O tratamento do câncer de pulmão avançado com dribles antigênicos visando a ativação de células T

O tumor maligno tornou-se a principal causa de morte em humanos, e o assassino número um em tumores malignos é o câncer de pulmão. A intensificação da poluição ambiental vem com o aumento da incidência de câncer de pulmão e a alta mortalidade, o que é pior que a taxa de sobrevivência de 5 anos é de apenas cerca de 15%, representando o primeiro lugar nos tumores malignos, Explorando novas tecnologias e produtos antitumorais vem para prender a atenção crescente dos governos e empresas por causa da redução ineficaz da ameaça do tumor à vida e à saúde das pessoas em três tratamentos convencionais (cirurgia, radioterapia e quimioterapia). A terapia biológica e imunoterápica foi eleita uma das dez grandes descobertas em 2013 pela revista Science e considerada uma nova direção de desenvolvimento para o tratamento do câncer no século XXI.

O tratamento imunológico existente inclui principalmente: terapia imunológica adotiva, terapia de vacina contra tumores, terapia de anticorpo de checkpoint imunológico e outras terapias auxiliares, e a imunoterapia adotiva foi pesquisada e desenvolvida anteriormente, além do tratamento mais maduro entre essas terapias. A imunoterapia adotiva tem sido realizada em muitas unidades principalmente é a imunoterapia autóloga DC - CIK, que se chama células dendríticas (células dendríticas, DC) e células assassinas induzidas por citocinas (assassinas induzidas por citocinas, CIK). O princípio desta tecnologia é: separação de monócitos e linfócitos do sangue periférico humano, então ugmentados e ativados por uma variedade de citocinas in vitro (por exemplo, IFN - gama, IL - 1, IL - 2, anti - CD3 mAb) para um linfócito misto com apresentação de antígeno e função de amplo espectro para matar células tumorais. A amplificação ativou DC-CIK intravenoso de volta aos pacientes, liberando substâncias ativas, como células CIK, perforina e enzima de grão B para células tumorais após a combinação com as células tumorais no corpo, que dissolve as células tumorais. Enquanto isso, a secreção de uma variedade de citocinas, como IL - 2, IFN - gama e TNF alfa, melhora a função imunológica do organismo, e confere o papel de função antitumoral.

O relatório da literatura existente e nosso estudo anterior no centro de tratamento biológico mostraram boa segurança, pequenos efeitos colaterais e boa tolerância para a grande maioria dos pacientes. Em efeito curativo, o relatório atual revela que a tecnologia DC-CIK tem um bom efeito curativo em leucemia, linfoma, câncer de ovário, câncer de estômago, etc., exceto para câncer de pulmão. resposta de células T específicas do tumor. Como melhorar a eficácia do antígeno de câncer de pulmão apresentado e estimular uma resposta mais forte de células T específicas do tumor precisa ser abordado para melhorar o efeito curativo da imunoterapia do câncer de pulmão.

Nos últimos anos, a terapia com anticorpos do ponto de verificação teve um avanço na imunoterapia tumoral, incluindo CTLA-4, PD - 1 e PD - L1. uma série de estudos clínicos revelou que a terapia de anticorpo PD-1 e PD-L1 para NSCLC avançado, especialmente no carcinoma escamoso do pulmão, tem um bom efeito de tratamento e a taxa de resposta objetiva da doença atinge 10-23%. A terapia DC/CIK autóloga tem sido amplamente realizada em casa e tem uma boa segurança comprovada por muitas práticas clínicas. impedindo a progressão do tumor até agora. Alguns hospitais adotaram a solução de lise de células tumorais ou peptídeo de proteína de molécula única/tecnologia CIK unida por DC, o que significa carregar a lise de células tumorais ou peptídeo de proteína de molécula única como um antígeno tumoral para unir DC com CIK induzido in vitro ao mesmo tempo. à terapia CIK sozinha, a terapia unitária pode não apenas danificar o tumor de forma não específica, mas também induzir o corpo a produzir uma resposta imune específica do tumor. DC, levando a antígeno efetivo limitado apresentado por DC para linfócitos T. Além disso, a proteína de longevidade do antígeno tumoral pode existir por muito tempo no crescimento natural das células tumorais e pode ser reconhecida pelos pacientes por sua própria organização, portanto, a tolerância imunológica inibe a resposta imune afetando o efeito de matar o tumor. O polipeptídeo de proteína de molécula única induz apenas uma resposta imune específica a um único ou alguns antígenos tumorais, não ao antígeno tumoral mutado, resultando na fuga do tumor. Precisamos desenvolver novos tratamentos celulares porque a terapia DC/CIK autóloga não pode produzir uma resposta imune eficaz, para fornecer um novo candidato alternativo para unir a terapia de anticorpo de checkpoint no futuro.

Recentemente, a equipe do Dr. Hu Hong-Ming apresentou uma estratégia inovadora de tratamento do câncer: o uso do papel da autofagia para capturar o antígeno do tumor para a preparação da vacina contra o tumor. Nessa estratégia, o bloqueio da atividade proteassômica de células tumorais cultivadas in vitro tratadas com Bortezomib (inibidores de proteassoma) causa enriquecimento de proteínas de vida curta (SLiPs) e proteínas mal dobradas (DRiPs) no autofagossomo, denominado corpúsculo de DRibbles. Vacina contra o tumor feita a partir da coleta dessa preparação de corpúsculos DRibbles, também conhecida como vacina DRibble. proteínas vivas que não podem ser cruzadas apresentadas a DC de forma eficiente. Essas proteínas de vida curta evitam ser degradadas pelo proteassoma na vacina DRibble e acondicionadas em vesículas de autofagossomos com estrutura de membrana dupla. Essas vesículas contêm moléculas endógenas de sinalização de risco (como HSP90, HMGB1, etc.), podem efetivamente desencadear a resposta imune congênita. Portanto, ao co-cultivar com uma vez a vacina DRibble, DC pode efetivamente ingerir a vacina DRibble e apresentar antígeno relacionado ao tumor na superfície DC, combinando-se com moléculas MHC para ativar células T, resultando na resposta imune. Em comparação com a vacina de câncer de pulmão inteiro, as vacinas de câncer de pulmão DRibble podem fornecer uma gama mais ampla de antígenos associados a tumores, fazendo com que o corpo não mantenha mais a tolerância pela falta de cruzamento apresentado, o que pode causar uma forte resposta imune. A equipe do Dr. Hu Hong Ming também descobriu que o Dribble alogênico pode induzir uma resposta imune igualmente eficaz em comparação com a vacina DRibble de células tumorais autólogas e a regressão do tumor, o resultado foi confirmado em vários modelos de tumor. Devido à falta de moléculas clássicas do MHC, as proteínas da vacina DRibble podem ser rapidamente degradadas por DC, e a vacina DRibble alogênica não induziria efeitos adversos devido à indução da resposta imune do aloenxerto, preservando sua segurança e eficácia.

A superfície DRibble tem um grande número de ligantes moleculares alvo de DC, combinam-se diretamente com células xDC com alta expressão CLEC9A na superfície. As células xDC podem cruzar eficientemente o antígeno presente para DC, portanto, podem melhorar a eficiência de apresentar o antígeno DRibble. Além disso, a resposta imune induzida por DRibble tem memória imunológica e identifica uma ampla variedade de antígenos específicos do tumor, amplificará a proteção contra a regeneração das células tumorais e impedirá a fuga do tumor quando estimulado novamente. Por centros de câncer de Providence nos Estados Unidos por quase 10 anos de pesquisa , a segurança do DRibble foi totalmente validada por Ⅰ/Ⅱ ensaios clínicos.

Com base na fundamentação da pesquisa acima, nosso projeto pretende realizar as seguintes pesquisas: 1. O efeito curativo e a influência da sobrevida global de pacientes com NSCLC em estágio avançado após receberem a nova vacina DRibble e em comparação com a eficácia da terapia DC/CIK existente, 2. Estudo adicional do mecanismo dos efeitos da terapia da vacina Dribble em células de câncer de pulmão humano, análise do sistema e avaliar o efeito curativo clínico e valor de promoção.

Objetos de pesquisa: este estudo pretende incluir câncer de pulmão de células não pequenas sem período ⅢA/ⅢB/Ⅳ sem prostatectomia radical (cerca de 60% do número total), pacientes que receberam 2-6 cursos de quimioterapia, aceitam ou não aceitam radioterapia e fase de controle da doença. Os pacientes selecionados foram divididos aleatoriamente em nova imunoterapia e grupo de tratamento DC/CIK convencional.

Esquema terapêutico: Este ensaio de vacina alogênica DRibble se une com DC/CIK ou DC/CIK sozinho para tratamento de estágio IIIA ou B NSCLC. Serão estudados dois braços. 30 pacientes serão randomizados para os braços 1 e 2.

Braço1: Vacina DRibble com DC/CIK(O grupo experimental) Braço2: DC/CIK(O grupo de controle) Métodos e procedimentos

1. Aprovação do comitê de ética hospitalar.
2. Recrutar os pacientes apropriados de acordo com os critérios de inclusão e exclusão.
3. Assine o consentimento informado do paciente
4. A preparação de vacinas de câncer de pulmão DRibble
5. Coleta de amostras de sangue: coletar 10 ml de sangue periférico dos pacientes, separar PBMC como amostras de referência antes do tratamento.
6. Dia 1: grupo DRibble guiado por ultrassom em pacientes com linfonodos inguinais sob a vacina de DRibble injetável, o grupo controle sem injeções
7. Dia 8: coletar 50 ml de sangue periférico e separar monócitos e linfócitos
8. Intensificar a amplificação de células imunes (centro de tratamento biológico): usando ativação de anticorpos CD3, IL - 2 promove a proliferação de linfócitos para as células mortas; GM-CSF induz diferenciação de células mononucleares para DC, grupo de tratamento imunológico conjunto para DRibble co-cultura de vacina com células DC para Unidade de Drible 24h com grupo DC/CIK.
9. Identificação da célula imune (laboratório clínico, centro de tratamento biológico): contagem do número de células, atividade celular, marcadores de superfície.
10. Detecção de células imunes microbianas (laboratório clínico, centro de tratamento biológico): bactérias, micoplasmas e endotoxinas.
11. 20-22 dias: células imunes de volta aos pacientes: células de lavagem com soro fisiológico, retorno venoso após suspensão, dentro de um período de tratamento por várias vezes.
12. 55 dias: coletar 10 ml de sangue periférico, após a separação de PBMC in vitro induzido a DC, cocultivar com DRibble e injeção subcutânea no 60º dia.
13. Dia 75: coletar 10 ml de sangue periférico, separar PBMC e detectar capacidade de resposta imune de células T.

Avaliação do sistema do efeito terapêutico e valor de promoção do drible: 1. A avaliação clínica do efeito curativo: comparando o grupo experimental e o grupo controle de sobrevida livre de progressão e sobrevida global, desenhando a curva de sobrevida e analisados ​​estatisticamente. 2. avaliando a resposta imune do DRibble, comparando o sangue periférico coletado pela primeira vez com o sangue periférico tratado e o estágio de acompanhamento, a função imune detectada dos testes incluídos principalmente abaixo: nível de teste in vitro de células T específicas do DRibble no sangue periférico antes e depois o tratamento, a fim de deixar claro que o antígeno produziu resposta imune específica; cultura de células T específicas in vitro, realização de experimentos de reconhecimento e tumores autólogos de pacientes (se separados com sucesso) e múltiplas cepas de células de câncer de pulmão isoladas de pacientes in vitro, a fim de deixar claro que as células T específicas geradas pelo grupo experimental podem reconhecer muitos cepas de células de câncer de pulmão, significa que as células T específicas DRibble alogênicas podem responder a diferentes células tumorais do paciente. 3. Índices de avaliação de segurança: reação adversa(Vermelhidão e inchaço, dor, erupções cutâneas, coceira, etc. Reações alérgicas);O índice de exame de sangue está de acordo com o padrão(Sangue de rotina, função hepática e renal, eletrólito, etc); A qualidade de vida (Peso e IMC, nível de proteína no sangue, grau de força física, avaliação psicológica, emocional, etc).