centrum biologické léčby): počítání počtu buněk, buněčná aktivita, povrchové markery.
10. Detekce mikrobiálních imunitních buněk (klinická laboratoř, centrum biologické léčby): bakterie, mykoplazma a endotoxin.
11. 20-22 dní: imunitní buňky zpět k pacientům: promývací buňky fyziologickým roztokem, žilní návrat po suspenzi, během doby léčby několikrát.
12. 55 dní: odeberte 10 ml periferní krve, po separaci PBMC in vitro indukovaných do DC, kokultivujte s DRibble a subkutánní injekcí 60. den.
13. 75. den: odeberte 10 ml periferní krve, oddělte PBMC a detekujte schopnost imunitní reakce T buněk.

Systémové hodnocení terapeutického účinku a hodnoty podpory Dribble: 1. Klinické hodnocení kurativního účinku: porovnání přežití bez progrese a celkového přežití u experimentální skupiny a kontrolní skupiny, sestavení křivky přežití a statistická analýza. 2. vyhodnocení imunitní reakce DRibble, porovnání poprvé odebrané periferní krve s ošetřenou periferní krví a fází sledování, imunitní funkce zjištěná testováním zahrnuta zejména níže: testování in vitro hladina T buněk specifických pro DRibble v periferní krvi před a po ošetření, aby se vyjasnila specifická imunitní reakce vyvolaná antigenem; kultivace specifických T lymfocytů in vitro, provádění experimentu rozpoznávání a pacientů s autologním nádorem (pokud byl úspěšně separován) a mnohočetnými kmeny buněk rakoviny plic izolovaných od pacientů in vitro, aby bylo jasné, že specifické T lymfocyty generované experimentální skupinou mohou rozpoznat mnoho kmeny buněk rakoviny plic, znamená, že alogenní DRibble specifické T buňky mohou reagovat na různé nádorové buňky pacienta. 3. Indexy hodnocení bezpečnosti: nežádoucí reakce (Zarudnutí a otok, bolest, kožní vyrážky, svědění atd. Alergické reakce); Index krevních testů je v souladu s normou (Rutinní krev, funkce jater a ledvin, elektrolyt atd.); Kvalita života (hmotnost a BMI, hladina bílkovin v krvi, stupeň fyzické síly, psychologické, emoční hodnocení atd.).