Лечение распространенного рака легкого антигеном Dribbles путем нацеливания на активацию Т-клеток

Злокачественные опухоли стали ведущей причиной смерти людей, а убийцей номер один среди злокачественных опухолей является рак легких. Усиление загрязнения окружающей среды сопровождается ростом заболеваемости раком легких и высокой смертностью, что самое худшее, 5-летняя выживаемость составляет всего около 15%, что составляет первое место среди злокачественных опухолей. остановить растущее внимание правительств и бизнеса из-за неэффективного сдерживания опухолевой угрозы для жизни и здоровья людей на традиционных трех методах лечения (хирургия, лучевая терапия и химиотерапия). Биологическая и иммунотерапия была признана журналом Science одним из десяти крупных прорывов в 2013 году и считается новым направлением развития лечения рака в 21 веке.

Существующее иммунное лечение в основном включает в себя: адоптивную иммунную терапию, терапию противоопухолевой вакциной, иммунную контрольную точку-антителотерапию и другую вспомогательную терапию, а адоптивная иммунотерапия была исследована и разработана ранее, кроме того, это наиболее зрелое лечение среди этих методов лечения. Адоптивная иммунотерапия проводилась во многих отделениях, в первую очередь, это иммунотерапия аутологичными DC-CIK, которая называется иммунотерапией дендритных клеток (Dendritic cell, DC) и клеток-киллеров, индуцированных цитокинами (Cytokine Induced Killer, CIK). Принцип этой технологии заключается в следующем: разделение моноцитов и лимфоцитов периферической крови человека, затем их аугментация и активация различными цитокинами in vitro (например, ИФН-гамма, ИЛ-1, ИЛ-2, анти-CD3 mAb) до смешанные лимфоциты с антигенпрезентирующими и широким спектром действия по уничтожению опухолевых клеток. Усиливающий активированный DC-CIK внутривенно вводят обратно пациентам, высвобождая активные вещества, такие как перфорин клеток CIK и зерновой фермент B, в опухолевые клетки после объединения с опухолевыми клетками в организме, что растворяет опухолевые клетки. Между тем секреция различных цитокинов, таких как ИЛ-2, ИФН-гамма и ФНО-альфа, повышает иммунную функцию организма и придает роль противоопухолевой функции.

Существующий литературный отчет и наше предыдущее исследование в центре биологической обработки показали хорошую безопасность, небольшие побочные эффекты и хорошую переносимость для подавляющего большинства пациентов. Что касается лечебного эффекта, текущий отчет показывает, что технология DC-CIK оказывает хороший лечебный эффект в первую очередь при лейкемии, лимфоме, раке яичников, раке желудка и т. д., за исключением рака легких. Это может быть из-за сложного антигена опухоли рака легких или слабого опухолеспецифический Т-клеточный ответ. Как улучшить эффективность представленного антигена рака легкого и стимулировать более сильный опухолеспецифический Т-клеточный ответ, необходимо решить для улучшения лечебного эффекта иммунотерапии рака легкого.

В последние годы терапия антителами контрольных точек совершила прорыв в иммунотерапии опухолей, включая CTLA-4, PD-1 и PD-L1. ряд клинических исследований показал, что терапия антителами PD-1 и PD-L1 при распространенном НМРЛ, особенно при плоскоклеточной карциноме легкого, имеет хороший лечебный эффект, а показатель объективного ответа на заболевание достигает 10-23%. Аутологичная терапия DC/CIK широко применяется в стране и имеет хорошую безопасность, подтвержденную многими клиническими практиками. Из-за отсутствия эффективного опухолевого антигена нет крупных рандомизированных двойных слепых исследований, подтверждающих ее роль в увеличении выживаемости пациентов и предотвращение прогрессирования опухоли до сих пор. В некоторых больницах принят раствор для лизиса опухолевых клеток или одномолекулярный белковый пептид/DC объединенная технология CIK, что означает загрузку лизиса опухолевых клеток или одномолекулярного белкового пептида в качестве опухолевого антигена для соединения DC с индуцированным in vitro CIK одновременно. Для терапии только CIK единичная терапия может не только неспецифически повреждать опухоль, но и индуцировать организм для выработки опухолеспецифического иммунного ответа. ДК, что приводит к ограниченному эффективному антигену, презентируемому ДК Т-лимфоцитам. Кроме того, белок долголетия опухолевого антигена может длительное время существовать в естественном росте опухолевых клеток и может распознаваться пациентами по своей собственной организации, поэтому иммунная толерантность подавляет иммунный ответ, влияющий на эффект уничтожения опухоли. Одномолекулярный белковый полипептид индуцирует специфический иммунный ответ только на один или несколько опухолевых антигенов, а не на мутировавший опухолевой антиген, что приводит к ускользанию опухоли. Нам необходимо разработать новые клеточные методы лечения, поскольку аутологичная терапия DC/CIK не может вызвать эффективный иммунный ответ, чтобы предоставить новый альтернативный кандидат для объединения терапии антителами контрольных точек в будущем.

Недавно команда доктора Ху Хун-Мина предложила инновационную стратегию лечения рака: использование роли аутофагии для захвата опухолевого антигена для приготовления противоопухолевой вакцины. В этой стратегии блокирование протеасомной активности культивируемых in vitro опухолевых клеток, обработанных бортезомибом (ингибиторами протеасом), вызывает обогащение короткоживущих белков (SLiP) и белков с неправильной укладкой (DRiP) в аутофагосомах, называемых тельцами DRibbles. Противоопухолевая вакцина, полученная путем сбора этих препаратов корпускул DRibble, также известна как вакцина DRibble. живые белки, которые не могут быть эффективно перекрестно представлены DC. Эти короткоживущие белки избегают деградации протеасомой в вакцине DRibble и упаковываются в везикулы аутофагосом с двойной мембранной структурой. Эти везикулы содержат эндогенные сигнальные молекулы риска (такие как HSP90, HMGB1 и др.), которые могут эффективно запускать врожденный иммунный ответ. Следовательно, при совместном культивировании с однократной вакциной DRibble DC могут эффективно поглощать вакцину DRibble и презентировать антиген, связанный с опухолью, на поверхности DC, объединяясь с молекулами MHC для активации Т-клеток, что приводит к иммунному ответу. По сравнению с цельной вакциной против рака легких вакцины против рака легких DRibble могут обеспечить более широкий спектр антигенов, ассоциированных с опухолью, заставляя организм больше не сохранять толерантность к отсутствию перекрестного представления, что может вызвать сильный иммунный ответ. Команда доктора Ху Хун Мина также обнаружила, что аллогенный Dribble может вызывать столь же эффективный иммунный ответ по сравнению с аутологичными опухолевыми клетками. Вакцина DRibble и регрессия опухоли, результат был подтвержден на нескольких моделях опухолей. Из-за отсутствия классических молекул MHC белки вакцины DRibble могут быть быстро расщеплены ДК, а аллогенная вакцина DRibble не будет вызывать побочных эффектов из-за индукции аллотрансплантатного иммунного ответа, сохраняя при этом свою безопасность и эффективность.

Поверхность DRibble имеет большое количество целевых молекулярных лигандов DC, непосредственно сочетающихся с клетками xDC с высокой экспрессией CLEC9A на поверхности. Клетки xDC могут эффективно скрещивать презентирующий антиген с DC, таким образом, повышая эффективность презентации антигена DRibble. Кроме того, иммунный ответ, вызываемый DRibble, имеет иммунную память и идентифицирует широкий спектр опухолеспецифических антигенов, он будет усиливать действие против регенерации опухолевых клеток и предотвращать выход опухоли при повторной стимуляции. Онкологические центры Providence в США в течение почти 10 лет исследований , безопасность DRibble была полностью подтверждена клиническими испытаниями Ⅰ/Ⅱ.

Основываясь на вышеуказанной исследовательской базе, наш проект намерен провести следующие исследования: 1. Лечебный эффект и влияние на общую выживаемость пациентов с поздней стадией НМРЛ после получения новой вакцины DRibble и по сравнению с существующей эффективностью терапии DC/CIK, 2. Дальнейшее изучение механизма воздействия терапии вакциной Dribble на клетки рака легких человека, системный анализ и оценка клинического лечебного эффекта и ценности продвижения.

Объекты исследования: в данное исследование предполагается включить немелкоклеточный рак легкого ⅢA/ⅢB/Ⅳ периода без радикальной простатэктомии (около 60% от общего числа), пациентов, получивших 2-6 ​​курсов химиотерапии, принимающих или не принимающих лучевую терапию и этап борьбы с болезнью. Отобранные пациенты были случайным образом разделены на новую группу иммунотерапии и обычную группу лечения DC/CIK.

Терапевтический график: Это испытание аллогенной вакцины DRibble объединяется с DC/CIK или только DC/CIK для лечения НМРЛ стадии IIIA или B. Будут изучены две руки. 30 пациентов будут рандомизированы в группы 1 и 2.

Группа 1: вакцина DRibble с DC/CIK (экспериментальная группа) Группа 2: DC/CIK (контрольная группа) Методы и процедуры

1. Одобрение больничного комитета по этике.
2. Набор соответствующих пациентов в соответствии с критериями включения и критериями исключения.
3. Подписать информированное согласие пациентов
4. Приготовление вакцины против рака легких DRibble
5. Сбор образцов крови: собрать 10 мл периферической крови пациентов, отделить РВМС, как и перед лечением, эталонные образцы.
6. День 1: группа DRibble под контролем УЗИ у пациентов с поражением паховых лимфатических узлов на фоне введения вакцины DRibble, контрольная группа без инъекций
7. День 8: собрать 50 мл периферической крови и разделить моноциты и лимфоциты.
8. Интенсифицировать амплификацию иммунных клеток (центр биологической обработки): используя активацию антител к CD3, IL-2 способствует пролиферации лимфоцитов для клеток-убийц; GM-CSF индуцирует дифференцировку мононуклеарных клеток для DC, объединенная группа иммунного лечения для совместной культуры вакцины DRible с клетками DC для 24 часа в капельном блоке с группой DC/CIK.
9. Идентификация иммунных клеток (клиническая лаборатория, центр биологической очистки): подсчет количества клеток, клеточной активности, поверхностных маркеров.
10. Обнаружение микробных иммунных клеток (клиническая лаборатория, центр биологической очистки): бактерий, микоплазм и эндотоксинов.
11. 20-22 день: иммунные клетки возвращаются больным: отмывка клеток физиологическим раствором, венозный возврат после суспензии, за период лечения в несколько раз.
12. 55 дней: собрать 10 мл периферической крови после выделения РВМС in vitro, индуцированных ДК, совместно культивировать с DRibble и подкожной инъекцией на 60-й день.
13. День 75: собрать 10 мл периферической крови, отделить РВМС и определить способность Т-клеток к иммунному ответу.

Системная оценка терапевтического эффекта и стимулирующей ценности Dribble: 1. Клиническая оценка лечебного эффекта: сравнение экспериментальной и контрольной групп выживаемости без прогрессирования и общей выживаемости, построение кривой выживаемости и статистический анализ. 2. оценка иммунного ответа DRibble, сравнение периферической крови, собранной в первый раз, с обработанной периферической кровью и последующая стадия, иммунная функция, обнаруженная при тестировании, в основном включена ниже: тестирование in vitro уровня DRibble-специфических Т-клеток в периферической крови до и после лечение, чтобы очистить антиген, вызывающий специфический иммунный ответ; культивирование специфических Т-клеток in vitro, проведение эксперимента по распознаванию и аутологичной опухоли пациентов (в случае успешного отделения) и множественных штаммов клеток рака легких, выделенных от пациентов in vitro, чтобы прояснить, что специфические Т-клетки, созданные экспериментальной группой, могут распознавать многие штаммов клеток рака легкого означает, что аллогенные DRibble-специфические Т-клетки могут реагировать на опухолевые клетки разных пациентов. 3. Показатели оценки безопасности: побочные реакции (покраснение и отек, боль, кожная сыпь, зуд и т. д. Аллергические реакции); показатель анализа крови соответствует стандарту (рутинная кровь, функция печени и почек, электролит и т. д.); Качество жизни (вес и ИМТ, уровень белка в крови, степень физической силы, психологическая, эмоциональная оценка и т. д.).