2005년 잔지바르에서 Falciparum 말라리아에 대한 Artesunate + Amodiaquine 대 Artemether-lumefantrine의 효능 (ACOII)

연구 장소에서 말라리아의 임상 징후를 나타내는 적절한 연령 그룹의 모든 어린이를 가능한 연구 대상으로 간주했습니다. 이 아이들의 보호자는 동의서 양식에 따라 스와힐리어로 구두로 연구에 대한 정보를 받았습니다. 연구에 참여하지 않으려는 사람들은 현지 표준 절차에 따라 치료를 받았습니다.

0일째에 환자는 Giemsa 염색된 혈액 필름에서 광학 현미경을 사용하여 기생충에 대해 테스트되었습니다. 자세한 임상 병력과 겨드랑이 온도를 포함한 임상 검사를 평가했습니다. 헤모글로빈을 평가하고 기생충의 유전형 분석과 다양한 항말라리아 약물의 혈중 농도 측정을 위해 각 어린이의 여과지에 혈액 샘플을 수집했습니다.

보호자는 1일, 2일, 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 35일 및 42일에 자녀를 연구 장소로 다시 데려오도록 요청받았습니다. 그렇게 하지 않으면 적절한 후속 조치를 보장하기 위해 가정을 방문했습니다. 각 후속 조치에서 연구자는 임상 보고서 양식(CRF)을 주의 깊게 작성하면서 수반되는 약물 및 부작용에 대해 질문했습니다.

14일에서 42일 사이의 후속 조치 중에 이전에 연구에 등록한 어린이가 열이 있는 경우 모든 검사 및 검사는 0일과 같이 실행되었습니다. 어린이가 임상 및 기생충학적으로 말라리아로 다시 진단되면 치료를 받았습니다. 새로운 감염으로. 후속 기간 동안 중증 말라리아로 진단되면 환자는 구조 치료(경구 또는 정맥 퀴닌)를 받고 연구에서 제외되었습니다. 등록된 아동이 사이트에 제시될 때마다 CRF는 임상 및 검사실 상태, 제공된 치료 및 가능한 부작용과 관련하여 완료되었습니다.

임상 및 실험실 평가에는 다음이 포함됩니다.

말라리아 도말: Giemsa 염색된 두꺼운 혈액 필름을 숙련된 현미경 전문가가 연구 현장에서 전기 또는 햇빛 현미경을 사용하여 검사했습니다. 기생충의 수는 두꺼운 혈액막에서 200개의 백혈구에 대해 관찰된 기생충의 수로 계산되었고 올바른 경우에 대해 CRF에 기록되었습니다. 슬라이드는 중앙에서 품질 관리 재확인(모든 슬라이드의 10%)을 위해 저장되었습니다.

헤모글로빈: 큐벳에서 채취한 혈액 샘플을 사용하여 HaemoCue™ 방법으로 헤모글로빈 수치를 측정했습니다. Hb 수준은 각 경우에 대해 CRF에 기록되었습니다.

전체 혈액 사진(FBP) 및 간 기능 검사(LFT): FBP 및 LFT는 Kivunge 연구 사이트 하위 모집단에서만 수행되었습니다(GLP 하위 연구). FBP는 Cell-Dyn 1700™ 혈액학 분석기(Abbott Laboratories, USA)를 사용하여 얻었다. ALT, AST, 감마-GT, 알부민 및 빌리루빈을 포함한 LFT는 BTS-310™ 광도계 UV-VIS(BioSystems, 스페인)를 사용하여 얻었습니다.

온도 및 임상 병력: 의사/의료진은 전자 체온계를 사용하여 환자의 겨드랑이 온도를 측정하고 상세한 임상 병력을 기록하고 임상 검사를 수행했습니다.

PCR 여과지 샘플: Whatman FTA 여과지에서 혈액 샘플을 수집했습니다. 건조 시 각 여과지 샘플은 정기적으로 -20ºC 장기 보관을 위해 Kivunge로 옮길 때까지 -20ºC(Kivunge) 또는 +4ºC(Micheweni)에서 별도의 비닐 봉투에 보관했습니다.

HPLC 샘플(Kivunge만 해당): FBP 및 LFT 테스트를 위해 0일과 7일에 각 환자로부터 약 5ml의 정맥혈을 채취했습니다. ASAQ 그룹에서는 아모디아퀸 수준의 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석을 위해 특수 여과지에 이 혈액 100µl를 수집했습니다. AL 그룹에서 100μl의 혈장(10분 동안 >3000rpm에서 원심분리로 분리)을 루메판트린 수준의 HPLC 분석을 위해 특수 여과지에 수집했습니다. 남은 모든 혈장(최소 2ml)을 수집하여 백업으로 -20ºC에 보관했습니다.

분자 분석: P. falciparum 감염의 다양성에 대한 가장 유익한 단일 유전자 마커로 간주되는 메로조이트 표면 단백질 2(msp2)의 PCR 유전형 분석을 수행하여 재감염과 진정한 재발을 구별했습니다. paired PCR 결과는 0일과 14일부터 42일까지 재발성 기생충혈증 발생 시점 사이에 비교되었습니다. msp2의 다형성 반복 블록 3의 외부 보존 영역은 표준 프로토콜을 사용하여 FC27 및 IC/3D7 두 대립형질 패밀리에 특이적인 올리고뉴클레오티드 프라이머로 두 개의 중첩 반응이 뒤따르는 초기 반응에서 증폭되었습니다. pfmdr1 Y86N 및 pfcrt K76T 유전자의 SNP(Single Nucleotide Proteins) 분석은 확립된 AluI 제한 기반 PCR-RFLP 프로토콜에 따라 수행되었습니다. 모든 분자 분석은 스웨덴 KI의 Malaria Research Unit에서 수행되었습니다.