Wirksamkeit von Artesunat + Amodiaquin gegenüber Artemether-Lumefantrin bei Falciparum-Malaria in Sansibar, 2005 (ACOII)

Alle Kinder in der richtigen Altersgruppe, die sich am Studienort mit klinischen Anzeichen von Malaria vorstellten, wurden als mögliche Studienteilnehmer angesehen. Die Erziehungsberechtigten dieser Kinder wurden gemäß der Einverständniserklärung mündlich auf Suaheli über die Studie informiert. Diejenigen, die nicht bereit waren, an der Studie teilzunehmen, wurden gemäß dem lokalen Standardverfahren behandelt.

Am Tag 0 wurde der Patient unter Verwendung von Lichtmikroskopie auf Giemsa-gefärbten Blutausstrichen auf Parasiten getestet. Eine ausführliche Anamnese und eine klinische Untersuchung inklusive axillarer Temperatur wurden erhoben. Hämoglobin wurde bestimmt und Blutproben wurden auf Filterpapier für jedes Kind zur Genotypisierung der Parasiten sowie zur möglichen Bestimmung der Blutspiegel verschiedener Antimalariamedikamente gesammelt.

Der Vormund wurde gebeten, sein Kind an den Tagen 1, 2, 3, 7, 14, 21, 28, 35 und 42 zum Studienzentrum zurückzubringen. Wenn sie dies nicht taten, wurden sie zu Hause besucht, um eine ordnungsgemäße Nachsorge sicherzustellen. Bei jeder Nachuntersuchung fragte der Prüfarzt nach begleitender Medikation und unerwünschten Ereignissen und füllte sorgfältig das klinische Berichtsformular (CRF) aus.

Wenn während der Nachsorge zwischen Tag 14 und 42 bei einem zuvor in die Studie aufgenommenen Kind Fieber auftrat, wurden alle Tests und Untersuchungen wie am Tag 0 durchgeführt. Wenn bei dem Kind erneut Malaria klinisch und parasitologisch diagnostiziert wurde, wurde es behandelt als Neuinfektion. Wenn während der Nachbeobachtungszeit eine schwere Malaria diagnostiziert wurde, erhielt der Patient eine Notfallbehandlung (oral oder intravenös verabreichtes Chinin) und wurde aus der Studie genommen. Jedes Mal, wenn ein angemeldetes Kind am Zentrum vorgestellt wurde, wurde der CRF in Bezug auf den klinischen und Laborstatus, die durchgeführte Behandlung und mögliche unerwünschte Ereignisse ausgefüllt.

Klinische und Laborbewertungen umfassten:

Malaria-Abstrich: Giemsa gefärbte dicke Blutausstriche, die von einem erfahrenen Mikroskopiker mit einem Elektro- oder Sonnenlichtmikroskop am Studienort untersucht wurden. Die Anzahl der Parasiten wurde als die Anzahl der Parasiten, die gegen 200 Leukozyten im dicken Blutausstrich gesehen wurden, berechnet und im CRF für den richtigen Anlass aufgezeichnet. Die Objektträger wurden zur doppelten Qualitätskontrolle (10 % aller Objektträger) zentral gelagert.

Hämoglobin: Die Hämoglobinwerte wurden mit der HaemoCue™-Methode unter Verwendung von Blutproben gemessen, die auf Küvetten entnommen wurden. Die Hb-Werte wurden für jede Gelegenheit im CRF aufgezeichnet.

Vollblutbild (FBP) und Leberfunktionstest (LFT): FBP und LFT wurden nur in der Subpopulation des Kivunge-Studienzentrums (GLP-Substudie) durchgeführt. FBP wurde unter Verwendung des Cell-Dyn 1700 TM Hematology Analyzer (Abbott Laboratories, USA) erhalten. LFT, einschließlich ALT, AST, Gamma-GT, Albumin und Bilirubin, wurde unter Verwendung des BTS-310 TM Photometer UV-VIS (BioSystems, Spanien) erhalten.

Temperatur und Anamnese: Ein Arzt/Beamter maß die Achseltemperatur des Patienten mit einem elektronischen Thermometer und erhob eine detaillierte Anamnese sowie eine klinische Untersuchung.

PCR-Filterpapierprobe: Blutproben wurden auf Whatman FTA-Filterpapieren gesammelt. Nach dem Trocknen wurde jede Filterpapierprobe in separaten Plastiktüten bei -20 °C (Kivunge) oder +4 °C (Micheweni) gelagert, bis sie regelmäßig zur Langzeitlagerung bei -20 °C nach Kivunge überführt wurde.

HPLC-Proben (nur Kivunge): Etwa 5 ml venöses Blut wurden jedem Patienten an den Tagen 0 und 7 für FBP- und LFT-Tests entnommen. In der ASAQ-Gruppe wurden 100 µl dieses Blutes auf speziellen Filterpapieren für die Analyse der Amodiaquin-Spiegel durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) gesammelt. In der AL-Gruppe wurden 100 µl Plasma (getrennt durch 10-minütige Zentrifugation bei > 3000 U/min) auf speziellen Filterpapieren für die HPLC-Analyse der Lumefantrinspiegel gesammelt. Das gesamte verbleibende Plasma (mindestens 2 ml) wurde gesammelt und als Backup bei -20 °C aufbewahrt.

Molekulare Analysen: Eine PCR-Genotypisierung des Merozoiten-Oberflächenproteins 2 (msp2), das als aussagekräftigster genetischer Einzelmarker für eine Vielzahl von Infektionen mit P. falciparum gilt, wurde durchgeführt, um Reinfektionen von echten Rezidiven zu unterscheiden. Gepaarte PCR-Ergebnisse wurden zwischen Tag 0 und zum Zeitpunkt der rezidivierenden Parasitämie von Tag 14 bis Tag 42 verglichen. Die äußere konservierte Region des polymorphen repetitiven Blocks 3 von msp2 wurde in einer Anfangsreaktion amplifiziert, gefolgt von zwei verschachtelten Reaktionen mit Oligonukleotid-Primern, die für die zwei Allelfamilien FC27 und IC/3D7 spezifisch sind, unter Verwendung eines Standardprotokolls. Die Single Nucleotide Proteins (SNPs)-Analyse der pfmdr1 Y86N- und pfcrt K76T-Gene wurde gemäß etablierten AluI-Restriktions-basierten PCR-RFLP-Protokollen durchgeführt. Alle molekularen Analysen wurden in der Malaria Research Unit, KI, Schweden durchgeführt.