ザンジバルにおける熱帯熱マラリアに対する Artesunate + Amodiaquine 対 Artemether-lumefantrine の有効性、2005 (ACOII)

研究現場でマラリアの臨床徴候を示している適切な年齢層のすべての子供は、可能な研究対象と見なされました。 これらの子供の保護者は、インフォームド コンセント フォームに従って、スワヒリ語で口頭で研究について知らされました。 研究への参加を望まない人は、現地の標準的な手順に従って治療されました。

0日目に、患者はギムザ染色された血液フィルムの光学顕微鏡を使用して寄生虫について検査されました。 詳細な病歴と腋窩温を含む臨床検査が評価されました。 ヘモグロビンを評価し、各子供の血液サンプルをろ紙に採取して、寄生虫の遺伝子型を特定し、さまざまな抗マラリア薬の血中濃度を測定しました。

保護者は、1 日目、2 日目、3 日目、7 日目、14 日目、21 日目、28 日目、35 日目、42 日目に子供を研究施設に連れ戻すように依頼されました。 そうしなかった場合は、適切なフォローアップを保証するために自宅を訪問しました。 フォローアップごとに、治験責任医師は併用薬と有害事象について質問し、臨床報告書 (CRF) に注意深く記入しました。

14日目から42日目までのフォローアップ中に、以前に研究に登録されていた子供が発熱した場合、すべての検査と検査は0日目と同じように行われました.子供が臨床的および寄生虫学的にマラリアと再び診断された場合、彼は治療を受けました.新たな感染症として フォローアップ期間中に重度のマラリアと診断された場合、患者はレスキュー治療（経口または静脈内キニーネ）を受け、研究から除外されました。 登録された子供がサイトに現れるたびに、CRF は臨床および実験室の状態、与えられた治療、および考えられる有害事象に関して完了しました。

臨床および実験室評価には以下が含まれます。

マラリア塗抹標本: ギムザ染色された厚い血液フィルムは、経験豊富な顕微鏡学者によって研究サイトで電気顕微鏡または太陽光顕微鏡を使用して検査されました。 寄生虫の数は、厚い血液膜で 200 個の白血球に対して見られる寄生虫の数として計算され、正しい機会について CRF に記録されました。 スライドは、品質管理の二重チェック (全スライドの 10%) のために中央で保存されました。

ヘモグロビン: ヘモグロビン レベルは、キュベットに採取した血液サンプルを使用して、HaemoCue™ メソッドで測定しました。 Hbレベルは、それぞれの場合にCRFに記録されました。

全血画像 (FBP) および肝機能検査 (LFT): FBP および LFT は、Kivunge 研究サイトの部分集団のみで実施されました (GLP 部分研究)。 FBP は、Cell-Dyn 1700™ Hematology Analyzer (Abbott Laboratories、米国) を使用して取得しました。 ALT、AST、ガンマ GT、アルブミン、ビリルビンを含む LFT は、BTS-310™ 光度計 UV-VIS (BioSystems、スペイン) を使用して取得しました。

体温と病歴: 医師/職員は、電子体温計を使用して患者の腋窩体温を測定し、詳細な病歴を記録し、臨床検査を実施しました。

PCR ろ紙サンプル: 血液サンプルは、Whatman FTA ろ紙で収集されました。 乾燥したら、各ろ紙サンプルを個別のビニール袋に入れ、-20ºC (Kivunge) または +4ºC (Micheweni) で保管し、-20ºC で長期保管するために定期的に Kivunge に移しました。

HPLC サンプル (Kivunge のみ): FBP および LFT テストのために、0 日目と 7 日目に各患者から約 5ml の静脈血を採取しました。 ASAQ グループでは、アモジアキン レベルの高圧液体クロマトグラフィー (HPLC) 分析のために、この血液 100 μl を特別なろ紙に採取しました。 AL グループでは、ルメファントリン レベルの HPLC 分析用に、100 μl の血漿 (>3000 rpm で 10 分間の遠心分離により分離) を特殊なろ紙に収集しました。 残りのすべての血漿 (最低 2ml) を採取し、バックアップとして -20ºC で保存しました。

分子分析: メロゾイト表面タンパク質 2 (msp2) の PCR ジェノタイピングは、熱帯熱マラリア原虫感染の多重度に関する最も有益な単一遺伝子マーカーと考えられており、再感染と真の再発を区別するために実施されました。 対になった PCR の結果は、0 日目と 14 日目から 42 日目までの寄生虫血症の再発時に比較されました。 msp2 の多型反復ブロック 3 の外側の保存領域を最初の反応で増幅し、続いて標準的なプロトコルを使用して、2 つの対立遺伝子ファミリー FC27 および IC/3D7 に特異的なオリゴヌクレオチド プライマーを使用した 2 つのネステッド反応を行いました。 pfmdr1 Y86N および pfcrt K76T 遺伝子の一塩基タンパク質 (SNP) 分析は、確立された AluI 制限に基づく PCR-RFLP プロトコルに従って行われました。 すべての分子分析は、マラリア研究ユニット、KI、スウェーデンで行われました。